丙型肝炎病毒核心及E2蛋白在转基因鼠中的表达--《医学信息》1998年08期
丙型肝炎病毒核心及E2蛋白在转基因鼠中的表达
【摘要】：［英］ＰａｓｑｕｉｎｅｌｉＣ，ｅｔａｌ．Ｈｅｐ?ａｔｏｌｏｇｙ．１９９７；２５：７１９～７２７本实验建立了能在肝内表达ＨＣＶ核蛋白的转基因小鼠动物模型，这种转基因小鼠在鼠的主要尿蛋白启动子（ＭＵＰ）的转录控制下于肝细胞浆中表达相当于自然感染患者同等水...
【分类号】：R512.63【正文快照】：
［英］ＰａｓｑｕｉｎｅｌｉＣ，ｅｔａｌ．Ｈｅｐ?ａｔｏｌｏｇｙ．１９９７；２５：７１９～７２７本实验建立了能在肝内表达ＨＣＶ核蛋白的转基因小鼠动物模型，这种转基因小鼠在鼠的主要尿蛋白启动子（ＭＵＰ）的转录控制下于肝细胞浆中表达相当于自然感染患者同等水平
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利用转基因植物作为生物反应器生产药用蛋白的研究逐渐受到各国的重视，如图为我国科研人员利用转基因植物反应器生成丙肝病毒（HCV）抗原蛋白的流程：请据图回答：（1）a过程中需要使用的工具酶是______，b表示______过程．在（运）载体中至少含______个限制酶识别位点．（2）d过程所采用的导人受体细胞的方法是______，检测抗原基因是否整合到染色体上所用的方法是______（3）f过程利用了______技术，该过程得以实现的根本原因是______（4）为了检测HCV抗原蛋白基因在植物体内是否已经表达，常用______技术检测．
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（1）a过程表示获取目的基因，需要使用限制酶；b表示基因表达载体的构建过程；在质粒中至少含 1个限制酶识别位点，以便于插入目的基因．（2）d过程表示农杆菌转化法将目的基因导入植物细胞，检测抗原基因是否整合到...
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据图分析，a表示获取目的基因，b表示基因表达载体的构建，c表示将目的基因导入农杆菌，d表示将目的基因导入植物细胞，e表示将目的基因插入染色体的DNA中，f表示植物组织培养．分子水平上的检测：①检测转基因生物染色体的DNA是否插入目的基因--DNA分子杂交技术；②检测目的基因是否转录出了mRNA--分子杂交技术；③检测目的基因是否翻译成蛋白质--抗原-抗体杂交技术．
本题考点：
基因工程的应用；植物培养的条件及过程．
考点点评：
本题考查利用转基因植物工程生产丙肝病毒（HCV）抗原蛋白的过程，意在考查学生的识图和理解能力，解题的关键是理解基因工程的步骤．
扫描下载二维码调控型表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶转基因小鼠的建立--《临床肝胆病杂志》2011年01期
调控型表达丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶转基因小鼠的建立
【摘要】：目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠。方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A。该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠。首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代。选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(BLI)检测肝脏稳定表达荧光素酶(Luc)报告基因的经盐酸强力霉素(Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群。结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功。经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠。BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础。
【作者单位】：
【基金】：
【分类号】：R-332【正文快照】：
丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A蛋白酶在HCV RNA复制和病毒基因编码的蛋白前体加工成熟中起着关键性作用。研究表明NS3/4A丝氨酸蛋白酶通过调控IRF-3破坏细胞内免疫通路,这提示针对NS3/4A丝氨酸蛋白酶设计的药物抑制剂有着双重作用,能够发挥直接或间接抗病毒的活性,即阻断病毒加工
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