westonblotsds page电泳缓冲液液中没有加sds能不能用

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-06-16 02:36 标签： sds电泳缓冲液
Western blot实验电泳时 Marker条带不清晰,很弥散,无法辨别有几条带,请问什么原因可以导致啊?
Western blot实验电泳时 Marker条带不清晰,很弥散,无法辨别有几条带,请问什么原因可以导致啊?
我觉得主要是胶和电泳缓冲液的问题,Tris 8.8 6.8 浓度,pH是否正确.SDS的纯度可能也有关系.丙烯酰胺的浓度,交联度合适不合适.做胶的时候各种溶液是否加的正确,胶的浓度是否合适,电泳缓冲液的浓度,pH有无问题.marker是不是时间太长了.
与《Western blot实验电泳时 Marker条带不清晰,很弥散,无法辨别有几条带,请问什么原因可以导致啊?》相关的作业问题
如果用的Marker有颜色,对颜色.如果是一色的,往往是最小的那个很淡看不清.
两种选择.&鼎国生物最近推出团购,很超值&WB的试剂盒套装.&如果您不想自己做,其公司也有WB的实验技术服务.&希望能帮到你!
这简单,恒流,电压最大,电流250V,时间90min,我跑的是130kDa 再问： 不是恒流吗 电流多少啊 ? 再答： 恩，写错了：电流250毫安
一般按我的经验,12%以上的胶,当你的溴酚蓝那条线离板底0.5cm左右就停止电泳的话,Maker都是能跑出7条带的,当然前提是你的胶浓度是准确的.而15%的胶一般溴酚蓝跑出板底也基本能跑出7条带,因为好几次忙不过来,跑电泳的时候忘记了,经常会出现这种情况,但是经过长期实验,发现没有问题.同时,若您的胶浓度只有10%或者
就是抗体的特异性不强,可能是多抗,导致最后压片显影的时候会出现除目的以外的其他条带.
你的问题好多啊1 滤纸是上下都有的 之所以小一点儿 是怕上下的滤纸边缘直接短路,相连导致电子不能从胶穿过,这样不能达到很好的转移效率2 可以用BSA,具体多大浓度,可以参照脱脂奶粉的3 这个检测没多大用处吧 如果非要探讨这个问题 可以拿转完的胶再去染色（考马斯亮蓝或银染）4 显色系统 基本就是HRP催化的DAB TMB
试剂：tris、Hcl、Nacl、脱脂牛奶、甲醇、甘氨酸、tuwen20、一抗、二抗、显色剂及SDS-PAGE需要的试剂（tris、Hcl、TEMED、SDS、过硫酸铵、丙烯酰胺、N,N-甲叉双丙烯酰胺、甘氨酸、非预染蛋白Marker、甲醇、乙酸、考马斯亮蓝R250）、预染蛋白Marker耗材：滤纸、PVDF膜或NC膜
地图样背景不均一应该是压夹压力不均一或者底物没上均匀.看来你的抗体已经挂掉了.如果还能曝出条带就用两三张底片叠起来曝光,取最上面的凑合用吧.
首先要设计上样的顺序,一般是让与抗体有反应的样品和没有反应的样品间隔开,这样条带之间反差比较明显.比如你的检测样能够与抗体反应,上样就是maker—阳性对照—阴性对照—检测样(N个),如果检测样比较多,可以在检测样后再加上一个阴性对照和阳性对照.上样量一般5-20微升(样品与上样buffer混合后),可以先做个普通的染
主要仪器电泳仪 电泳槽 成像仪其他乱七八糟各种试剂耗材怎么也得20W+吧 再问： 其中最主要的仪器，最贵的设备是哪些？好像固定资产中成像仪最贵吧。 再答： 最贵的肯定是成像设备啦
阳性对照、阴性对照、你的样品.如果同时做两块胶,其中一块用来做染色的话,最好加上marker.除了marker,其他的样都要加等量的上样缓冲液.
DNA分子梯度：指从1-100bp的DNA标准片段,可作为marker.但是条带数可能还不一样,有的marker范围广,但是条带少,分辨率就低；有的marker分子量范围窄,但是条带多,分辨率就高选择需要注意：1目的分子大小,如果你的目的分子在100bp以内,你可以选择100bp的marker2当然如果你目的分子不止一
10%的分离胶,20ul上样量 再问： 我做的那个蛋白浓度只有300ng/μl，我现在上的是每孔30μl，但是蛋白条带还是很浅很细。
朋友,简单的这么问没有意义. 答案取决于你的结果的成像方法.具体来说1如果用传统胶片做载体来显影,你的条带就是蓝色背景上更深的黑色,这时条带越黑反映蛋白量越大,相对灰度也越大,反之亦然.即相对灰度与蛋白量成正比.2如果用凝胶成像仪成像,条带是正片还是反转片是可以选择的, 如果你把条带设成白色,背景设成黑色那就应该是条带
一般浓缩胶为80V,这样可以达到较好的浓缩效果,当条带达到分离胶时,可以调到220V,这样时间快点,做Wb时蛋白降解较少.转膜时一般为100V,转膜时间要根据蛋白大小确定,130kD蛋白分子较大,最好时间长点,不过太长也不好,蛋白转透过膜的,大约要1个半小时吧.
是不管加多少都很暗么,是的话,就换个Marker吧,如果不是,就多加点喽.我们实验室的DNA Marker是那种至少要加5ul才有正常条带的.不过暗也没关系吧,看得见就行吧.
是啊.对此深有同感!不过幸运的是我一进实验室就遇到几个很好的师姐!建议：多看文献.也可以去类似丁香园、生物谷的实验论坛.上面好东西很多.下载个关于western的protocol就什么问题都解决咯~
电泳分为琼脂糖凝胶电泳和SDS-PAGE蛋白电泳,因此也有对应的Marker,不管哪种Marker都是作为一个参照,通过对比来确定样品的大小.小木虫 --- 600万学术达人喜爱的学术科研平台
热门搜索：
&&关于western blot SDS电泳时溴芬兰线弥散的问题
关于western blot SDS电泳时溴芬兰线弥散的问题
我刚做WB，是大鼠肝组织。电泳的时候发现在浓缩胶里面样品压的不是很直，重要的是不像marker压的那样细，而且跑着跑着就会有弥散的现象，样品都跑跑到分离胶了但是marker还没到；电泳条件是浓缩胶50V，分离胶80V；转完我就用考染了一下胶， 发现我的泳道上半节还可以算清楚，下半截就不清晰了&&而且连在一起，那位熟手有遇见这种状况给指点下有可能是什么原因呢？是浓缩胶太长了还是电泳时电压太低了？或者是别的原因啊
psb.jpg在浓缩胶里
2.jpg分离胶里
不好意思，前些日子没来的及回复，我用的是4%浓缩胶，10%的分离胶，蛋白最大的二百多，最小的36，电压用的是50Ｖ ，80V。
你的蛋白相差那么大，两百多的可用8%的分离胶跑，小的可用12%的分离胶跑，合在一起可能就跑的不好。电压的话在提高点，其实那么低也是可以跑的，就是时间慢点，如果胶浓度比较大的话低电话就很难跑下来，
学术必备与600万学术达人在线互动！
扫描下载送金币Western blot实验技术服务
公司新闻动态
辉骏金牌服务
技术服务合同
辉骏成功服务客户
Western blot实验技术服务
&&& 采用的是变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质混合物，经过SDS-PAGE分离的蛋白质被到转移到固相支撑物（膜，膜等）上后，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持膜上蛋白质或多肽的抗原性质不变，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与其对应的抗体发生免疫反应，一抗再与酶标记的二抗体起反应，经过底物显色以检测特异蛋白质表达水平。
&&& 由于技术服务具有简便，快捷等特点，所以目前该技术也被广泛应用于蛋白质表达水平的检测。
技术服务服务内容
蛋白质抽提与定量；
图片分析；
实验服务报告提交。
三、送样须知，为了保证技术服务能顺利进行，样品寄送需满足以下要求：
&&& 顾客提供：组织、细胞、蛋白质溶液等；一抗（如果公司抗体库里没有）。
&&& 运输要求：干冰或液氮包装寄送，广州本地客户可上门收样。
&&& 注：样本应避免各类污染和反复冻融。
实验服务报告内容
蛋白质浓度及电泳上样量；
原始胶片、电子图片及图片分析结果；&&
完整的实验报告,包括实验步骤、使用仪器和试剂等。
六、实验服务周期及收费标准: 咨询本公司
七、质量承诺：利用内参精确定量，并提供清晰、客观的western结果。
附：实验步骤
&Western blot蛋白质提取：根据实验目的的不同选择不同的裂解液，如裂解液、裂解液、裂解液，同时根据蛋白质提取组分的不同选择不同的方法，如提取核蛋白，细胞质蛋白，膜蛋白等。
&蛋白定量，根据蛋白质的提取条件不同，可采取不同的定量方法，如法、法等。
&电泳，依据需要检测蛋白的分子量选取分离胶的浓度，分别配置分离胶和积成胶，凝胶凝固后进行蛋白质上样和电泳。
&转膜，可采取半干法和湿法转移，当采取半干法转膜时需防止短路：从下到上的顺序：滤纸/PVDF膜/凝胶/滤纸/阴极（转膜仪)。
&封闭：脱脂奶粉或封闭过夜或室温小时,孵育时间可根据实验需要进行改变。
一抗孵育，脱脂奶粉稀释一抗到合适的浓度，与膜室温孵育1小时或4度过夜，孵育时间可参考抗体说明书，并加以优化，一抗孵育后洗膜次，每次分钟。
&二抗孵育，脱脂奶粉稀释二抗到合适的浓度，与膜室温孵育1小时，TBST洗膜次，每次分钟。
&显影法）：将两种底物按比例稀释混合均匀后滴在膜上，置于压片盒中，迅速盖上胶片，关闭胶盒进行曝光，曝光一定时间后取出胶片，浸入显影液中显影，直到出现清晰的蛋白质条带，清水漂洗一下后放在定影液中至底片完全定影，清水冲净晾干，标定，扫描胶片和 图片分析。
广州辉骏生物科技有限公司
地址：广州市萝岗区科学城科技企业孵化园区
7x24小时客服电话：020-
© 广州辉骏生物科技有限公司 版权所有 粤ICP备号

我要回帖

更多关于 sds电泳缓冲液 的文章

 

随机推荐