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土壤中过氧化氢酶活性的测定-高锰酸钾滴定法
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3秒自动关闭窗口实验2过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）；一、实验目的；熟悉用滴定法测定过氧化氢酶活性；过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植；可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力；5H2O2+2KMnO4+4H2SO4=5O2+；三、实验器材1材料：植物叶片；2仪器设备：研钵；酸式滴定管；恒温水浴；3试剂：；0.1mol/L高锰酸钾标准液称：取KM
实验2 过氧化氢酶活性测定（高锰酸钾滴定法）
一、 实验目的
熟悉用滴定法测定过氧化氢酶活性。 二、 实验原理
过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中，其活性与植物的代谢强度及抗寒、抗病能力有一定关系；过氧化氢酶（catalase）属于血红蛋白酶，含有铁，它能催化过氧化氢分解为水和分子氧，在此过程中起传递电子的作用，过氧化氢则既是氧化剂又是还原剂。
可根据H2O2的消耗量或O2的生成量测定该酶活力大小。在反应系统中加入一定量（反应过量）的过氧化氢溶液，经酶促反应后，用标准高锰酸钾溶液（在酸性条件下）滴定多余的过氧化氢。即可求出消耗的H2O2的量。
5H2O2+2KMnO4+4H2SO4 = 5O2+2KHSO4+8H2O+2MnSO4
三、实验器材 1材料：植物叶片
2仪器设备： 研钵； 酸式滴定管； 恒温水浴；
3试剂：10% H2SO4； 0.2 mol/L pH7.8磷酸缓冲液；
0.1mol/L 高锰酸钾标准液称：取KMnO4（AR）3.1605g，用新煮沸冷却蒸馏水配制成1000ml；
0.1mol/L H2O2市售30% H2O2大约等于17.6mol/L，取30% H2O2溶液5.68ml，稀释至1000ml。 四、实验步骤
1、酶液提取：取植物叶片2.5g加入pH7.8的磷酸缓冲溶液少量，研磨成匀浆，转移至25ml量筒中，用该缓冲液冲洗研钵，并将冲洗液转至量筒中，用同一缓冲液定容，4000rpm离心15min，上清液即为过氧化氢酶的粗提液。 2、取50ml三角瓶2个（1个测定，另1个为对照），测定瓶加入酶液2.5ml，对照加煮死酶液2.5ml，再加入2.5ml 0.1mol/L H2O2，同时计时，于30℃恒温水浴中保温10min，立即加入10%H2SO42.5ml。
3、 用0.1mol/L KMnO4标准溶液滴定，至出现粉红色（在30min内不消失）为
五、实验结果
酶活性用每g鲜重样品1min内分解H2O2的mg数表示：
过氧化氢酶活性（H2O2mg/g/min）＝（A－B）×Vt×1.7/(W×Vs×t)
式中：A-对照KMnO4滴定ml数； B-酶反应后KMnO4滴定ml数； Vt-提取酶液总量（ml）； Vs-反应时所用酶液量（ml）； W-样品鲜重（g）； t-反应时间（min）；
1.71ml0.1mol/L KMnO4相当于1.7mg H2O2 六、实验思考
过氧化氢酶与哪些生化过程有关?
三亿文库包含各类专业文献、幼儿教育、小学教育、专业论文、各类资格考试、行业资料、文学作品欣赏、应用写作文书、中学教育、实验2 过氧化氢酶活性测定71等内容。　
　通过本实验使同学们了解过氧化氢酶的作用,掌握其测定方法 并比较不同植物或同一植物不同生理状态下过氧化氢酶活性的大小。 二、实验原理过氧化氢酶 (catalase) ... 　植物生理学实验报告 实验题目:过氧化氢酶活性的测定-紫外 线吸收法 姓名 班级 ...根据测量吸光率的变化速度即可测出过氧化氢酶 的活性 二、 实验器具和步骤 ... 　实验二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定 (1)_生物学_自然科学_专业资料。幻灯片 1 实验二、过氧化氢酶的活力和动力学常数测定 ――高锰酸钾滴定法 幻灯片... 　过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾滴定法) 实验 29 过氧化氢酶活性测定(高锰酸钾...R(Fe+2)+H2O2===R(Fe+3OH-)2 R(Fe+3OH-)2+H2O2===R(Fe+2)2+2... 　过氧化氢酶活性测定_其它_计划/解决方案_实用文档。酵母过氧化氢酶(CAT)的测定...2.CAT提取 称取干酵母5g→研磨→加20 mL 0.1 mol/L (pH7.0 )磷酸盐... 　实验40 植物组织中过氧化氢含量及过氧化氢酶活性测定_理学_高等教育_教育专区。...二、过氧化氢酶的活性测定――高锰酸钾滴定法【原理】 过氧化氢酶(CAT)属于... 　在有过氧化氢存在下,过氧化物酶 能使愈创木酚氧化生 植物生理学实验报告 ...目的:学习测定植物组织中过氧化物酶活性的方法。 二、 实验器具和步骤 材料:... 　过氧化氢酶活性测定过氧化氢酶普遍存在于植物的所有组织中, 其活性与植物的代谢...CAT过氧化氢酶活性测定方... 2页 1下载券 实验9-过氧化氢酶活性测... 10... 　实验二 过氧化氢酶Km值的测定_专业资料。1实验二 实验二 过氧化氢酶 Km 值的测定课程名称:生物化学与分子生物学实验课 课程名称:生物化学与分子生物学实验课 与...紫外分光光度法测定植物过氧化氢酶活性_文库下载
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& 紫外分光光度法测定植物过氧化氢酶活性
紫外分光光度法测定植物过氧化氢酶活性
紫外分光光度法测定植物过氧化氢酶活性
农业基础科学
《现代农业科技｝２００９年第２０期
紫外分光光度法测定植物过氧化氢酶活性
杨兰芳庞静彭小兰闰静静
（湖北大学资源环境学院，湖北武汉４３００６２）
摘要为简便快速测定植物过氧化氢酶活性。进行了紫外分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的新方法试验。结果表明：本法操作简便，重现好，相时误差小，不需要特殊的试剂和仪器设备，适合于批量分析；利用硫酸阻止和终止酶促反应，既简化了操作，又减少了误差来源：本法的测定结果与高锰酸钾滴定法的结果呈极显著线性相关，是一种值得推广应用的测定植物过氧化氲酶活性的新方法。
关键词过氧化氢酶；紫外分光光度法；植物；硫酸；高锰酸钾滴定法
中图分类号
Ｑ９４６．８
文献标识码Ａ
文章编号１００７―５７３９（２００９）２０―０３６４―０３
ＭｅａｓｕｒｅｍｅｎｔｏｆＣａｔａｌａｓｅＡｃｔｉｖｉｔＴｉｎ
ＰｌａｎｔｓｂｙＵｉｔｒａｖｉｏｌｅｔＳｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ
ＹＡＮＧＬａｎ－ｆａｎｇＰＡＮＧｊｉｎｇＰＥＮＧＸｉａｏ－ｌａｎ
Ｊｉｎｇ－ｊｔｎｇ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ
ｏｆＫｅｓｏｕｒｃｅｓａｎｄＥｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＨｕｂｅｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＷｕｈａｎＨｕｂｅｉ４３００６２）Ａｂｓｔｒａｃｔ
ＡｎｅｗｍｅａｓｕｒｉｎｇｍｅｔｈｏｄｂｙｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙｗａｓｃｏｎｄｕｃｔｅｄｉｎｏｒｄｅｒｔＯａｎａｌｙｚｅｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｃａｔａｌａｓｅｉｎｐｌａｎｔｓ．Ｔｈｅ
ｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄＷａｓｓｕｉｔａｂｌｅｆｏｒａｎａｌｙｚｉｎｇｓａｍｐｌｅｓｍｂａｔｃｈｅｓａｓｉｔｓ
ｓｉｍｐｌｅｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔｏｐｅｒａｔｉｏｎ，ｈｉｇｈｒｅｐｒｏｄｕｃｉｂｉｌｉｔｙ，ｌｉｔｔｌｅｅｒｒｏｒｓ，ｎｏｓｐｅｃｉａｌ
ａｎｄｅｘｐｅｎｓｉｖｅｒｅａｇｅｎｔｓ．ｅｑｕｉｐｍｅｎｔｓ．ＴｈｅｕｓａｇｅｏｆｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｔＯｐｒｅｖｅｎｔａｎｄｓｔｏｐｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｎｏｔｏｎｌｙｓｉｍｐｌｉｆｉｅｄｔｈｅｏｐｅｒａｔｉｏｎ。ｂｕｔａｌｓｏｒｅｄｕｃｅｄｔｈｅｓｏｕｒｃｅｏｆｅｒｒｏｒｓ．Ｗｉ出ａｖｅｒｙｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｉｎｅａｒｃｏｒｒｅｈｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎｔｈｅｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙａｎｄｐｏｔａｓｓｉｕｍｐｅｒｍａｎｇａｎａｔｅｔｉｔｒａｔｉｏｎ，ｉｔｐｒｏｖｅｄｔｈａｔｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｘｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙｗａｓａｖａｌｕａｂｌｅｍｅｄｌｏｄａｎｄｗｏｒｔｈｐｏｐｕｌａｒｉｚｉｎｇｉｎｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｃａｔａｌａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｐｌａｎｔｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ
ｃａｔａｈｓｅ；ｕｌｔｒａｖｉｏｌｅｔｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ；ｐｌａｎｔ；ｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄ；ｐｏｔａｓｓｉｕｍｐｅｒｍａｎｇａｎａｔｅｔｉｔｒａｔｉｏｎ
过氧化氢酶是植物体内清除过氧化氢的主要酶类【１】，植标定，该溶液的浓度为０．３１７８ｍｏｌ／Ｌ
Ｈ２０２，亦即５．４０２６
物代谢过程会产生活性氧自由基，再转化成过氧化氢，而过
ｍｇ／ｍＬＨ＿０２０
氧化氢对植物细胞具有损伤作用因。过氧化氢酶的主要功能
８％硫酸：吸取４０ｍＬ分析纯浓硫酸缓慢加入约３５０ｍＬ即清除植物代谢过程产生的过氧化氢，从而对植物细胞具有
蒸馏水中。冷却后定容至５００ｍＬ。
保护作用髑。植物过氧化氢酶还与环境污染与胁迫㈣、营养
高锰酸钾溶液：称取分析纯高锰酸钾（ＫＭｎＯ．）３．１６９，溶元素缺乏ｉｓ一、病虫害危害有关【ｔ．１。研究植物过氧化氢酶，可解后定容至１０００ｍＬ，其准确浓度用草酸钠标定。经标定该以认识植物的生长状况、了解植物是否受到损伤、揭示植物溶液浓度为０．０９９０ｍｏｌ／Ｌ１／５Ｈ２０２。
与不良环境的关系以及为植物营养诊断提供依据。因此，探紫外分光光度计：ＵＶ－９１００，北京瑞利分析仪器有限索一种简便快速的测定植物过氧化氢酶活性的方法，具有公司。
重要的科学和实用价值。当前对植物过氧化氢酶活性的测定冷冻离心机：恰菲尔，ＧＬ一２０Ｂ，上海恰菲尔分析仪器有方法，有的需要特殊仪器装置，有的操作和人为误差大，有限公司。的需要昂贵试剂，有的操作繁琐，都不利于批量样品分析和１．３试验方法
快速测定。本试验探索利用紫外分光光度法直接测定植物过
１．３．１植物过氧化氢酶提取液的制备。统一剪取大豆第３氧化氢酶活性，具有简便、快速和不需要特殊试剂和仪器的叶带回室内洗净。用吸水纸吸干水分后称重，然后放进研钵特点．对植物过氧化氢酶的研究具有重要实践意义和运用中加入３ｍＬｐＨ值７．８的磷酸盐缓冲溶液，加入少量石英价值。
砂，在冰浴上研磨成匀浆，再加入５ｍＬ缓冲溶液研磨均匀，ｌ材料与方法转入２５ｍＬ比色管中。并用缓冲溶液少量多次洗涤研钵，洗１．１材料
液并入比色管中。最后用缓冲溶液定容至刻度。摇匀后取约
所用植物为大豆（Ｇｌｙｃｉｎｅ卅删Ｍｅｒｒ．），在大豆结荚期采５ｍＬ溶液于离心管中。成对调节平衡后用冷冻离心机在
取不同环境条件生长的大豆叶片样品６个，分别编号为ｓｌ、４ａＣ４
０００９下离心１０ｍｉｎ，上清液即为过氧化氢酶提取液，
Ｓ２、ｓ３、ｓ４、ｓ５和ｓ６。转入小试管中保存于４０Ｃ冰箱中备用。
１．２试剂与仪器
１．３．２紫外分光光度法测定过氧化氢酶活性。样品测定：取磷酸盐缓冲溶液（ｐＨ值７。８）：称取６５．５２９ＮａｚＨＰＯ． 小试管２支，１支做样品管，１支做对照管。在对照管里依次１２Ｈ２０（分析纯）、２．６６９ＮａＨ２Ｐ０４ ２Ｈ２０（分析纯）、１０９聚乙加１．５ｍＬ缓冲溶液、Ｏ．１ｍＬ酶提取液、０．２ｍＬ蒸馏水、１．０ｍＬ
烯吡咯烷酮（ＰＶＰ，分析纯），用约９００ｍＬ蒸馏水溶解，检查硫酸、Ｏ．２ｍＬ过氧化氢溶液。在样品管里依次加１．５ｍＬ缓冲
ｐＨ值后定容至１０００ｍＬ。
溶液、Ｏ．１ｍＬ酶提取液、１．２ｍＬ蒸馏水，然后加入Ｏ．２ｍＬ过过氧化氢溶液：吸取３００，６过氧化氢（分析纯）１．５ｍＬ，用
氧化氢溶液。立即计时４ｍｉｎ后加入ｌｍＬ硫酸终止反应。然
蒸馏水定容至ｌＯＯｍＬ。用高锰酸钾标定其准确浓度。经过
后在２４０姗处以蒸馏水调零。分别测定样品管与对照管的
基金项目湖北省教育厅重点项目（Ｄ２００９１００９）。
作者简介扬兰芳（１９６４－），男，湖北武汉人，土家族。剐教授，博士，主要从事土壤物质循环度其环境效应方面的研究。
标准曲线：取小试管６支并编号，按表１依次加完各种收稿日期
２００９－０８－０３
试剂后摇匀。然后在２４０ｎｍ处以０号管调零，测定其余各管
Word文档免费下载：（下载1-4页，共4页）
本试验探索利用紫外分光光度法直接测定植物过 氧化氢酶活性,具有简便、快速和不需要特殊试剂和仪器的 特点, 对植物过氧化氢酶的研究具有重要实践意义和运用 价值。...72 安徽农学通报, Anhu i Agri Sci Bu ll1 ): 72- 73 1 1 分光光度法测定植物过氧化氢酶活性的研究李仕飞 1 刘世同 2 周建平 2 罗天雄..., 2011 紫外分光光度法测定土壤过氧化氢酶活性杨兰芳 1,曾巧 1,2,李海波 ...过氧化氢酶 是生物呼吸、 生物代谢过程, 以及土壤动物、 植物根系 [6, 7] ...紫外分光光度法测定植物5_8SrRNA活性_理学_高等教育_教育专区。5_8SrRNA农业基础科学 《现代农业科技}2009年第20期 紫外分光光度法测定植物过氧化氢酶活性杨...紫外分光光度法测定植物过... 3页 5财富值 紫外分光光度法测定植物过......第 期月 过氧化氢酶活性及活 性抑制 的紫外 分光光 度测定 盆垃波 / 摘 ...本文采用紫外分光光度法测定菊花饮的含量,线性范围:10-15μg/ml 。γ=0.9981,回收率=99.22%,RSD%=0.837%,本方法较为灵敏、准确。本文采用紫外分光光度...紫外分光光度法测定利巴韦林注射液的含量_IT/计算机_专业资料 暂无评价因此,植物 组织中 H2O2 含量和过氧化氢酶活性与植物的抗逆性密切相关。本实验用分光光度法测定过 氧化氢含量,利用高锰酸钾滴定法和紫外吸收法测定过氧化氢酶活性...紫外分光光度法-过氧化氢含量的测定_生物学_自然科学_专业资料。紫外分光光度...2.样品提取和测定: (1)称取新鲜植物组织 2~5g 视 H2O2 含量多少而定)按...华西医学19年第1卷第 1 95O孰 、植物的抗逆性密切相关的两个问题
性状，如抗寒，抗旱，抗盐，抗病虫害等。植物体内会产生一定的适应反应。
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