条件性基因敲除小鼠鼠净化后繁育率会不会提高

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-07-28 05:54 标签： apoe基因敲除小鼠
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【求助】关于基因敲除小鼠
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这个帖子发布于6年零284天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
关于基因敲除小鼠，有几个问题请高手指教： 1．一般的基因敲除小鼠制作是将129来源的ES细胞注射到C57小鼠中，得到的嵌合体再与C57杂交，得到敲除基因的杂合子，杂合子自交得到纯合子。可这样纯合子的遗传背景是129，而杂合子的遗传背景却是129xC57，那对照用什么小鼠合适呢？2．为什么要选雄性嵌合体小鼠与雌性C57杂交？雌性的嵌合体小鼠与雄性的C57交配不行吗？.3．若将C57来源的ES细胞注射到C57的囊胚中，如何判断嵌合体小鼠的嵌合效率？不能根据毛色了，那该如何判断？还是不判断直接进行下一步？只是这样几率低了很多。还有，以后的小鼠也不能根基毛色区分是不是敲除knockout小鼠了，那是不是每一只小鼠都要做基因型鉴定呢？这样的话，工作量就大了很多。希望大家能不吝赐教，万分感谢！
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1.一般mating 10代以后变成纯和B6. 发文章要求7代mating后的就可以。2. 如果不确定老鼠的x cheromsone是否固定，原则上要用male的转基因鼠和B6 female交配一代以后，后面选择男性鼠mating，以后就随便，这样fix x chromosone
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sdspring001 关于基因敲除小鼠，有几个问题请高手指教： 1．一般的基因敲除小鼠制作是将129来源的ES细胞注射到C57小鼠中，得到的嵌合体再与C57杂交，得到敲除基因的杂合子，杂合子自交得到纯合子。可这样纯合子的遗传背景是129，而杂合子的遗传背景却是129xC57，那对照用什么小鼠合适呢？2．为什么要选雄性嵌合体小鼠与雌性C57杂交？雌性的嵌合体小鼠与雄性的C57交配不行吗？.3．若将C57来源的ES细胞注射到C57的囊胚中，如何判断嵌合体小鼠的嵌合效率？不能根据毛色了，那该如何判断？还是不判断直接进行下一步？只是这样几率低了很多。还有，以后的小鼠也不能根基毛色区分是不是敲除knockout小鼠了，那是不是每一只小鼠都要做基因型鉴定呢？这样的话，工作量就大了很多。希望大家能不吝赐教，万分感谢！1.回配10次以上,就能把基因背景找回来2.只要能怀上并生出来,应该没有问题的3.这个genotyping的PCR工作量没那么大.good luck
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谢谢版主的回复!关于第一问题，还有个疑问，版主的意思是说，这种基因敲除小鼠得到后不能立即使用，组要回配10次以上待基因型稳定后才能用是吗？那么，最后的结果是遗传背景变为了C57是吗？还有，回配的时候用杂合子还是纯合子？哪个好一点？还是没有区别？
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sdspring001 谢谢版主的回复!关于第一问题，还有个疑问，版主的意思是说，这种基因敲除小鼠得到后不能立即使用，组要回配10次以上待基因型稳定后才能用是吗？那么，最后的结果是遗传背景变为了C57是吗？还有，回配的时候用杂合子还是纯合子？哪个好一点？还是没有区别？
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很抱歉，还是很晕乎。若是用129/C57杂交背景的小鼠（一条染色体来自129，另一条来自C57）与纯C57交配，得到的杂合小鼠中还是一条染色体来自129，另一条来自C57，只不过来自129染色体的有些改变，可是C57基因所占比例也达不到75%吧？
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sdspring001 很抱歉，还是很晕乎。若是用129/C57杂交背景的小鼠（一条染色体来自129，另一条来自C57）与纯C57交配，得到的杂合小鼠中还是一条染色体来自129，另一条来自C57，只不过来自129染色体的有些改变，可是C57基因所占比例也达不到75%吧？首先,染色体不是只有1对,,而是好多对.比如人是23对.
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哦，对对。但是敲除基因所在的那条染色体是不能变的，是吧？理想的说，对于小鼠，有1/40的比例是不会改变的？那也就是说我想要另外一种遗传背景的knockout小鼠，比如BALB/c遗传背景的，直接用已有的knockout小鼠与纯BALB/c小鼠回交即可。是不是？
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遗传学上还有个概念叫,重组
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tk57ml 遗传学上还有个概念叫,重组忽略掉这个呢，我上面的理解对不对？特别是最后一点
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到底是不是这样的？谁给个确切的答复？
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1．一般的基因敲除小鼠制作是将129来源的ES细胞注射到C57小鼠中，得到的嵌合体再与C57杂交，得到敲除基因的杂合子，杂合子自交得到纯合子。可这样纯合子的遗传背景是129，而杂合子的遗传背景却是129xC57，那对照用什么小鼠合适呢？答：实验时用杂合子自交得到纯合子，对照就用自交时产生的阴性小鼠，若要C57遗传背景的只能用C57来源的ES细胞制做，但目前不成熟。回交10代使C57背景提高？没这种说法吧，而且10代得花至少2年时间吧2．为什么要选雄性嵌合体小鼠与雌性C57杂交？雌性的嵌合体小鼠与雄性的C57交配不行吗？.答：因为雄性的繁殖能力强，一只雄的可与多只雌的交配，而雌的最多一胎生10只左右小鼠
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1.一般mating 10代以后变成纯和B6. 发文章要求7代mating后的就可以。2. 如果不确定老鼠的x cheromsone是否固定，原则上要用male的转基因鼠和B6 female交配一代以后，后面选择男性鼠mating，以后就随便，这样fix x chromosone
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谢谢两位的热心回答。我现在的理解是 忽略掉重组的话，不管回交多少代，敲除基因所在的那条染色体的背景是不能变的，不知道对不对？
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shilly 1.一般mating 10代以后变成纯和B6. 发文章要求7代mating后的就可以。2. 如果不确定老鼠的x cheromsone是否固定，原则上要用male的转基因鼠和B6 female交配一代以后，后面选择男性鼠mating，以后就随便，这样fix x chromosone有点不明白，怎么判断x cheromsone是否固定？不固定的情况发生的概率大吗？能尽量避免吗？
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sdspring001 有点不明白，怎么判断x cheromsone是否固定？不固定的情况发生的概率大吗？能尽量避免吗？我们一般拿到小鼠以后常规做这一步，因为不确定
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基因敲除小鼠概念简述
　来源：&&　　 |
　　基因敲除小鼠就是先在小鼠的胚胎干细胞上通过基因重组的办法进行基因修饰&&就是将胚胎干细胞中的靶向基因改掉，然后将&修饰&后的胚胎干细胞植入小鼠的早期胚胎，生成嵌合体小鼠。这种嵌合体小鼠长大后，体内同时存在被&修饰&过的基因和未被&修饰&的基因医学教育网搜集整理。如果某些小鼠的生殖细胞恰巧被&修饰&过了，则它们就会生出基因完全被&修饰&过的小鼠。 　　这种方法本身就是生物医学领域里一项极具开创性的方法，同时，由于人类基因与小鼠基因有90％以上的相似性，因此它在理论上具备了用于心脏病、糖尿病等人类遗传因素引发的疾病研究的可能。
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