定量PCR知道Ct值那么△Ct 2-△△CT 及标准差怎么算的
△Ct（n）=Ct目的基因（n）-Ct内参基因（n）；△△CT（n）=△Ct（n）-△Ct（1）；然后算出2-△△CT；标准差我是同一处理做了3个平行算出来的.没法下标,用括号处理,
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【求助】到底是 2^-△△Ct 2^△△Ct 还是2-△△Ct？？
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这个帖子发布于2年零50天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请问到底是 2^-△△Ct 2^△△Ct 还是2-△△Ct？？都表达什么意思呢。。各种头痛，数据处理的时候到底需要些什么比较好
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你没理解这个公式是怎么推导而来的。A,B两个样本，靶标基因T和内参基因IC,比如用GAPDH作为内参。记住了，当吧A样本T基因的表达水平作为参照，作为1，计算B样本相对A样本T基因的表达水平时B/A=2^-（（CtTB-CtICB）-（CtTA-CtICA））,写的不好，CtTA就是样本A的T基因的Ct，同理，CtICB就是样本B的内参IC的Ct。这就是-deltadeltaCT，不带-号就是A/B啊。
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有点隔，但你应该看得懂，这个是有前提的，那就是要求靶标基因和内参扩增效率一致。但是就算不一致，这个也能反应大概趋势，就是不准确。要准确的话还是用双标准曲线法。就是麻烦一点，看你的课题要求了
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【求助】q-PCR算出的2-△△CT后，后续用什么统计方法？
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这个帖子发布于3年零140天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
看到很多人提问，但是没有人回到到点上，我想我说的明白一些。我用的是转染A基因到目的细胞后提取的RNA，检测A基因的mRNA的表达量，那么PCR结果就是转染组的CT值和未转染的A基因的CT值，两者分别与各自的内参相减后得到△CT，然后用转染组的△CT减去未转染组的△CT得到△△CT；进过指数转换后得到2^-△△CT;2^-△△CT的意思就是转染组的A基因的mRNA的表达量/没有转染A基因的mRNA的表达量，算出的就是倍数关系。后来作图是把没转染的当做是1，转染的是它的1.6倍。现在的问题是，在统计的时候用成组T检验吗？假如是的话，是输入1和1.6来比较吗？（当然是重复几次的实验）。请大家指导，非常感谢！！！
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嗯。本人意见供参考。统计学方法可以将2-△△CT值在实验组和对照组之间用非参数检验比较差异。差异大小用实验组的△CT均值减去对照组的△CT均值算出其2-△△CT值得出，如最后结果为1.423，即实验组较对照组表达增加了42.3%。前提是之前的2-△△CT值比较有统计学差异，如P&0.05。看了书上写的做表达的后，我是这么理解的。请指教。补充说的是，你们提出的T检验需方差齐同和正态分布才能用，我作的不行，我就用的是非参数检验。
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lxlhcq 我明白你的意思哦，就是说表达增加了42.3%，然后你是通过非参数检验，那也就是对照组是按照100%来算，而实验组是按照142.3%，然后用秩和检验的成组吗？不是。我是先用非参数检验比较了二者的deltaCt值的秩和检验，得出P&0.05之后才取他们deltaCt的均值再算出deltadeltaCt值，其实这也是个均值，然后得出的这个结果。共两步，第一步确认它们有差别，在通过均值的办法算出它们具体差多少。因为我认为直接算均值有可能二者的deltaCt值没差别。我是这么认为的。你的那个思路我也试过，肯定100％有差别，不过感觉失真了，因为对照组也不是都是100%。
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我后来查了统计学书籍才知道。用ｔ检验就可以了。就是ｏｎｅ－ｓａｍｐｌｅ那个。用SPSS１３.０版本。不过自己设计参考平均值，如果是ｄｅｌｔａｄｅｌｔａCT的话就设置零，如果是它的2的相反次方的话就设置１就行了。这个我用参考相对定量的书籍验证了的，是这个意思。ｔ检验中的一种，可用于较小样本。
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有同样的问题，顶一下楼主，希望高手可以回答！PS：如果论坛里可以@各位大牛来回答问题，该多好啊~~
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嗯。本人意见供参考。统计学方法可以将2-△△CT值在实验组和对照组之间用非参数检验比较差异。差异大小用实验组的△CT均值减去对照组的△CT均值算出其2-△△CT值得出，如最后结果为1.423，即实验组较对照组表达增加了42.3%。前提是之前的2-△△CT值比较有统计学差异，如P&0.05。看了书上写的做表达的后，我是这么理解的。请指教。补充说的是，你们提出的T检验需方差齐同和正态分布才能用，我作的不行，我就用的是非参数检验。
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lxlhcq 看到很多人提问，但是没有人回到到点上，我想我说的明白一些。我用的是转染A基因到目的细胞后提取的RNA，检测A基因的mRNA的表达量，那么PCR结果就是转染组的CT值和未转染的A基因的CT值，两者分别与各自的内参相减后得到△CT，然后用转染组的△CT减去未转染组的△CT得到△△CT；进过指数转换后得到2^-△△CT;2^-△△CT的意思就是转染组的A基因的mRNA的表达量/没有转染A基因的mRNA的表达量，算出的就是倍数关系。后来作图是把没转染的当做是1，转染的是它的1.6倍。现在的问题是，在统计的时候用成组T检验吗？假如是的话，是输入1和1.6来比较吗？（当然是重复几次的实验）。请大家指导，非常感谢！！！　　 在单个mRNA分子检测技术成熟以前，对mRNA分子进行绝对定量非常困难，很少有文献说，平均每个细胞有X个某一基因的mRNA分子； ｑＰＣＲ没有这个能力。ｑＰＣＲ是指对模板（ｃＤＮＡ或ＤＮＡ）的定量，不是对ｍＲＮＡ的定量。即使是相对定量，也很困难。采用ＲＴ－PCR的方案时，结果容易受过多的因素和操作影响。例如，１）样本保存；２）转染的效率；３）ＤＮＡ分子的去除；　４）细胞与Ｔｒｉｚｏｌ的比例；５）ＲＮＡ分离纯化；６）ＲＮＡ分子的回收效率；７）反转录的效率（即使是在同一个试管内，不同基因的反转录效率是不一样的：内源与外源ｍＲＮＡ分子之间是有差异的，你有什么证据证明内源与外源基因的反转录效率是一样的？）；８）细胞内的相当一部分ｍＲＮＡ分子没有Ｐｏｌｙ－Ａ；　９）实验操作问题；１０）不同公司产品的差异；１１）人员差异。　最常见的问题是，同样一个实验，本周和上周的结果就有很大差异，到底该相信哪一个？　　　如果实验目的是证明外源基因表达与内源基因表达的相对比例，实验设计本身就有疑问。 通常的方案是，将外源性基因的C-端或N-段加入3XMyc（或HA，FLAG标签），将内源与外源蛋白质（在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上）区分开来，采用Western Blotting检测。 　如果不能加标签，也可以使用ＲＮＡｉ将内源基因去掉后，检测（ＲＮＡｉ－Ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ）外源基因的表达。　你如果必须检测ｍＲＮＡ的相对比例，建议使用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ或ＲＰＡ。　不过，一些ｍＲＮＡ结合蛋白质必须通过剪接才能结合到ｍＲＮＡ分子上，在细胞内，外源与内源ｍＲＮＡ的分布和翻译效率非常可能不一样。
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liuxiys 嗯。本人意见供参考。统计学方法可以将2-△△CT值在实验组和对照组之间用非参数检验比较差异。差异大小用实验组的△CT均值减去对照组的△CT均值算出其2-△△CT值得出，如最后结果为1.423，即实验组较对照组表达增加了42.3%。前提是之前的2-△△CT值比较有统计学差异，如P&0.05。看了书上写的做表达的后，我是这么理解的。请指教。补充说的是，你们提出的T检验需方差齐同和正态分布才能用，我作的不行，我就用的是非参数检验。我明白你的意思哦，就是说表达增加了42.3%，然后你是通过非参数检验，那也就是对照组是按照100%来算，而实验组是按照142.3%，然后用秩和检验的成组吗？
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lxlhcq 我明白你的意思哦，就是说表达增加了42.3%，然后你是通过非参数检验，那也就是对照组是按照100%来算，而实验组是按照142.3%，然后用秩和检验的成组吗？不是。我是先用非参数检验比较了二者的deltaCt值的秩和检验，得出P&0.05之后才取他们deltaCt的均值再算出deltadeltaCt值，其实这也是个均值，然后得出的这个结果。共两步，第一步确认它们有差别，在通过均值的办法算出它们具体差多少。因为我认为直接算均值有可能二者的deltaCt值没差别。我是这么认为的。你的那个思路我也试过，肯定100％有差别，不过感觉失真了，因为对照组也不是都是100%。
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biominda 　　 在单个mRNA分子检测技术成熟以前，对mRNA分子进行绝对定量非常困难，很少有文献说，平均每个细胞有X个某一基因的mRNA分子； ｑＰＣＲ没有这个能力。ｑＰＣＲ是指对模板（ｃＤＮＡ或ＤＮＡ）的定量，不是对ｍＲＮＡ的定量。即使是相对定量，也很困难。采用ＲＴ－PCR的方案时，结果容易受过多的因素和操作影响。例如，１）样本保存；２）转染的效率；３）ＤＮＡ分子的去除；　４）细胞与Ｔｒｉｚｏｌ的比例；５）ＲＮＡ分离纯化；６）ＲＮＡ分子的回收效率；７）反转录的效率（即使是在同一个试管内，不同基因的反转录效率是不一样的：内源与外源ｍＲＮＡ分子之间是有差异的，你有什么证据证明内源与外源基因的反转录效率是一样的？）；８）细胞内的相当一部分ｍＲＮＡ分子没有Ｐｏｌｙ－Ａ；　９）实验操作问题；１０）不同公司产品的差异；１１）人员差异。　最常见的问题是，同样一个实验，本周和上周的结果就有很大差异，到底该相信哪一个？　　　如果实验目的是证明外源基因表达与内源基因表达的相对比例，实验设计本身就有疑问。 通常的方案是，将外源性基因的C-端或N-段加入3XMyc（或HA，FLAG标签），将内源与外源蛋白质（在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上）区分开来，采用Western Blotting检测。 　如果不能加标签，也可以使用ＲＮＡｉ将内源基因去掉后，检测（ＲＮＡｉ－Ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ）外源基因的表达。　你如果必须检测ｍＲＮＡ的相对比例，建议使用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ或ＲＰＡ。　不过，一些ｍＲＮＡ结合蛋白质必须通过剪接才能结合到ｍＲＮＡ分子上，在细胞内，外源与内源ｍＲＮＡ的分布和翻译效率非常可能不一样。高人啊，提出这么多的问题，估计可以作为答辩委员了。
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liuxiys 不是。我是先用非参数检验比较了二者的deltaCt值的秩和检验，得出P&0.05之后才取他们deltaCt的均值再算出deltadeltaCt值，其实这也是个均值，然后得出的这个结果。共两步，第一步确认它们有差别，在通过均值的办法算出它们具体差多少。因为我认为直接算均值有可能二者的deltaCt值没差别。我是这么认为的。你的那个思路我也试过，肯定100％有差别，不过感觉失真了，因为对照组也不是都是100%。如果样本量特别大，比如好几百个样本，也要先用非参数检验比较二者的deltaCt值吗？似乎有点困难吧？
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daizhx 如果样本量特别大，比如好几百个样本，也要先用非参数检验比较二者的deltaCt值吗？似乎有点困难吧？不难。用软件先就算出了deltaCｔ值了，比较有何难。
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常州楚天生物 你好，不是输入差异倍数值，而是利用每组样本中的2^ -ΔCt，来做两组样本之间的T检验。具体在excel中利用TTEST函数即可实现。有不清楚的地方，你再问我。这个回答是正确的。如果2^ -ΔCt不符合T检验或方差分析的条件，把这个值进行1g10（或log2, ln)转换后再分析。非参数分析为次选。
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zyq323 有同样的问题，顶一下楼主，希望高手可以回答！PS：如果论坛里可以@各位大牛来回答问题，该多好啊~~说的也是呀，能否和版主提议一下嘞
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biominda 　　 在单个mRNA分子检测技术成熟以前，对mRNA分子进行绝对定量非常困难，很少有文献说，平均每个细胞有X个某一基因的mRNA分子； ｑＰＣＲ没有这个能力。ｑＰＣＲ是指对模板（ｃＤＮＡ或ＤＮＡ）的定量，不是对ｍＲＮＡ的定量。即使是相对定量，也很困难。采用ＲＴ－PCR的方案时，结果容易受过多的因素和操作影响。例如，１）样本保存；２）转染的效率；３）ＤＮＡ分子的去除；　４）细胞与Ｔｒｉｚｏｌ的比例；５）ＲＮＡ分离纯化；６）ＲＮＡ分子的回收效率；７）反转录的效率（即使是在同一个试管内，不同基因的反转录效率是不一样的：内源与外源ｍＲＮＡ分子之间是有差异的，你有什么证据证明内源与外源基因的反转录效率是一样的？）；８）细胞内的相当一部分ｍＲＮＡ分子没有Ｐｏｌｙ－Ａ；　９）实验操作问题；１０）不同公司产品的差异；１１）人员差异。　最常见的问题是，同样一个实验，本周和上周的结果就有很大差异，到底该相信哪一个？　　　如果实验目的是证明外源基因表达与内源基因表达的相对比例，实验设计本身就有疑问。 通常的方案是，将外源性基因的C-端或N-段加入3XMyc（或HA，FLAG标签），将内源与外源蛋白质（在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ上）区分开来，采用Western Blotting检测。 　如果不能加标签，也可以使用ＲＮＡｉ将内源基因去掉后，检测（ＲＮＡｉ－Ｉｎｓｅｎｓｉｔｉｖｅ）外源基因的表达。　你如果必须检测ｍＲＮＡ的相对比例，建议使用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ　Ｂｌｏｔｔｉｎｇ或ＲＰＡ。　不过，一些ｍＲＮＡ结合蛋白质必须通过剪接才能结合到ｍＲＮＡ分子上，在细胞内，外源与内源ｍＲＮＡ的分布和翻译效率非常可能不一样。高人，您说的很对。所以生物学上的重复是很难做到的呀。细胞传了一代可能的结果就不一样了，但是趋势是一样的。所以在做定量的时候，用倍数的关系来表达比较好看。
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cake2003 这个回答是正确的。如果2^ -ΔCt不符合T检验或方差分析的条件，把这个值进行1g10（或log2, ln)转换后再分析。非参数分析为次选。既然高手们都在，我想再发给求助。我用cDNA做的Taqman qPCR，目的基因的阴性对照在CT值36左右有抬高，（检测样本的CT值在16左右）一开始怀疑是污染，然后就把所有的试剂耗材全部换了新的，还是出现这种情况，基本排除污染的可能，内参基因阴性对照没问题。用的仪器为ABI的7500，qPCR试剂为ABI的mix，仪器的的设置为CT值大于35为阴性，那么我现在阴性对照在CT值36，因此，仪器的错误报告里并没有报告阴性扩增，像这种数据能不能用呢？
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daizhx 既然高手们都在，我想再发给求助。我用cDNA做的Taqman qPCR，目的基因的阴性对照在CT值36左右有抬高，（检测样本的CT值在16左右）一开始怀疑是污染，然后就把所有的试剂耗材全部换了新的，还是出现这种情况，基本排除污染的可能，内参基因阴性对照没问题。用的仪器为ABI的7500，qPCR试剂为ABI的mix，仪器的的设置为CT值大于35为阴性，那么我现在阴性对照在CT值36，因此，仪器的错误报告里并没有报告阴性扩增，像这种数据能不能用呢？当然可以用。所以目的基因Ct值&30是不可信的。
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大家继续讨论，很好哦
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最近在做这方面的实验，很多不懂呀！
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我现在碰到跟您一模一样的问题，您现在可以指导一二吗
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讨论半天没个定论，悲哀啊。
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【求助】请问定量PCR 只计算2-deltaCT（肿瘤） 行吗？
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今天跟老板讨论定量PCR数据分析的问题，他说先分别计算 正常2-delta （N 靶基因-N actin）和肿瘤2-delta （T 靶基因-T actin），经配对T检验有意义后，可以用2-delta （T 靶基因-T actin）的数据检测靶基因表达与临床资料相关性其实当时我就咕噜着这方法不行，不过不敢当面反驳，就想先试试吧，结果，一个基因的正常2-delta （N 靶基因-N actin）和肿瘤2-delta （T 靶基因-T actin），经配对T检验有意义，但是面对2-delta （T 靶基因-T actin），我就想不通了，计算的结果都是大于1的，怎么分析变化倍数呢
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t检验和相关分析是两回事。没有先后之分。变化倍数指的是什么？计算的结果都是大于1---------什么结果？谁和谁比较的？
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我想如何按照老板的说法，那就是计算一种数值，即2-delta（T 靶基因-T actin）但我认为已经不能反映基因的表达倍数
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关于丁香园PCR数据统计里，怎么算2-△△Ct这一值。在excel里用哪个公式_百度知道
PCR数据统计里，怎么算2-△△Ct这一值。在excel里用哪个公式
计算以2 为底的 这个对数 .baidu.jpg" />就是 这里面的F 值 ./zhidao/wh%3D450%2C600/sign=/zhidao/wh%3D600%2C800/sign=9eef1fab8544ebf86d246c39e9c9fb12/abb47adab44bede0&nbsp.谢谢大家啦&nbsp.jpg" esrc="http.hiphotos.jpg" target="_blank" title="点击查看大图" class="ikqb_img_alink"><img class="ikqb_img" src="http？用哪个公式 ？&/zhidao/pic/item/abb47adab44bede0ec://f://f。怎样在 excel表格里 &nbsp://f.hiphotos<a href="http
我有更好的答案
不用公式，直接在excel的表格里键入 =2^
就可以了，^符号是英文输入状态下的shift+6, ^ 后就是你的-△△Ct的数值
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