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为什么先下游，后施工上游再中游，请说个原理
08:54　来源：建设工程教育网　 |
　　【提问】为什么先下游，后施工上游再中游，请说个原理？　　【回答】学员1768tv，您好！您的问题答复如下：　　由施工顺序和决定的，施工的顺序一般都是先下后上的，当多排时，为了保证浆液的一致稳定性，就采用先下后上再中游。两排孔组成的帷幕，宜先进行下游排孔的灌浆，在进行上游排孔的灌浆，就是施工工艺的要求。　　★问题所属科目：——水利水电工程管理与实务责任编辑：Amanda
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基因工程基因工程（genetic&engineering）又称基因拼接技术和DNA重组技术。所谓基因工程是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术，是将外源基因通过体外重组后导入受体细胞内，使这个基因能在受体细胞内复制、转录、翻译表达的操作。基因工程是生物工程的一个重要分支大脑彩虹图，它和细胞工程、酶工程、蛋白质工程和微生物工程共同组成了生物工程。所谓基因工程（genetic engineering）是在分子水平上对基因进行操作的复杂技术。它是用人为的方法将所需要的某一供体生物的遗传物质——DNA大分子提取出来，在离体条件下用适当的工具酶进行切割后，把它与作为载体的DNA分子连接起来，然后与载体一起导入某一更易生长、繁殖的受体细胞中，以让外源物质在其中“安家落户”，进行正常的复制和表达，从而获得新物种的一种崭新技术。它克服了远缘杂交的不亲和障碍。1974年，波兰遗传学家斯吉巴尔斯基（Waclaw Szybalski）称基因重组技术为合成生物学概念，1978年，诺贝尔医生奖颁给发现DNA限制酶的纳森斯（Daniel Nathans）、亚伯（Werner Arber）与史密斯（Hamilton Smith）时，斯吉巴尔斯基在《基因》期刊中写道：限制酶将带领我们进入合成生物学的新时代。2000年，国际上重新提出合成生物学概念，并定义为基于系统生物学原理的基因工程。重组DNA技术的基本定义重组DNA技术是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传并表达出新产物或新性状的DNA体外操作程序，也称为分子克隆技术。因此，供体、受体、载体是重组DNA技术的三大基本元件。基因工程的基本定义狭义上仅指基因工程。是指将一种生物体（供体）的基因与载体在体外进行拼接重组，然后转入另一种生物体（受体）内，使之按照人们的意愿稳定遗传，表达出新产物或新性状。重组DNA分子需在受体细胞中复制扩增，故还可将基因工程表征为分子克隆（Molecular Cloning）或基因克隆（Gene Cloning）。广义上包括传统遗传操作中的杂交技术、现代遗传操作中的基因工程和细胞工程。是指DNA重组技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术：基因重组、克隆和表达的设计与构建（即DNA重组技术）；下游技术：基因工程菌（细胞）的大规模培养、外源基因表达产物的分离纯化过程。广义的基因工程概念更倾向于工程学的范畴。广义的基因工程是一个高度的统一体：上游重组DNA的设计必须以简化下游操作工艺和装备为指导思想；下游过程则是上游重组蓝图的体现与保证。---基因工程产业化的基本原则。基因工程是指重组DNA技术的产业化设计与应用，包括上游技术和下游技术两大组成部分。上游技术指的是基因重组、克隆和表达的设计与构建（即重组DNA技术）；而下游技术则涉及到基因工程菌或细胞或基因工程生物体的大规模培养以及基因产物的分离纯化过程。基因工程是利用重组技术，在体外通过人工“剪切”和“拼接”等方法，对各种生物的核酸（基因）进行改造和重新组合，然后导入微生物或真核细胞内，使重组基因在细胞内表达，产生出人类需要的基因产物，或者改造、创造新特性的生物类型。从实质上讲，基因工程的定义强调了外源DNA分子的新组合被引入到一种新的寄主生物中进行繁殖。这种DNA分子的新组合是按工程学的方法进行设计和操作的，这就赋予基因工程跨越天然物种屏障的能力，克服了固有的生物种（species）间限制，扩大和带来了定向改造生物的可能性，这是基因工程的最大特点。基因工程包括把来自不同生物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构成新的重组的DNA，然后送到受体生物中去表达，从而产生遗传物质的转移和重新组合。基因工程要素：包括外源DNA，载体分子，工具酶和受体细胞等。一个完整的、用于生产目的的基因工程技术程序包括的基本内容有：（1）外源目标基因的分离、克隆以及目标基因的结构与功能研究。这一部分的工作是整个基因工程的基础，因此又称为基因工程的上游部分。（2）适合转移、表达载体的构建或目标基因的表达调控结构重组。（3）外源基因的导入。（4）外源基因在宿主基因组上的整合、表达及检测与转基因生物的筛选。（5）外源基因表达产物的生理功能的核实。（6）转基因新品系的选育和建立，以及转基因新品系的效益分析。（7）生态与进化安全保障机制的建立。（8）消费安全评价。特征1）跨物种性外源基因到另一种不同的生物细胞内进行繁殖。2）无性扩增外源DNA在宿主细胞内可大量扩增和高水平表达。优点基因工程最突出的优点是打破了常规育种难以突破的物种之问的界限，可以使原核生物与真核生物之间、动物与植物之间，甚至人与其他生物之间的遗传信息进行重组和转移。人的基因可以转移到大肠杆菌中表达，细菌的基因可以转移到植物中表达。[1]&支撑技术核酸凝胶电泳技术核酸分子杂交技术细菌转化转染技术DNA序列分析技术寡核苷酸合成技术基因定点突变技术聚合酶链反应技术标签:&nbsp&nbsp&nbsp&nbsp关注今日：2 | 主题：25023
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交流贴：讨论一下上游细胞工艺开发的挑战？
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RT，现在表达量越来越高，细胞培养基和生物反应器也越来越“平台化”和“智能化”，大家觉得还有哪些亟待解决的挑战呢？比如，如何通过培养基和工艺开发降低Fut8.
不知道邀请谁？试试他们
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如何降低N糖型中Man5?欢迎大家参加讨论并分享经验！
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关于细胞培养方面大家交流的确实少，是不是处于保密还是目前应用平台工艺较多，没有刻意去调整，了解过几个公司，做biosimilar对于培养工艺包给CRO来做了，CRO肯定不愿意说那么多，只告诉你能搞定。但是部分平台工艺技术还是建议大家多交流。
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caijunlee 如何降低N糖型中Man5?欢迎大家参加讨论并分享经验！我们有用过甜菜碱调节Man5，还是有点效果的，但降低的幅度不大。
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caijunlee 如何降低N糖型中Man5?欢迎大家参加讨论并分享经验！文献里报道增加锰离子，或者降低铜离子可以改善曼舞，但是我们没有做过实验
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六年一世 caijunlee 如何降低N糖型中Man5?欢迎大家参加讨论并分享经验！文献里报道增加锰离子，或者降低铜离子可以改善曼舞，但是我们没有做过实验谢谢！
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扬帆起杭 caijunlee 如何降低N糖型中Man5?欢迎大家参加讨论并分享经验！我们有用过甜菜碱调节Man5，还是有点效果的，但降低的幅度不大。多谢啊，会明显影响生长和表达吗？甜菜碱浓度大约多少？再次感谢啊
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敢问大神，调节酸碱峰，有什么经验？
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还是要靠突变去解决Fut8的问题
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上游工艺的最大的挑战归纳起来主要是：1）理化质量优化：糖基化、电荷异质性、纯度、多聚体等。2）工艺放大。这二个是目前还没有有办法完全解决的难题。
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抗体现在大都做创新药了，质量优化这块已经不是重点了，主要还是产量和工艺放大
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应届生刚进入一国内某生物制药公司，觉得上游细胞培养貌似真的没什么技术含量，连行政部门都敢指手画脚。。。。
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dingdou123 应届生刚进入一国内某生物制药公司，觉得上游细胞培养貌似真的没什么技术含量，连行政部门都敢指手画脚。。。。我觉的说上游工艺简单的其实是不懂上游工艺的。做好上游细胞培养还是很有技术含量的，我觉的是生物制药技术中最具挑战的方向。
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dingdou123 应届生刚进入一国内某生物制药公司，觉得上游细胞培养貌似真的没什么技术含量，连行政部门都敢指手画脚。。。。不要捣乱，把楼整歪了，哈哈。每个环节做牛了都牛。上游培养在整个环节中做好还不是那么容易的。你多看看论坛就发现了，尤其是生物类似物，很多都是推回到上游细胞培养解决的。
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ggghhhh 我觉的说上游工艺简单的其实是不懂上游工艺的。做好上游细胞培养还是很有技术含量的，我觉的是生物制药技术中最具挑战的方向。是的，我们目前对于细胞的行为仍不甚了解。细胞里面到底发生了什么，仍然是摸瞎子。希望领导们也能像你这么想就好了。
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dingdou123 应届生刚进入一国内某生物制药公司，觉得上游细胞培养貌似真的没什么技术含量，连行政部门都敢指手画脚。。。。何以见得？敢问是哪家公司的行政这么牛逼？培养工艺的开发可是直接决定产品的生产成本以及产品质量。没有好的药品质量如何通过临床试验？没有好的表达水平如何在市场上与对手竞争？
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