电话: 010-027915
地址： 北京市海淀区花园路3号
太阳能7号楼， 邮编100191
Caspase-1 活性测定试剂盒
Caspase-1是唯一可剪切IL-1和IL-18前体产生活性细胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前体蛋白产生20kD和10kD片断，这两个片断可以形成异源二聚体，并进一步形成四聚体。
Caspase-1 活性测定试剂盒Caspase-1 colorimetric assay Kit
描述：细胞凋亡属于程序化细胞死亡，可见于各种器官和细胞，在正常发育、生理、病理过程中对细胞和器官的稳态具有十分重要的调节作用。Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是参与细胞凋亡过程的蛋白酶家族，包含10多个成员。其中Caspase-1是唯一可剪切IL-1和IL-18前体产生活性细胞因子的caspase。Caspase-11剪切45kD的caspase-1前体蛋白产生20kD和10kD片断，这两个片断可以形成异源二聚体，并进一步形成四聚体。此四聚体具有蛋白酶活性。Caspase-1通过剪切Bcl-XL调节细胞凋亡，并通过对细胞因子前体的剪切来调控相关细胞因子介导的免疫炎性反应。试剂盒测定原理基于Caspase-1特异水解其多肽底物N-acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-pNA (Ac-YVAD-pNA)，释放出游离的硝基苯胺pNA，后者呈黄色在405 nm具有最大吸收峰，用可见光分光光度比色方法测定。其吸光度值对应于Caspase-1的水解活性。反应体系100微升，试剂盒提供的试剂，除标准曲线外可进行50或100次样品测定。
适用：测定哺乳动物组织、细胞caspase-1活性。
组成与储存：
1. 裂解缓冲液： 20 ml ，4 &C
2. 反应缓冲液： 10 ml ，4 &C
3. 2 mM Ac-YVAD-pNA底物： 0.5 ml，－20 &C避光
4. 10 mM pNA标准品： 0.5 ml，－20 &C避光
以上标出的量为100次检测，50次检测的试剂量减半。试剂常温运输。到达后按要求储存，1年内稳定。
所需仪器：
酶标仪与96孔酶标板；或可见光分光光度计配100&l容积的石英比色杯。
工作波长：最大吸收波长405 nm，如不具备也可在400~450 nm范围内测定。
(责任编辑：admin)
------分隔线----------------------------地区： 北京
说到Flica，它其实是音乐制作人Euseng Seto的个人音乐计划。还记得2005年，初出茅庐的Euseng和Huat Liang组成了一支叫做Muxu的电子双人组，踏上了摸索唯美大马音乐的旅程。但很快他就意识到要自成一派，发展出别具一格的电子风格，于是2007年初，Flica便诞生了，Euseng本人也在探索最优美、最纯粹、最悠然、最发人深省之音乐上越行越远。终于在马来西亚厂牌mü-nest的支持下，Flica发行了首张专辑《Windvane and Window》。不论是封面那一片棕榈树叶，还是以英文字母命名的歌名，都让听者先入为主一个观念“简“，是的，真正优秀的作品不需要电子合成器的浓妆艳抹，器乐的演奏往往更能深入人心，再配上天籁之声Ika的演绎和日本Schole厂牌下两位新晋氛围电子音乐人Haruka Nakamura和Akira Kosemura混音加持，整张专辑如浴春风一般，轻快宁静。反复聆听之后，顿觉时钟也停摆了，自己宛如天地间一蜉蝣，沉思宇宙间万物生长的哲理。如此简单的音乐却蕴藏着莫大的深度，这难道就是极简至上的最终奥义吗？ 延续这样的风格，Flica陆续发行了多张作品，《Nocturnal》就是一首“静夜思“，温柔而忧伤，《Coffee & Spectacles》是一部电子小品，简约而精致，而作为赈灾单曲的《Reassure》甚至动用到大提琴，各类乐器的交相辉映简直是对生命的崇高礼赞。这些专辑听久了，你会发现蓦然间，自己对周遭事物变得如此明察秋毫，是的，那是自己的心在音乐的熏陶下变得敏感了，多情了。 flica is an electro-acoustic outfit produced by euseng seto from the evolving music scene of Kuala Lumpur Malaysia. Born in 1982, he begun his exquisite journey in conceptualizing and producing delicate home-brew music since 2005 with his first electronica duo project muxu with member huat liang. Having realized the need to explore further and experiment with his own music style, euseng seto started flica in early 2007, solely crafting and producing music on his own. As a result, the subtle sounds that flica creates are exceptionally melodic and uncomplicated, which perfectly mirroring his perceptions towards daily personal feelings on life and nature. flica’s beautiful debut album windvane and window was proudly released by mü-nest in January 2008.
The Space Elevator
Flica - Hie
大家都在说
下载秀动APP,评论可上传图片，快去下载吧！
你还能输50字
你还能输50字
客服电话：400-188-6980
秀动客服微信号：showstart-service
秀动客服微信号
下次自动登录
还没有秀动账号?
下载秀动APPActivation of caspases measured in situ by binding of fluorochrome-labeled inhibitors of... - Abstract - Europe PMC
Europe PMC requires Javascript to function effectively.
Either your web browser doesn't support Javascript or it is currently turned off. In the latter case, please
turn on Javascript support in your web browser and reload this page.
https://orcid.org
Search worldwide, life-sciences literature
P Smolewski
Zbigniew Darzynkiewicz
New York Medical College
Brander Cancer Research Institute, New York Medical College, Valhalla, New York, 10595, USA.
No matching affiliation detected.
Close affiliations
[01 Aug ):308-313]
Research Support, U.S. Gov't, P.H.S., Research Support, Non-U.S. Gov't, Journal Article
Activation of caspases is the key event of apoptosis and new methods are needed to assay this event, particularly in situ, in individual cells. To measure in situ caspases activation in the present study we employed fam-VAD-fmk and fam-VEID-fmk, the fluorochrome (fam)-labeled inhibitors of caspases (FLICA), which through the fluoromethylketone (fmk) moiety bind to active center of the activated enzymes. The peptide moiety of these inhibitors defin VAD is generic to most caspases and VEID is caspase-6 specific. The frequencies of cells showing caspases activation were compared with those showing DNA fragmentation (detected by the TUNEL assay) in the same cultures. Apoptosis of HL-60 cells was induced by DNA topoisomerase I inhibitor camptothecin (CPT) or tumor necrosis factor-alpha combined with cycloheximide (TNF-alpha + CHX). The cells that bound FLICA had morphological changes typical of apoptosis. The intensity of their fluorescence was measured by laser scanning cytometry. Maximal rate of activation of the caspases, measured by the increase in frequency of the cells that bound fam-VAD-fmk, occurred between 30 and 90 min after the administration of TNF-alpha + CHX and between 2 and 4 h after the administration of CPT. In the CPT-treated cultures about 30% fewer cells bound fam-VEID-fmk than fam-VAD-fmk which suggests that the activation of caspase-6 was delayed or was not induced in some cells. A strong overall correlation between the cytometric assays of the apoptotic index based on the detection of caspases activation by the FLICA and the TUNEL assay was observed. The data indicate that FLICA offers a rapid and convenient method of assessing caspase's activation in individual cells and can also be used to estimate the frequency of apoptosis.
)- subscription required
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
Show all items
CitePeer Related Articles　　当细胞死亡时，研究人员往往会奋力排查死亡原因。他们采用各种分析，来确定细胞是经历了凋亡（apoptosis）、坏死（necrosis），还是程序性坏死（necroptosis），从而判断特定环境是否有毒，或者确定药物的作用机制。
凋亡是个复杂的过程，至少有两种主要途径 C 内在和外在 C 导致了程序性细胞死亡。它们汇集于caspase蛋白酶级联反应，最终破坏重要的细胞蛋白。确定哪条途径被触发，在哪个步骤被阻断，以及抑制剂是否能够抑制，催生了各式各样的凋亡检测。
它凋亡了吗？
人们以不同的凋亡标志物为基础，开发了通用的凋亡检测，这些产品可单独或联合使用。形态变化，如细胞皱缩和细胞膜起泡，可在显微镜下观察。磷脂酰丝氨酸从内测翻转到细胞膜外侧，则可以通过Annexin V来检测。通过TUNEL检测来标记带切口的DNA，可观察染色体降解。caspase级联反应的激活则通过caspase及其产物的分析来实现。具体选择哪一种，这取决于多个因素，包括细胞类型和样品量、现有的设备和经验。
医生通常并不关心哪些途径或分子被触发或阻断，因为在开药之前，研究工作已经做了。而这些细节正是研究人员想要确定的。
caspase检测
caspase作为酶原，始终存在于细胞中。一些酶，如执行者caspase 3和caspase 7，是组成型的二聚体，必须经过切割和重排，才能形成活性位点。另一些酶，如启动者caspase 8、9和10，是组成型单体，它们只有二聚化并招募到多蛋白复合物之后才激活1。
针对大多数感兴趣的caspase，市场上已经有了抗体。不过，由于caspase是组成型的，必须利用试剂来辨别活性和非活性形式，才能判断它们是否参与了凋亡。抗体这种关键的试剂可用于各种检测，包括流式分析、免疫组化、ELISA、Western blot和免疫荧光。
许多分析检测caspase酶的活性，而不是酶本身。“有一些底物被caspase酶普遍切割，如PARP和核纤层蛋白，而我们有特异针对那些切割产物的抗体，”Cell Signaling Technology（CST）的产品开发专员Gary Kasof说。其他底物只被单个或少数几个caspase切割。
当然，市场上也有并非基于抗体的检测。例如，许多厂商推出了广泛和特定的caspase试剂盒，基于FLICA（荧光标记的caspase抑制剂）检测，其中小小的荧光分子穿过活细胞膜，不可逆地与caspase活性位点结合，而未结合的试剂被洗掉。相同的概念已被用于PET探针，其中F-18 PET标记取代了荧光。
另一个选择是使用一种细胞系，它缺少了你感兴趣的特定caspase基因。“如果研究人员认为，他们已经开发出一种药物，触发了癌细胞的凋亡，那么，这是一种快速而简单的方法，来评估新药是否通过这个途径起作用，”Horizon Discovery的肿瘤项目经理Nicola McCarthy谈道，这家公司提供了一些单倍体caspase敲除产品。
“我们也有其他的单倍体细胞系，它们缺失了凋亡途径的各种组分，”McCarthy补充道。
“如果你只是对下游的caspase家族成员感兴趣（这个家族至少有12种独特的caspase蛋白），你将看到几乎所有凋亡途径的融合，”Bio-Rad公司Bio-Plex产品的全球产品经理Daniel Braunschweig说。
不过，如果你只研究caspase，你也许会错过内在途径调控的凋亡。“癌症中缺乏凋亡，而神经退行性疾病或心脏病的过度凋亡，往往是通过Bcl-2家族成员实现的。”基于这个原因，Braunschweig表示，Bio-Rad Bio-Plex（基于Luminex）凋亡产品的重点放在Bcl-2家族。他认为，单一的标志物往往不足以清楚认识凋亡背后的机制。
“每当你想确定一个治疗方案是否起作用，或者给疾病分期，你总是需要多个标志物，”BioVision的技术支持专家Sunetra Ray谈道。也许这解释了流式细胞仪为何在凋亡研究中广泛使用。
对于与凋亡内在和外在途径相互作用的其他分子和通路，人们最近也表现出浓厚的兴趣。这包括凋亡抑制剂（IAP）家族和SMAC（IAP的抑制剂），它们的小分子模拟物已被开发出，以促进癌症中的细胞凋亡。
了解凋亡，有许多方式，从通用的（它是否发生？）到特异的（针对caspase 9和Bax）。你需要仔细选择。它可是关乎细胞生死的问题。
（作者：Josh P. Roberts / 编译）
[1] Ashkenazi, A, Salvesen, G, “Regulated cell death: signaling and mechanisms,” Annu Rev Cell Dev Biol, 30:337-56, 2014. [PMID: ](/)版权所有，未经书面许可，不得转载
我来说两句(0)
[Ctrl+Enter]
相关文章：
加载相关文章......
今日文章：
加载今日文章......
生物通快讯
加载中......
加载中......
加载中......
加载中......
技术大讲堂
加载中......
加载中......
加载中......
加载中......
加载中......
加载中......
版权所有 生物通
Copyright&
, All Rights Reserved
联系信箱：