qPCR每次压电传感器实验结果果都不同,为什么

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博凌科为 2 x SYBR Green qPCR Mix (153302) 实验结果图
发布时间 09:39发布人: 博凌科为浏览次数:
客户使用 Bio - Rad& CFX96 实验结果
Roche light cycler 480II 实验结果
本公司的荧光定量mix扩增效率扩增曲线明显更高,融链曲线也非常锐利。
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【求助】QPCR加样及数据处理问题
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这个帖子发布于4年零98天前,其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已关闭悬赏丁当:2
刚接触QPCR相对定量分析方法,有几个问题超级迷茫,希望各位大侠给予帮助,谢谢!1、内参跟目的必须要在同一个体系内吗?可不可以分开做?因为分组太多,一起做的话,PCR仪上的孔不够呀!那我应该怎么做呢?2、我做的是肿瘤小鼠用不同药物处理取组织检测有无基因表达差异,这样的话,我数据处理的时候,应该以哪个组作为校准样本呢,因为校准样本的2∧ΔΔCT数值得出就是1,没有办法进行数据统计,这不就等于少算了一个组吗?(写的很麻烦,希望有人看得懂!)就像下图中组1的情况!
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你是说对照组的量如果看成是1,它的标准误的bar是怎么算出来的是吗?一种方法是:因为同一实验要重复3次,你把3次实验对照组的2-DeltaCt的均值看作1,每次实验的2-DeltaCt值和这个均值算标准误,不就有浮动区间了吗?然后,3次试验组的DeltaCt都要减去对照组的DeltaCt均值,再算2-DeltaDeltaCt。不知我说明白了没有,说的对不对?
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小懒孩 1、内参跟目的必须要在同一个体系内吗?可不可以分开做?因为分组太多,一起做的话,PCR仪上的孔不够呀!那我应该怎么做呢?楼主所说的同一体系应该是指同一批跑PCR,不能分开做,分开的话内参和目的的实验条件可能不一致,这样的话就会导致2-ΔΔCT法所得结果出现偏差,有时甚至很大,分组太多的话没办法,只能同一药物处理下的对照和实验组必须在一起,这样才有可比性,PCR仪孔不够就只能多跑几次。。。2、我做的是肿瘤小鼠用不同药物处理取组织检测有无基因表达差异,这样的话,我数据处理的时候,应该以哪个组作为校准样本呢,因为校准样本的2∧ΔΔCT数值得出就是1,没有办法进行数据统计,这不就等于少算了一个组吗?(写的很麻烦,希望有人看得懂!)就像下图中组1的情况!建议看一下下面这个图,是以对照为校准的。。。
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ljroger3600 这样的话,别的组统计时候都是一个范围,但是第一个组只是1这个数值,这样不就是少了一组的统计数据了吗?
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别的组得出来的结果不是范围啊,就是一个数值;你运用2-ΔΔCT法本来就是相对定量法,所得结果是实验组相比对照组目的分子的相对表达倍数,对照组的数据本身并没有消失啊,只是相当于变为“1”了。。。
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ljroger3600 别的组得出来的结果不是范围啊,就是一个数值;你运用2-ΔΔCT法本来就是相对定量法,所得结果是实验组相比对照组目的分子的相对表达倍数,对照组的数据本身并没有消失啊,只是相当于变为“1”了。。。不是数据处理的之前,是三次重复试验,每次三个平行样的嘛,所以到时候出来的肯定不是一个数值,而是一个区间啊,是吧
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三次重复得到均值而后用2-ΔΔCT法,只有一个相对倍数啊。。。
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ljroger3600 三次重复得到均值而后用2-ΔΔCT法,只有一个相对倍数啊。。。哦,好吧!可是看人家文献上都有一个区间范围的,不知道怎么得来的
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我汗。。。把文献上传一份。。。一起讨论讨论。。。
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你是说对照组的量如果看成是1,它的标准误的bar是怎么算出来的是吗?一种方法是:因为同一实验要重复3次,你把3次实验对照组的2-DeltaCt的均值看作1,每次实验的2-DeltaCt值和这个均值算标准误,不就有浮动区间了吗?然后,3次试验组的DeltaCt都要减去对照组的DeltaCt均值,再算2-DeltaDeltaCt。不知我说明白了没有,说的对不对?
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相对定量肯定得找个标准的,那个1就是标准,其实那个区间应该是三次的平均值加减标准误
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对照组好像就应该是1,没有标准误,大老板是这么说的。重复试验没次都是以对照组为参照,它每次都是1
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ljroger3600 小懒孩 1、内参跟目的必须要在同一个体系内吗?可不可以分开做?因为分组太多,一起做的话,PCR仪上的孔不够呀!那我应该怎么做呢?楼主所说的同一体系应该是指同一批跑PCR,不能分开做,分开的话内参和目的的实验条件可能不一致,这样的话就会导致2-ΔΔCT法所得结果出现偏差,有时甚至很大,分组太多的话没办法,只能同一药物处理下的对照和实验组必须在一起,这样才有可比性,PCR仪孔不够就只能多跑几次。。。2、我做的是肿瘤小鼠用不同药物处理取组织检测有无基因表达差异,这样的话,我数据处理的时候,应该以哪个组作为校准样本呢,因为校准样本的2∧ΔΔCT数值得出就是1,没有办法进行数据统计,这不就等于少算了一个组吗?(写的很麻烦,希望有人看得懂!)就像下图中组1的情况!建议看一下下面这个图,是以对照为校准的。。。那这样子算出来,
treated2是untreated 表达量的20倍吗?但是如果是算CT差的话untreated表达量是更高的呀??
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oabco22 那这样子算出来,
treated2是untreated 表达量的20倍吗?但是如果是算CT差的话untreated表达量是更高的呀??CT值越高 表达量越低 untreatedCT值高 所以表达量最低
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