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生活饮用水标准检验方法
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来源/作者：中国标准物质网　　日期：
饮用水的微生物学检验
生活饮用水不仅供日常饮用，也需供日常生活使用。因此，生活饮用水是人们在一生中都需使用的水。在确定有毒物质限值时必须基于饮用者终生用水安全来考虑健康防护，也就是说，饮用者终生使用饮用水，不会带来明显的健康危害。
由于水质直接影响和决定食品的品质，水的检验在食品工作中极为重要，包括物理学性质、化学成分、微生物情况等。
水体是微生物生长和滋生的天然良好培养基，特别是污染的水体中存在大量的有机物质，更适合于各种微生物的生长。水体中的微生物主要来源于土壤以及人类和动物的排泄物及污染；其中的致病性微生物往往是从外界环境污染而来，特别是人和其他温血动物的粪便污染。饮用水中细菌一般来源途径如下。
来源于水的水中细菌有螺旋菌属、弧菌属、假单胞菌属、色杆菌属、、等。来源于土壤的水中细菌有、、等。
矿泉水中的细菌除了有假单胞菌属、产碱菌、、黄杆菌、、、哈夫尼亚菌、气单胞菌等常见菌之外，还有交替单胞菌、水螺菌、新月柄杆菌、鞘氨醇蛋胞菌等不常见的细菌。
水中致病菌微生物有致病性、、、、、、、、、、分枝杆菌、气单胞菌，其他致病菌有阿米巴和藻类。其中，铜绿假单胞菌、嗜肺军团菌、分枝杆菌、气单胞菌能在水中生长。嗜肺军团菌的生长需要水管道中由原生动物形成的生物膜；军团菌在矿泉水中不生长，但铜绿假单胞菌能在矿泉水中生长。其他致病菌一般在水中不生长。
国际上水中微生物检验指标一般如下：①需氧中温菌和冷营菌技术；②大肠菌群计数；③粪大肠菌群和大肠埃希氏菌检验；④粪肠球菌计数；⑤亚硫酸盐还原梭菌检验；⑥铜绿假单胞菌检验；⑦膜过滤法菌落计数。
其中自来水要求大肠菌群、粪大肠菌群、粪肠球菌各＜1个／100毫升；亚硫酸盐还原梭菌＜1个／20毫升；矿泉水要求大肠菌群、粪大肠菌群、粪肠球菌各＜1个／250毫升；亚硫酸盐还原梭菌＜1个／50毫升；铜绿假单胞菌＜1个／250毫升。
水质的检测和评价不可能对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而常常利用指示菌作为水质菌相污染的指标。目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标；水体中的细菌总数（colony forming unit)可表明水体受粪便等污染物污染的情况。饮用水的微生物检验一般包括菌落总数、大肠菌群、耐热大肠菌群和大肠埃希氏菌的检验。
(1)菌落总数 菌落总数是微生物指标之一，水中细菌总数一定程度可指示微生物污染程度，水中大多数细菌并不致病，但自来水消毒后水中细菌总数越少越好。
(2)总大肠菌群 总大肠菌群是饮用水微生物安全性指标，饮用水总大肠菌群未检出，说明饮用水无肠道致病菌存在。水样未检出总大肠菌群时，不必检验大肠埃希氏菌或耐热大肠菌群。
由于大肠菌群的检出准确理解应为：供水系统水处理不完善和水体中含过多营养物质，因此有的改用大肠埃希氏菌和粪大肠菌群作为粪便污染指示菌。在美国，30％的饮用水中有粪大肠菌群出现。由于粪大肠菌群中常有一部分为气单胞菌，因此有的选择粪肠球菌和产气荚膜梭菌作为粪便污染指示菌。水中气单胞菌主要有豚鼠气单胞菌、嗜水气单胞菌、温和气单胞菌。粪肠球菌和产气荚膜梭菌比大肠菌群具有更强的生存能力，且大多数源于粪便，在水中一般不繁殖。因此可用做粪便污染指示菌。
一、菌落总数和大肠菌群检验
检测方法参见国家标准：标准生活饮用水标准检验方法GB/T 6；食品安全国家标准，食品微生物学检验，菌落总数测定GB 0和大肠菌群检验GB0。
1.1样品的采集与保存
采集时注意无菌操作，防止杂菌的污染；盛水的容器在采样前用自来水和洗涤剂洗涤，并用自来水彻底冲洗后用质量分数10％的盐酸溶液浸泡过夜，然后依次用自来水和蒸馏水洗净。灭菌可以采用干热灭菌（160℃/2h)和高压蒸汽灭菌（121℃/15min)两种方式。
(1）自来水样利用干净的纱布擦净水龙头，随后用酒精灯灼烧消毒水龙头周围。将水龙头完全打开，放水5-1Omin，关小水龙头，采集水样；经常使用取水的水龙头，可以放水1-3min。
(2）井水、江水、河水、水库等的样品将无菌采水样瓶浸入距水面10-15cm深处，后拉开瓶塞取水，待水约有4/5后，将瓶塞盖好，从水中取出。
(3）采集化学处理的水样（含余氯）采水样瓶在消毒前，按125mL加入0.lmg Na2S203中和余氯，除去余氯的杀菌作用，121℃ , 20min灭菌备用。
水样采集后应该立即送检，一般不要超过2h，在0-4℃保存不得超过4h。
1.2水质菌落总数的检测
(1）对生活饮用水直接用无菌吸管吸取1mL水样注于无菌平皿中；随后，倾倒温度45℃的营养琼脂培养基10-15mL，混匀，于37℃培养24h，进行计数。每个水样做两次重复，另有空白对照。
(2)对水源水根据实际情况对待测样品进行初步的微生物污染估计，按估计情况对样品进行10倍梯度递增稀释。选择3个适宜稀释梯度，分别用无菌移液管吸取待检样1mL,倾倒入无菌平皿，加入温度45℃的营养琼脂，混匀，冷凝，37℃倒置培养24h，进行平板菌落计数。每个稀释度做两个平皿，要有空白对照。
(3)菌落计数应选取菌落在30-300CFU的平板计数，作为菌落总数的计数的标准。若两个或者三个平板在此范围内，取其平均数；但是，平板内有较大片状菌落时生长时不宜采用；以无片状生的平板计数。具体计数要求和书写方式详见第3章。生活饮用水水质微生物指标及限值（GB )：菌落总数／(CFU/100mL)≤100。
1.3水质大肠菌群数的检测（多管发酵法）
(1)初发酵试验接种量55.5mL即初发酵试验接种水样总量55.5mL，即lOmL接种5管、1mL接种5管、0.1mL接种5管，共采用三个稀释度，15支发酵管。
①在5支装有lOmL双料乳糖蛋白陈培养液（内有小倒管）中，无菌操作，各加lOmL的待测水样；在5支装有单料乳糖蛋白胨培养液的lOmL的试管（内有杜氏倒管）中，无菌操作，加入原水样1mL；另取待测水样注入无菌生理盐水中，稀释为10-1的稀释水样，在5支装有1OmL的单料乳糖蛋白胨培养液的试管（内有杜氏倒管）中，无菌操作加入10-1的待测样品1mL，即选择三个稀释梯度，每一个稀释梯度接种五支试管，共接种15支试管。
②接种管混匀后，置36℃恒温箱内培养24h，观察产酸产气情况，记录产气管数；若都不产酸产气，则报告总大肠菌群数阴性；如有产酸产气的话进行分离培养实验。
(2)分离培养将初发酵的产酸产气的试管划线接种EMB培养基，36℃培养18-24h,观察菌落形态，典型菌落为黑色、中心有光泽或无光泽的菌落；涂片、镜检、革兰氏染色等证实实验。
(3）证实实验 可疑菌落革兰氏阴性、无芽孢，在接种乳糖蛋白胨培养液（内有小倒管）中，每管接种同一初发酵管的最典型菌落者，36℃ , 24h培养；产酸产气者，证实为大肠菌群存在。
(4）结果报告根据发酵实验的阳性管数结合证实实验，查15管发酵大肠菌群MPN表（表7-1)，即可报100mL水样中的MPN值。发酵管无一产酸产气则报大肠菌群阴性。
表7-1 三个稀释度每个稀释度接种5管中100mL水样的总大肠菌群MPN检数表
（总的接种量55.5mL 5份lOmL水样、5份1mL水样、5份0.1mL水样）
阳性管数&&&&&&& &&&&&&&&&&&&&&&& &MPN&&&&&&& 95％可信限&&&&&&& &阳性管数&&&&&&&&&&&&&&&&&&& &MPN&&&&&&&&&&& 95％可信限
l0mL&&&&lmL& 0.1mL&&&&&& &100mL&&&&& 下限&&&& 上限&&&& &l0mL&& 1mL& 0.1mL&&&&& 100mL&&&&&&&& 下限&&&&& 上限
0&&&&&&&&&&0&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&& &2&&&&&&&&& &1&&&&&&&7&&&&&&&&& 2&&&&&&& 2&&&&& 1&&&&&&&&&&&& 12&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&&&& 25
0&&&&&&&&& 0&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&&&&& &1&&&&&& 7&&&&&&&&& 2&&&&&&&&2&&&&& 2&&&&&&&&&&&&& 14&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&34
0&&&&&&&&& 1&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&&&&& &1&&&&&& 7&&&&&&&&&&2&&&&&&&&3&&&&& 0&&&&&&&&&&&&& 12&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&&& 25
0&&&&&&&&& 1&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&&&&&&& 1&&&&&&& 10&&&&&&& 2&&&&&&&& 3&&&&&&1&&&&&&&&&&&&&14&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&& 34
0&&&&&&&&& 2&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&&&&&&&& 1&&&&&&&&10&&&&&&& 2&&&&&&&& 4&&&&& 0&&&&&&&&&&&& 15&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&& 34
0&&&&&&&&& 2&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&&&14&&&&&&& 3&&&&&&&&&0&&&&&&0&&&&&&&&&&&&&13&&&&&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&& 22
0&&&&&&&&& 3&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&& 14&&&&&&& 3&&&&&&&& 0&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&11&&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&& &22
1&&&&&&&&& 0&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&&&&&& &1&&&&&& 10&&&&&&& 3&&&&&&&&&0&&&&& 2&&&&&&&&&&&& 13&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&& &34
1&&&&&&&&& 0&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&&&&&&& &1&&&&&&&10&&&&&&& 3&&&&&&&& 1&&&&&& 0&&&&&&&&&&& 11&&&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&&&25
1&&&&&&&&& 0&&&&& 2&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&& 14&&&&&&& 3&&&&&&&&& 1&&&&&& 1&&&&&&&&&&&14&&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&34
1&&&&&&&&& 1&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&&&&&&& &1&&&&&&&11&&&&&&& 3&&&&&&&&&&1&&&&&& 2&&&&&&&&&& 17&&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&& 34
1&&&&&&&&& 1&&&&&&1&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&&&& 2&&&&&&&&&14&&&&&&& 3&&&&&&&&& 2&&&&&&&0&&&&&&&&&& 14&&&&&&&&&&&&&&& & 6&&&&&&&&34
1&&&&&&&&& 1&&&&& 2&&&&&&&&&&&&&&&& 8&&&&&&&&&&& 3&&&&&&&&&22&&&&&&& 3&&&&&&&&& 2&&&&&&&1&&&&&&&&&& 17&&&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&& &39
1&&&&&&&&& 2&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&&&& 2&&&&&&&& 14&&&&&&& 3&&&&&&&&& 2&&&&&& 2&&&&&&&&&& 20&&&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&& &39
1&&&&&&&&& 2&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&&& 8&&&&&&&&&&& 3&&&&&&&&&22&&&&&&& 3&&&&&&&&& 3&&&&&& 0&&&&&&&&&& 17&&&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&& &39
1&&&&&&&&& 3&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&&& 8&&&&&&&&&&&&3&&&&&&&&&22&&&&&&&&3&&&&&&&&& 3&&&&&& 1&&&&&&&&&&& 21&&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&& &39
1&&&&&&&&& 3&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&& 10&&&&&&&&&&&3&&&&&&&& 22&&&&&&&&3&&&&&&&&& 3&&&&&& 2&&&&&&&&&&& 24&&&&&&&&&&&&&&&&&10&&&&&&&66
1&&&&&&&&& 4&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&& 11&&&&&&&&&& 3&&&&&&&& 22&&&&&&& 3&&&&&&&&& 4&&&&&&&0&&&&&&&&&&&&21&&&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&&&&40
2&&&&&&&&& 0&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&& 5&&&&&&&&&&&& 1&&&&&&&& 14&&&&&&& 3&&&&&&&&&&4&&&&&& 1&&&&&&&&&&& 24&&&&&&&&&&&&&&&& 10&&&&&& 66
2&&&&&&&&& 0&&&&&&1&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&&&&&&&&&1&&&&&&&&&15&&&&&&& 3&&&&&&&&& 5&&&&&&&0&&&&&&&&&& &25&&&&&&&&&&&&&&&& 10&&&&&& 66
2&&&&&&&&& 0&&&&& 2&&&&&&&&&&&&&&& 9&&&&&&&&&&&& 3&&&&&&&& 22&&&&&&& 4&&&&&&&&& 0&&&&&&&0&&&&&&&&&&& 13&&&&&&&&&&&&&&&&& 4&&&&&& &34
2&&&&&&&&& 1&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&&&&&&&& 2&&&&&&&& 17&&&&&&& 4&&&&&&&&&&0&&&&&& 1&&&&&&&&&&& 17&&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&34
2&&&&&&&&& 1&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&& 9&&&&&&&&&&&& 3&&&&&&&& 22&&&&&&& 4&&&&&&&&& 0&&&&&& 2&&&&&&&&&&&&21&&&&&&&&&&&&&&&&& 7&&&&&& &39
2&&&&&&&&& 1&&&&&&2&&&&&&&&&&&&&& 12&&&&&&&&&& &4&&&&&&&& 25&&&&&&&&4&&&&&&&&& 0&&&&&&& 3&&&&&&&&&&&25&&&&&&&&&&&&&&&&& 10&&&&&&&66
2&&&&&&&&& 2&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&& 9&&&&&&&&&&&&& 3&&&&&&&& 22&&&&&&& 4&&&&&&&&& 1&&&&&&&&0&&&&&&&&&& 17&&&&&&&&&&&&&&&&&& 6&&&&&&&&39
4&&&&&&&&& 1&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&& 21&&&&&&&&&&&& 7&&&&&&&&41&&&&&&& 5&&&&&&&&&& 2&&&&&& 0& &&&&&&&&& 49&&&&&&&&&&&&&&&& 15&&&&& 150
4&&&&&&&&&&1&&&&& 2&&&&&&&&&&&&&& 26&&&&&&&&&& &10&&&&&&&66&&&&&&& 5&&&&&&&&&& 2&&&&&&&1&&&&&&&&&&& 70&&&&&&&&&&&&&&&& 22&&&&& 170
4&&&&&&&&& 1&&&&& 3&&&&&&&&&&&&&& 31&&&&&&&&&& &10&&&&&& 66&&&&&&& 5&&&&&&&&&& 2&&&&&& 2&&&&&&&&&&& 94&&&&&&&&&&&&&&&& 34&&&&&& 220
4&&&&&&&&& 2&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&& 22&&&&&&&&&&&&7&&&&&&&& 48&&&&&&& 5&&&&&&&&& &2&&&&&& 3&&&&&&& &&& 120&&&& &&&&&&&&&&30&&&&& &240
4&&&&&&&&& 2&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&& 26&&&&&&&&&& 10&&&&&&&&66&&&&&&& 5&&&&&&&&&&&2&&&&& &4&&&&&&&&&&& 150&&&&&&&&&&&&&& 60&&&&&& 350
4&&&&&&&&& 2&&&&&&2&&&&&&&&&&&&&& 32&&&&&&&&&& 10&&&&&&& 66&&&&&&&&5&&&&&&&&&& 3&&&&&&&0&&&&&&&&&&&& 79&&&&&&&&&&&&&&&&23&&&&&& 220
4&&&&&&&&&&2&&&&& 3&&&&&&&&&&&&&& 38&&&&&&&&&&&13&&&&&&& 100&&&&&&5&&&&&&&&&& 3&&&&&& 1&&&&&&&&&&&& 110&&&&&&&&&&&&&&30&& &&&& 240
4&&&&&&&&& 3&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&& 27&&&&&&&&&& 10&&&&&&&&&66&&&&&& 5&&&&&&&&&& 3&&&&&& 2&&&&&&&&&&& &140&&&&&&&&&&&&& 50&&&&&&& 350
4&&&&&&&&& 3&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&&&33&&&&&&&&&& 10&&&&&&&& 66&&&&&& 5&&&&&&&&&& 3&&&&&& 3&&&&&&&&&&&&&170&&&&&&&&&&&&& 70&&&&& & 390
4&&&&&&&&& 3&&&&& 2&&&&&&&&&&&&&& 39&&&&&&&&& &13&&&&&&&&100&&&& &5&&&&&&&&&& 3&&&&&& 4&&&&&&&&&&&&&210&&&&&&&&&&&&& 70&&&&&&& 390
4&&&&&&&&& 4&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&& 34&&&&&&&&&& 13&&&&&&& 100&&&&& 5&&&&&&&&&& 4&&&&&& 0&&&&&&&&&&& &130&&&&&&&&&&&&& 30&&&&&&& 350
4&&&&&&&&& 4&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&& 40&&&&&&&&&&&13&&&&&&&&100&&&& &5&&&&&&&&&& 4&&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&170&&&&&&&&&&&& 60&&&&&&& 390
4&&&&&&&&& 4&&&&& 2&&&&&&&&&&&&&& 47&&&&&&&&& &14&&&&&&&&110&&&& &5&&&&&&&&&& 4&&&&&& 2&&&&&&&&&&& &220&&&&&&&&&&&& 70&&&&&&& 440
4&&&&&&&&& 5&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&& 41&&&&&&&&& &13&&&&&&&&100&&&&&&5&&&&&&&&&& 4&&&&&& 3&&&&&&&&&&& &280&&&&&&&&&&& 100&&&&&&&700
4&&&&&&&&& 5&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&& 48&&&&&&&&& &14&&&&&&&&110&&&& &5&&&&&&&&&& 4&&&&&& 4&&&&&&&&&&&&&350&&&&&&&&&&& 100&&&&&& 700
5&&&&&&&&& 0&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&& 23&&&&&&&&&&& 7&&&&&&&&& 66&&&&&& 5&&&&&&&&&& 4&&&&&& 5&&&&&&&&&&& &430&&&&&&&&&&& 150&&&&&& 1100
5&&&&&&&&& 0&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&& 31&&&&&&&&&&&10&&&&&&&&&66&&&&&&& 5&&&&&&&&&&&5&&&&&& 0&&&&&&&&&&& &240&&&&&&&&&& 70&&&&&&& 700
5&&&&&&&&& 0&&&&& 2&&&&&&&&&&&&&& 43&&&&&&&&& & 3&&&&&&&&& 100&&&&& 5&&&&&&&& & 5&&&&&&& 1&&&&&&&&&&&&350&&&&&&&&&&100&&&&&& 1100
5&&&&&&&&& 0&&&&& 3&&&&&&&&&&&&&& 58&&&&&&&&&& 21&&&&&&&&150&&& & 5&&&&&&&&&& 5&&&&& & 2&&&&&&&&&&&&540&&&&&&&&&&& 150&&&&&& 1700
5&&&&&&&& 1&&&&&& 0&&&&&&&&&&&&&& 33&&&&&&&&& &10&&&&&&&&100&&&&& 5&&&&&&&&&& 5&&&&&&& 3&&&&&&&&&& &920&&&&&&&&&&& 230&&&&& 25000
5&&&&&&&& 1&&&&&& 1&&&&&&&&&&&&&& 46&&&&&&&&&&&14&&&&&& &110&&&&& 5&&&&&&&&&& 5&&&&&&& 4&&&&&&&& &1600&&&&&&&&&&& 400&&&&& 4600
5&&&&&&&& 1&&&&&& 2&&&&&&&&&&&&& 63&&&&&&&&&&& 21&&&&&&& 150&&&&& 5&&&&&&&&&& 5&&&&&&& 5&&&&&&&&& &&1600
5&&&&&&&& I&&&&&& 3&&&&&&&&&&&&& 84&&&&&&&&&&&&&34&&&&&& &110
1.4饮用水其他测定方法
目前使用R2A培养基测定水中细菌。35℃培养5-7d，至少培养72h；或20-28℃培养7d，至少培养5d。此培养基的特点是低温培养、低营养和长时间培养，有利于氯处理和受刺激的水中细菌的检验。所得菌落数比营养琼脂高。
由于饮用水中有的细菌处于活动状态，有时，荧光假单胞菌和柄杆菌属(Caulobacter）甚至能在超纯水中生长，饮水机中的细菌来源可想而知。饮用水的检验中大肠菌群与一般食品的检验方法基本相同。由于水中大肠菌群一直处于饥饿状态，对抑菌物质敏感，因此不使用抑制剂。
接种：在两个各装有已灭菌的50mL三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液的大试管或烧瓶中（内有小倒管），以无菌操作各加入水样100mL。在10支装有5mL三倍浓缩乳糖蛋白陈培养液的试管（内有倒管）中各加水样lOmL。 37℃培养18-24h。产气者划线于伊红-美蓝平板或远藤氏品红亚硫酸钠平板。在远藤氏品红平板上选取以下菌落进行复发酵。①紫红，具有金属光泽；②深红，不带或略带金属光泽；③淡红，中心色较深的菌落。
远藤氏品红亚硫酸钠平板培养基的碱性复红具有醌氏结构，因此培养基呈深红色。亚硫酸钠能破坏醌氏结构，因此培养基呈粉红色。被发酵后产生乙醛，与结合，恢复碱性复红具有的醌氏结构，恢复深红色。不发酵乳糖者，呈淡红色或无色。此培养基的缺点是不能久存。
二、瓶装水中铜绿假单胞菌的检验
铜绿假单胞菌也叫绿脓杆菌，属于假单胞菌属，是非发酵性细菌，区别于发酵型的肠杆菌科细菌和弧菌科细菌。
原假单胞菌属是一个非常大的属，其特点是：革兰氏阴性直或弯杆菌，无芽孢；鞭毛极生，单个或丛生；葡萄糖氧化发酵试验为氧化型；氧化酶阳性、触酶阳性。后来根据rRNA的同源性已分成5个rRNA同源群。其中rRNA同源群1为现在的假单胞菌属，包括荧光假单胞菌、恶臭假单胞菌、铜绿假单胞菌、施氏假单胞菌、门多萨假单胞菌、丁香假单胞菌、产碱假单胞菌、类产碱假单胞菌等。
假单胞菌在食品腐败中最常见。由于假单胞菌能够分解对其他生命体来说难以利用的化合物（包括脂肪族和芳香族碳氢化合物、脂肪酸、杀虫剂及其他污染物），进行有氧分解和生物降解，因此在自然界碳循环中起关键作用。只有极少数化合物不能分解，包括聚、泡沫塑料及单碳有机物（、、）等。
与许多其他细菌一样，假单胞菌被描述为革兰氏阴性无芽孢杆或微弯的杆菌，用一根或数根桩毛运动，有的也产生倒毛。这一特征在鉴定时缺乏实用性原因在于有的假单胞菌细胞很短，有的很长。有时尤其在老龄培养基中的大小和形状特殊，甚至会怀疑它是不是纯培养物。一般地，对所有假单胞菌都符合的特征有：化能有机营养养、有氧代谢、从不发酵、缺乏光合成、一般不能固氮以及能够利用许多种有机物，个别也发现能固氮。有的进行厌氧呼吸，如铜绿假单胞菌在无氧条件下也能生长。唯一厌氧能力可能是反硝化作用和精氨酸分解为鸟氨酸时。触酶阳性，通常氧化酶阳性，不需要有机生长因子。可能产生扩散性和（或）可溶性的色素。
2.2生物学性状
铜绿假单胞菌为革兰氏阴性专性需氧杆菌，(0.5-0.8)um×(1-3) um。广泛分布于水、土壤、空气、植物上。运动活泼，大多数为1根鞭毛极生。葡萄糖利用氧化型，氧化酶阳性，触酶阳性，还原硝酸盐为亚硝酸盐或氮气，分解尿素，液化明胶，能利用为唯一碳源。具有很强的分解蛋白质的能力。利用、木糖产酸不产气，不能利用、、乳糖、，不产生硫化氢，和均阴性，精氨酸双水解酶阳性，42℃生长。生长温度为20-42℃，最适温度为35℃, 55℃ lh可杀灭。铜绿假单胞菌对EDTA（）有高度敏感性，能被EDTA快速溶解。其原因在于细胞壁外膜（革兰氏阴性菌细胞壁有外膜）含高含量磷酸。对EDTA不敏感的细菌细胞壁外膜
磷酸含量低，因此EDTA有时被用做其他菌的选择剂。具有O抗原和H抗原。O抗原分两种：内毒素蛋白和脂多糖。
铜绿假单胞菌产生水溶性色素脓青素（）为蓝绿色。绿脓菌素具有呼吸酶的功能，还原时变为无色。还产生荧光色素，在紫外灯下显黄绿色荧光，在陈旧培养物中被氧化为黄棕色的脓黄素。某些铜绿假单胞菌产生脓红色素，呈红色。在普通培养基上，形成边线不整齐、扁平湿润且常呈融合状态的菌落，直径为2-3mm。菌落色彩不一定是固定的，因菌株和培养时间而异。
在血平板上形成透明溶血圈，菌落大而扁平，有金属光泽，有生姜气味。在液体培养基上均匀浑浊，表面形成菌膜，菌液上层呈蓝绿色。
2.3瓶装水中铜绿假单胞菌检验
铜绿假单胞菌为条件致病菌。水中营养浓度很低时能生长。其主要鉴别特征有：在含Cetrimide的培养基上生长；产生绿脓菌素；氧化酶阳性；紫外灯下有荧光；利用乙酰胺产氨气。检验过程主要参见欧洲标准和国际标准化组织制定的滤膜法
图7-1铜绿假单胞菌的检验过程
通过0.45um孔径的滤膜抽滤250mL的水样（ISO 12780中使用100mL水样，其余相同），使水样中的细菌留在滤膜上。将膜置于含Cetrimide的CN培养基上36℃培养（44±4)h产生绿脓菌素（蓝绿色菌落）的判为铜绿假单胞菌。不产生绿脓菌素的，如果（360±20) um紫外灯下有荧光或菌落发红褐色时进行进一步确认。菌落不纯时用营养琼脂划线分纯。
有荧光的菌落通过肉汤检查乙酸胺酶。挑取可疑菌落接种于乙酰胺培养基试管。36℃培养24h后滴加奈氏试剂，立即记录结果。铜绿假单胞菌水解严生氨，氨与奈氏试剂反应产生棕红色或棕色沉淀，阴性菌呈黄色。乙酰胺酶阳性时判为铜绿假单胞菌。阴性时判为非铜绿假单胞菌。
红褐色菌落先进行氧化酶试验。阳性时乙酰胺肉汤检查乙酰胺酶，同时接种到King'sB培养基36℃培养22-48h，检测产荧光能力。氧化酶试验阳性，乙酰胺酶试验阳性、有荧光产生时判为铜绿假单胞菌。有一项不符判为非铜绿假单胞菌。
原理：为铜绿假单胞菌特有，CN琼脂适合产生绿脓菌素。但仍有约10％的菌株不产生绿脓菌素。因此，不产生绿脓菌素者需要进一步的鉴定。含Cetrimide的培养基上生长的细菌主要有铜绿假单胞菌、葱头假单胞菌、产碱杆菌、气单胞菌和变形杆菌。葱头假单胞菌和其他杂菌不产生荧光。个别荧光假单胞菌和恶臭假单胞菌也可能生长，产生荧光，但乙酰胺酶阴性。氧化酶阴性时为变形杆菌等肠道杆菌。如表7-3 。
铜绿假单胞菌42℃生长，4℃不生长。荧光假单胞菌4℃生长，42℃不生长。
表7-3在含Cetrimide的平板上生长的部分细菌鉴别
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& Cetrimidc&&&&&&&&&&&&&&&&&硝酸盐产
菌名&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 绿脓菌素&&&&&&&&&&&&&&&& 液化明胶&&&&&& &42℃生长&&&&&&& &鞭毛&&&&&& 乙酰胺酶&&&&& &
&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 上生长&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&氮气
铜绿假单胞菌&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&（＋）&&&&&&& （＋）&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&& 单&&&&&&&&&&&&&&＋&&&&&&&&&&&& ＋
葱头假单胞菌&&&&&&&&&&（＋）&&&&&&&&一&&&&&&&&&&&&& 一&&&&&&&&&＋&&&&&&&&&&&& （＋）&&&&&&&&&&&& 多&&&&&&&&&&&&&&＋&&&&&&&&&&&& ＋
荧光假单胞菌&&&&&&&&& （一）&&&&&&& 一&&&&&&&&&& （一）&&&&&&＋&&&&&&&&&&&&&&& 一&&&&&&&&&&&&&&& 多&&&&&&&&&&& （一）&&&&&&&& ＋
恶臭假单胞菌&&&&&&&&&&（一）&&&&&&& 一&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& 一&&&&& &&&&&&&&& &一&&&&&&&&&&&&&& &多&&&&& &&&&& （一）&&&&&&&& ＋
氧化木糖产碱菌&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&一&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&一&&&&&& &&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&& 周&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&＋
产碱菌属&&&&&&&&&&&&&&& （一）&&&&&& 一&&&&&&&&&&&（一）&&&&& 一&&&&&&&&& &&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&& 周&&&&&&&&&&& （一）&&&&&&&&&&＋
粪产碱菌&&&&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&& 一&&&&&&&&&&&（一）&&&&& 一&&&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&& 周&&&&&&&&&&&&&&&＋&&&&&&&&&&&&＋
气单胞菌&&&&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&& 一&&&&&&&&&&&& 一&&&&&& && ＋&&&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&& 蛋&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&& ＋
变形杆菌&&&&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&& 一&&&&&&&&&&&& 一&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&&& ＋&&&&&&&&&&&&&&& 周&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&&一
注：“＋”阳性或生长；“一”阴性或不生长；“（）”多数。【关键词】大肠埃希氏菌 粪肠球菌 沙门氏菌 产气荚膜梭菌 空肠弯曲菌1、废水中悬浮固体的测定原理？；悬浮固体系指剩留在滤料上并于103―105℃烘至；2、悬浮固体的测定过程中废水粘度高时如何处理？；废水粘度高时，可加2―4倍蒸馏水稀释，振荡均匀，；3、碘量法测定水中溶解氧的原理？；在水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾，水中的溶解氧将二；MnSO4+2NaOH=Na2SO4+Mn(OH；2Mn(OH)2+O2=2MnO(OH)2↓（
1、废水中悬浮固体的测定原理？
悬浮固体系指剩留在滤料上并于103―105℃烘至恒重的固体。测定的方法是将水样通过滤料后，烘干固体残留物及滤料，将所称重量减去滤料重量，即为悬浮固体（总不可滤残渣）。
2、悬浮固体的测定过程中废水粘度高时如何处理？
废水粘度高时，可加2―4倍蒸馏水稀释，振荡均匀，待沉淀物下降后再过滤。
3、碘量法测定水中溶解氧的原理？
在水样中加入硫酸锰和碱性碘化钾，水中的溶解氧将二价锰氧化成四价锰，并生成氢氧化物沉淀。加酸后，沉淀溶解，四价锰又可氧化碘离子而释放出与溶解氧量相当的游离碘。以淀粉为指示剂，用硫代硫酸钠标准溶液滴定释放出的碘，可计算出溶解氧含量.反应式如下：
MnSO4+2NaOH=Na2SO4+Mn(OH)2↓
2Mn(OH)2+O2=2MnO(OH)2↓（棕色沉淀）
MnO(OH)2+2H2SO4=Mn(SO4)2+3H2O
Mn(SO4)2+2KI=MnSO4+K2SO4+I2
2Na2S2O3+I2=Na2S4O6+2NaI
4、碘量法测定溶解氧适合哪类水样？
此法适用于含少量还原性物质及硝酸氮&0.1mg/L、铁不大于1mg/L，较为清 洁的水样。
5、硫代硫酸钠溶液如何标定？
标定方法如下：
于250mL碘量瓶中，?加入100mL水和1gKI，??加入10.00mL 0.02500mol/L重铬酸钾(1/6K2Cr2O7)标准溶液、5mL(1+5)硫酸溶液，密塞，摇匀。?于暗处静置5分钟后，用待标定的硫代硫酸钠溶液滴定至溶液呈淡黄色，加入1mL淀粉溶液，继续滴定至蓝色刚好褪去为止，记录用量。 10.00?0.02500C= V
式中：C―硫代硫酸钠溶液的浓度(mol/L)。
V―滴定时消耗硫代硫酸钠溶液的体积(mL)。
6、重铬酸钾法测定化学需氧量的原理？
在强酸性溶液中，准确加入过量的重铬酸钾标准溶液，加热回流，将水样中还原性物质（主要是有机物）氧化，过量的重铬酸钾以试亚铁灵作指示剂，用硫酸亚铁铵标准溶液回滴，根据所消耗的重铬酸钾标准溶液量计算水样化学需氧量。
7、对于化学需氧量高的废水样如何处理？
对于化学需氧量高的废水样，可先取操作所需体积1/10的废水样和试剂于15×150mm硬质玻璃试管中，摇匀，加热后观察是否成绿色。如溶液显绿色，再适当减少废水取样量，直至溶液不变绿色为止，从而确定废水样分析时应取用的体积。
8、水中六价铬的测定原理？
在酸性溶液中，六价铬遇二苯碳酰二肼反应，生成紫红色化合物，其最大吸收波长为540nm，摩尔吸光系数为4×104。
本方法适用于地面水和工业废水中六价铬的测定。
9、在总铬的测定过程中，对含大量有机物的水样，如何处理？;
需要加HNO3进行消解，重复直至水样清澈为止
10、污水和废水中油的测定主要方法有哪些？重量法测定污水和废水中油的原理？
方法:重量法，紫外分光光度法.原理: 重量法测定污水和废水中油的原理：以硫酸酸化样品，用石油醚从样品提取油类，蒸发去除石油醚，再称其重量。
11、重量法测定污水和废水中油的过程中加入硫酸和氯化钠的作用？
硫酸的作用抑制微生物活动，保存水样。 氯化钠的作用：提高水中油的萃取效率。
12、重量法测定的是污水和废水中油哪部分物质？
此法测定的是酸化样品中可被石油醚萃取的、且在试验过程中不挥发的物质总量。
13、水中细菌总数测定的原理？
细菌总数是评价水质污染程度的主要卫生指标，我国现行的生活饮用水标准检验方法GB5750―85规定水样中细菌总数测定是1ml水样在普通营养琼脂培养基中37℃经24小时培养所生长的细菌菌落的总数，一般规定1毫升水的细菌总数不得超过100CFU。
14、若检测自来水水样，如何取样？
先将自来水龙头用火焰烧灼3min灭菌，再开放水龙头使水流1-2min后，以灭菌三
角烧瓶接取水样，以待分析。
15、池水、河水或湖水应如何取样？
池水、河水或湖水应取距水面10―15cm的深层水样，先将灭菌的带玻璃塞瓶，瓶口向下浸入水中，然后翻转过来，除去玻璃塞，水即流入瓶中，盛满后，将瓶塞盖好，再从水中取出，最好立即检查，否则需放入冰箱中保存。
16、菌落计数时的基本要求？
1．计数时，对那些看来相似、距离很近但不相触的菌落，应一一计数。那些紧密接触而外观相异的菌落，也应一一计数。
2．计数时，对那些看来相似、距离很近但不相触的菌落，应一一计数。那些紧密接触而外观相异的菌落，也应一一计数。
3.培养基上的菌落数超过300时，要对原水样进行稀释。结果要以测出菌落数乘以稀释倍数。
17、空气中NOx的测定原理？
空气中的氮氧化物主要以NO和NO2形态存在。测定时将NO2用吸收液吸收后，首先生成亚硝酸和硝酸。其中，亚硝酸与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，再与N-(1-萘基)乙二胺盐酸盐作用，生成紫红色偶氮染料，根据颜色深浅比色定量。因为NO2(气)不是全部转化为NO2-(液)，故在计算结果时应除以转换系数(称为Saltzman实验系数，用标准气体通过实验测定)。
18、按照氧化NO所用氧化剂不同，分为哪两种氧化方法？
酸性高锰酸钾溶液氧化法和三氧化铬-石英砂氧化法。
19、空气中总悬浮颗粒物的测定原理？
目前测定空气中TSP含量广泛采用重量法，其原理基于：以恒速抽取定量体积的空气，使之通过采样器中已恒重的滤膜，则TSP被截留在滤膜上，根据采样前后滤膜重量之差及采气体积计算TSP的浓度。该方法分为大流量采样器法和中流量采样器法。本实验采用中流量采样器法。
20、环境噪声监测的天气条件要求？
天气条件要求在无雨无雪的时间，声级计应保持传声器膜片清洁，风力三
级以上必须加风罩（以避免风噪声干扰），五级以上大风应停止测量。
21、手持仪器测量，传声器要求距离地面多高？如测量交通噪声应选择的测点位置要求？
手持仪器测量，传声器要求距离地面1.2m。
测量交通噪声应选择的测点位置要求: 在每个交叉路口之间的距交叉中50m以上选择一个测点，测点在马路边人行道上，离马路20cm。
22、环境噪声监测中L10、L50、L90所代表的含义？
将监测中得到的数据,从大到小排列,L10表示第10个数据，L50表示第50个数据，L90表示第90个数据。
2、操作题:1、滴定实验
2、利用分光光度计测定标准曲线
3、超净台的使用和微生物的图板
4、大气采样器的使用
5、噪声监测仪的使用和测定
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