内参基因的选择引物在个种细胞中都通用吗？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-10-29 12:34 标签： qpcr内参基因
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【求助】miRNA定量PCR时，内参需要单独设计反转录引物吗？
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这个帖子发布于5年零238天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我指的是茎环法设计的miRNA反转录引物，内参U6需要单独设计反转录引物吗？如果有能否告之，我是新手，非常感谢，另外发现不同的文献给的U6内参的序列不一致是什么原因？能否给一个可靠的内参序列呢，非常感谢！
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如果是采用颈环引物进行miRNA反转录，内参基因U6不需要单独的设计反转录引物，可以用随机引物或者Oligo dT引物都可以，前提是研究的样本来源是组织或者细胞，提取到的总RNA完整性要好，才会有内参价值。可以给出如下的一对引物：上CTCGCTTCGGCAGCACA；下AACGCTTCACGAATTTGCGT。
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非常感谢，已经设计完毕了，十分感谢园子里的战友，终于搞个差不多了。
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请问高手，我用的是天根的miRNA试剂盒，polyA加尾的方法的引物，我自己需要的miRNA上游引物是在qiagen买的，我需要的内参上游引物也要买吗？好贵~~我也你会设计这个引物，急需高手指点，十分感谢啊
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朱小兰522 请问高手，我用的是天根的miRNA试剂盒，polyA加尾的方法的引物，我自己需要的miRNA上游引物是在qiagen买的，我需要的内参上游引物也要买吗？好贵~~我也你会设计这个引物，急需高手指点，十分感谢啊采用加尾法进行mIRNA表达分析，所有引物都是可以自己设计合成的，无需购买现成的，现在有很多现成的文献可以参考。如果现成的价格便宜的话，可以购买，毕竟人家是做过预实验的。英文的不好看，中文的文献供你参考：
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marker! 非常有用！非常感谢！
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太好了，豁然开朗.
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danyanpinanren 如果是采用颈环引物进行miRNA反转录，内参基因U6不需要单独的设计反转录引物，可以用随机引物或者Oligo dT引物都可以，前提是研究的样本来源是组织或者细胞，提取到的总RNA完整性要好，才会有内参价值。可以给出如下的一对引物：上CTCGCTTCGGCAGCACA；下AACGCTTCACGAATTTGCGT。我想问一下，如果不是采用颈环引物，而是加尾法，引物需要自己设计吗？加尾法是不是就是直接用的试剂盒中的oligo dT引物?还有，U6反转录时到底使用哪种引物好？盼回复，非常感谢！
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&&引​物
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你可能喜欢我要做荧光定量PCR,测细胞因子mRNA,要测三种因子,是否是把三种引物和内参基因引物分别加入到四个体系中
是的,你需要用等量体系分别用每对引物进行PCR.实际操作时,我们要求至少3份biologic replica,用来检测你所测到的表达变化确实是因为实验组与对照组之间的差别.同时这3份biologic replica需要2份technical replica,以确认差异不是由于具体实验操作过程的失误产生的.
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&&形​象​介​绍​内​参​基​因​的​性​质​,​绝​对​定​量​和​相​对​定​量​的​问​题​以​及​标​准​曲​线​法​相​对​定​量​数​据​处​理​问​题​。
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你可能喜欢β-actin在PCR中起着什么作用(内参) - PCR实验 - 生物秀
标题: β-actin在PCR中起着什么作用(内参)
摘要: [β-actin在PCR中起着什么作用(内参)] 我在一些论文中看到很多用β-actin做内参，什么是内参？为什么它能做内参？β-actin在PCR中起着什么作用，请哪位高手告诉我！ 关键词:[内参]……
我在一些论文中看到很多用β-actin做内参，什么是内参？为什么它能做内参？β-actin在PCR中起着什么作用，请哪位高手告诉我！
回复这是前阶段在里看到的，转录如下：内参主要是用来对你的目的条带进行相对定量.如果你是用普通PCR做半定量，那么用18s和b-actin的基因都可以.以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR.任何一种定量PCR技术，如果不设置内参照就必然缺乏精确性，竞争PCR的基本原理是在定性PCR的基础上，在扩增反应管内加入了一种称之为内参照的竞争模板，可以与野生模板即目的片段等效地被扩增。内参照是决定分析系统是否可靠和稳定的关键因素。理想内参照的条件：第一，保证竞争模板与野生模板在PCR过程中扩增效率相同或相近。内参照序列最好与目的片段等长，引物退火区的序列与野生模板相同。第二，扩增产物中的内参照和目的片段可以在扩增过程中或结束后至少通过一种手段被区分和定量。回复谢谢!回复现在常用的内参是GAPDH。它的内参功能比ACTB更稳定。回复我用的内参和目的基因不等长，这样就可以在跑胶时，让目的基因和内参区分开，内参是在细胞中稳定表达的基因，所以可以用来作为对比的指标！回复那我如果只要定性,是不是不需要用到内参?回复定性没有必要用内参。回复这是前阶段在里看到的，转录如下：内参主要是用来对你的目的条带进行相对定量.如果你是用普通PCR做半定量，那么用18s和b-actin的基因都可以.以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为.任何一种技术，如果不设置内参照就必然缺乏精确性，竞争PCR的基本原理是在定性PCR的基础上，在扩增内加入了一种称之为内参照的竞争模板，可以与野生模板即目的片段等效地被扩增。内参照是决定分析系统是否可靠和稳定的关键因素。理想内参照的条件：第一，保证竞争模板与野生模板在PCR过程中扩增效率相同或相近。内参照序列最好与目的片段等长，引物退火区的序列与野生模板相同。第二，扩增产物中的内参照和目的片段可以在扩增过程中或结束后至少通过一种手段被区分和定量。请问，你知道这些内参的大小吗，大约多少个碱基？谢谢！回复这是前阶段在论坛里看到的，转录如下：内参主要是用来对你的目的条带进行相对定量.如果你是用普通PCR做半定量，那么用18s和b-actin的基因都可以.以参照物为标准，对PCR终产物进行分析或对PCR过程进行监测，从而达到评估样本中靶基因的拷贝数，称为定量PCR.任何一种定量PCR技术，如果不设置内参照就必然缺乏精确性，竞争PCR的基本原理是在定性PCR的基础上，在扩增内加入了一种称之为内参照的竞争模板，可以与野生模板即目的片段等效地被扩增。内参照是决定分析系统是否可靠和稳定的关键因素。理想内参照的条件：第一，保证竞争模板与野生模板在PCR过程中扩增效率相同或相近。内参照序列最好与目的片段等长，引物退火区的序列与野生模板相同。第二，扩增产物中的内参照和目的片段可以在扩增过程中或结束后至少通过一种手段被区分和定量。
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