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PCR产物浓度测定问题
请问PCR产物经乙醇沉淀后测定260 nm处的OD值的做法合理吗？乙醇沉淀能否去除剩余的dNTP和引物？如果去除不了，剩余的dNTP和引物对测定的OD值是不是影响很大？这样测出的PCR产物浓度应该偏大吧？如果利用过柱纯化的方法是否能去除剩余的dNTP和引物？
（乙醇沉淀方法：PCR结束后，加入0.1倍体积醋酸钠（3M，Ph5.2）和2.5倍体积的无水乙醇，冰浴10 min，12000 rpm离心10 min；轻轻倒掉上清，再加500 μl 75%乙醇洗涤。4℃，7500 rpm离心5 min，再倒掉上清，干燥沉淀；加入无菌水溶解纯化的PCR产物，紫外分光光度计测定260 nm处的吸光度，计算反应产物浓度）
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随时随地聊科研提高RT-PCR的灵敏度和产物长度_化工_中国百科网
提高RT-PCR的灵敏度和产物长度
    
摘要&&& RT－PCR 已经成为研究者确定感兴趣的器官、组织或细胞中mRNA 转录本出现、结构和表达水平的基本方法。RT－PCR的基本步骤包括：首先对样品中出现的所有mRNA 合成一个cDNA拷贝，接着扩增感兴趣的基因。因为两个步骤中使用的反应缓冲液不能兼容，所以这两个步骤（RT 和PCR）通常分别进行。即使有些试剂盒能将两个步骤合而为一，但是同样因为上述的缓冲液不兼容性，极大地限制了检测灵敏度。Eppendorf 设计了一个含有全新化学物质的新试剂盒，使一步法RT－PCR 更加有效，在两步法实验中可以获得更高的灵敏度。本文将对新试剂盒的表现进行检验。简介&&&&& 逆转录（RT）以及随后进行的PCR（RT－PCR）是RNA 分析中使用得最广泛的技术之一。如果需要平行分析多个RNA 样品，首选方法为一步法RT－PCR。如果要扩增困难目标片段或从单一cDNA 池中扩增多重目标片段则会选择两步法。Eppendorf 推出的全新的cMaster RTplusPCR 系统适用于各种RT－PCR 应用。它含有一种全新的重组逆转录酶和一种具有高保真性的PCR 酶混合物。另外，RTplusPCR反应缓冲液能够自动调节镁离子浓度，因此这一重要成分的浓度无需优化。这种自我调节的效果是通过对镁离子的弱螯合作用来实现的。如果镁离子浓度过高，螯合剂会与过剩的镁离子结合，如果反应（Taq 或DNA）需要镁离子，镁离子就会被释放出来。这种创新技术提高了cMaster RTplusPCR的灵敏度和特异性。使cMaster RTplusPCR试剂盒既能进行一步法，又能进行两步法RT－PCR，而且具有很大的动力学检测范围，能扩增得到的PCR产物长度范围也很大（一步法反应最长可扩增5.3 kb片段；两步法方案最长能扩增12.3 kb 片段）。下面的实验可以展示该试剂盒在不同应用中的表现。&&& 实验1关注新试剂盒在一步法RT－PCR 中卓越的灵敏度。而在一步法应用中，最重要的因素就是能够采用尽可能少的目标材料进行有效工作。&&& 实验2显示应用一步法方案进行长距离RT－PCR 不再是个难题。试剂盒中创新的缓冲液能同时保证逆转录酶和高保真酶混合物都具有最佳延伸性。&&& 本系统提供的两步法RT－PCR 备选程序适用的模板范围很广。实验3描述了对不同模板的扩增情况。这个新的系统能为所有的RT目标提供全面解决方案，不论需要扩增的片段是中等长度还是极长，不同来源的总RNA 中转录本是低丰度还是高丰度。材料和方法Eppendorf cMaster RTplusPCR系统Eppendorf Perfect RNA Eukaryotic试剂盒所有的PCR反应均在Eppendorf Mastercycler& gradient梯度PCR仪上进行。实验1：一步法灵敏度检测RT－PCR&扩增目标：500 bp 的人&微管蛋白mRNA 片段。模板RNA：从人HELA细胞中纯化的总RNA。反应中应用的模板浓度从1&g递减至10pg。方案：Eppendorf cMaster RTplusPCR系统，标准一步法RT－PCR方案。1:10 稀释RTplusPCR 缓冲液，镁离子终浓度2.5 mM，反应总体积50&l&循环参数：
循环 步骤 温度 时间 描述
1x 1 50&C 30分钟 逆转录
1x 2 94&C 3分钟 初始变性
40x& { 3 94&C 15秒 模版变性
4 68&C 45秒 引物退火/延伸
cMaster RTplusPCR 系统显示出一种依赖于模板RNA 量的宽广的产物产量动力学范围。能从低至10 pg 的HELA 总RNA中检测到&微管蛋白mRNA。
　实验2：一步法扩增长片段RT－PCR&扩增目标：5.3 kb 的人结节性脑硬化因子（hTSF）mRNA 片段。模板RNA：从人HELA 细胞中纯化的总RNA。反应中应用的模板浓度为100 ng 和10 ng。方案：Eppendorf cMaster RTplusPCR 试剂盒，针对长模板的特殊RT－PCR 方案。设置一步法RT－PCR 反应。
成分 50&l RT－PCR反应体积 反应成分的终浓度
不含RNA 酶的水 2.5&l 　
dNTP 混合物 每种dNTP 浓度均为10 mM 2.5&l& 500&M
hTSF正向引物& 1.0&l 200 nM
hTSF反向引物& 1.0&l 200 nM
总HELA RNA& 3.0&l& 每个反应中中含10ng－100ng
MasterMix 1& 10.0&l& 　
不含RNA 酶的水 34.0&l 　
含镁离子的RTplusPCR 反应缓冲液& 5.0&l 1&；2.5 mM 镁离子
cMaster RT 酶& 0.5&l 0.15U /&l
cMaster PCR 酶混合物 0.5&l& 0.05U /&l
MasterMix 2 40.0&l& 　
&循环程序参数
循环 步骤 温度 时间 描述
1x 1 65&C 5分钟 初始RNA变性
1x 2 42&C 60分钟 逆转录
1x 3 93&C 3分钟 初始变性
35x& { 4 94&C 15秒 模版变性
5 59&C 30秒 引物退火
6 68&C 5.5分钟 引物退火
如图2 所示，应用一步法RT－PCR 方法，可以从100 ng 和10 ng 总RNA 中检测到5.3 kb 的hTSF PCR 产物。这个PCR 反应非常困难，大多数RT－PCR 试剂盒生产厂家从未发布过应用一步法方案，有效扩增类似长度模板的结果。相反，Eppendorf 试剂盒能稳定可靠地从10 ng HELA 细胞RNA 中扩增该产物。
　实验3：两步法RT－PCR&两步法RT－PCR 的扩增目标：500 bp 的（鼠和人）&微管蛋白mRNA 片段1.3kb 的（鼠和人）肿瘤坏死因子受体（TNFR1）mRNA 片段5.3 kb 的人结节性脑硬化因子（hTSF）mRNA 片段12.3 kb 的鼠动力蛋白mRNA 片段方案：Eppendorf cMaster RTplusPCR 试剂盒，采用产品说明书中的针对普通长度模板和较长模板的两步法RT－PCR 程序。所有的逆转录反应均采用0.5&g 的Oligo（dT）20 引物为引物。设置第一步RT 反应
成分 以Oligo（dT）20 为引物进行逆转录& 反应成分的终浓度
不含RNA 酶的水 加至MasterMix 1 总体积为10&l 　
dNTP 混合物 每种dNTP 浓度均为10 mM 1.0&l& 1mM
Oligo（dT）20 引物（0.5&g /&l）& 1.0&l 25ng/&l
模版RNA& 　 　
HELA （350ng/&l） 3.0&l& }& 1&g总RNA
A细胞（1 &g/&l） 1.0&l
L细胞（220ng/&l） 4.5&l
McCoy细胞（135ng/&l） 7.0&l
MasterMix 1& 10.0&l& 　
不含RNA 酶的水 5.0&l 　
含镁离子的RTplusPCR 反应缓冲液& 4.0&l 2&；5 mM 镁离子
RTplusPCR 反应缓冲液 　 　
cMaster RT 酶& 1&l& 0.75U /&l
MasterMix 2 10.0&l& 　
设置第二步PCR 反应
成分& 普通PCR（微管蛋白TNFR1） 长片段（动力蛋白，hTSF） &反应成分终浓度
不含RNA 酶的水& 7.0&l 6.0&l& 　
正向引物& 1.0&l 1.0&l 0.2&M
反向引物 1.0&l 1.0&l 0.2&M
第一步逆转录反应产物 1.0&l& 2.0&l &N / A
MasterMix 3&& 10.0&l 10.0&l& 　
　 　 　 　
不含RNA 酶的水& 33.6&l 32.0&l 　
含25 mM 镁离子的RTplusPCR 反应缓冲液& 5.0&l - 1&；2.5 mM 镁离子
含25 mM 镁离子的 10&Tuning 反应缓冲液 － 5.0&l &1&；2.5 mM 镁离子
dNTP 混合物/ 每种dNTP 浓度均为10 mM &1.0&l 2.5&l 200&M（500&M）
cMaster PCR 酶混合物 0.4&l（2U） 0.5&l（2.5U） 0.04－0.05 U /&l
MasterMix 4& 40.0&l& 40.0&l 　
&RT反应条件
步骤 温度 时间 描述
1 65&C 5分钟 初始模版变性
2 0&C 5分钟 冷却变性模版
3 42&C 60分钟 第一链cDNA合成
4 -20&C 直到PCR 引物退火/延伸
注：动力蛋白的逆转录孵育时间延长至90 分钟。
循环 步骤 温度 时间 描述
1x 1 94&C 3分钟 初始变性
35x& { 2 94&C 15秒 模版变性
3 68&C 40s/60s 引物退火/延伸
* && 微管蛋白** && TNFR1hTSF 和动力蛋白的三步循环方案
循环 步骤 温度 时间 描述
1x 1 93&C 3分钟 初始模版变性
35x { 2 93&C 15秒 模版变性
3 56&C 30秒 引物退火
4 68&C 12分钟 引物延伸
　不同大小目的片段所采用的延伸时间和退火温度
目的片段 微管蛋白 TNFR1 hTSF& 动力蛋白
延伸时间（PCR） 40秒 1分钟 5.5 分钟 12 分钟
退火温度 68℃ 68℃ 59℃ 56℃
退火时间 & & 30 秒 30 秒
每循环增加时间 & & & 20 秒
　 对5 种不同表达水平的基因进行RT－PCR。为了得到最高的灵敏度，RT 和PCR 反应分开进行。如图3 所示，对于&微管蛋白和TNFR1，我们可以应用两步法RT－PCR 方法并将退火和延伸步骤合并为进行一次68℃ 孵育。如图3 所示，无论片段长度大小和拷贝数高低，所有反应都可以顺利进行。即使对于动力蛋白这种特别长（达12.3 kb）的极端稀有转录本，用cMaster RTplusPCR 系统也能够进行有效扩增，而且结果具有极佳的重复性，表明即使对于困难的RT－PCR 反应， Eppendorf 试剂盒也能获得可靠结果。 　
　讨论&&& cMaster RT 系统是为了给所有的RT 和RT－PCR 应用提供最大的灵活性而设计的。该试剂盒结合了重组的同二聚体病毒逆转录酶和独特的RTplusPCR 反应缓冲液系统，可以在较宽的温度范围（37℃－60℃）和0.2kb-12.5kb产物大小范围内进行有效的cDNA 合成。cMaster RTplusPCR 酶混合物兼具热稳定性DNA 聚合酶活性，校正功能辅助的保真性和高延伸效率。应用于一步法中，可以灵敏地检测到极少量的总RNA 并扩增出长达5.3 kb的cDNA（参见图1 和图2） 两步法方案可以从RT 反应中扩增多个目的cDNA，PCR产物的片段长度可增加至12.3 kb（参见图3） 其他的扩展应用：系统的逆转录部分即cMaster RT 可以与任何PCR系统合用或者为其他下游应用如杂交实验合成cDNA 探针。
收录时间:日 22:07:36 来源:中国化工机械设备网 作者:匿名
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求助：PCR产物浓度太低！
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这个帖子发布于12年零56天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
本来想把我的PCR产物40ul拿给公司测序，但公司说浓度太低，都不能纯化。求助各位老师！我测序前曾跑过胶的，选比较亮的条带那个DNA给的公司。那么，我需先动哪个环节，来重新PCR？谢谢！
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多扩两管, 纯化后再送去测序.
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不知你的PCR产物是哪一步的。一般我们测序，都是先将PCR产物先做一下连接，然后在将连接产物转化在菌种，然后将菌种送去公司测序。
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我的产物是DNA抽提后扩增产物，没有做成cDNA。另外，我没有纯化，想让公司给有纯化测序，可公司说连纯化都成问题！！
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用回收产物再次PCR
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PCR产物浓度低，最主要的是二聚体太多，也就是杂质太多是吧！？现在我最先着手处理的是什么？谢谢！
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可以提高退火温度减少二聚体加大反应体系可以增加PCR的产物总量另外你自己不必先纯化好只要将PCR扩增产物直接给公司就行了
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要先走电泳，切割片段，回收作第二轮PCR；一般Target浓度高时，可以有效的降低引物二聚体的浓度的。
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关于丁香园转帖一篇:如何提高PCR产物克隆的效率 - 实验交流 - 生物秀
标题: 转帖一篇:如何提高PCR产物克隆的效率
摘要: 转帖一篇:如何提高PCR产物克隆的效率把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：1 直接克隆到T载体（或者U载体上）2 引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上3 将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。
方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，New England Biolabs公司的Vent酶，以及QIAGEN公司新出的同时具有热启动功能的高保真ProofStart酶， 关键词:[引物 碱基 酶切 聚合酶 试剂盒]……
把PCR产物克隆到载体上常见有3种做法：
1.直接克隆到T载体（或者U载体上）
2.引物设计时引入酶切位点，PCR产物酶切后直接克隆到目标载体上
3.将平末端PCR产物直接克隆到平末端酶切载体上。
方法3主要是针对高保真的聚合酶比如Stratagene公司的Pfu酶，New England Biolabs公司的Vent酶，以及QIAGEN公司新出的同时具有热启动功能的高保真ProofStart酶，进行PCR扩增，由于这类酶有很强的校读功能，能够以模版为准切掉错配的碱基，因而得到的PCR产物多数是平末端，不能用T载体克隆。通常需用目的载体多克隆位点上的平末端单酶切位点，单酶切得到平末端的线性片断，直接连接PCR产物。这类酶得到的产物通常不能用TA克隆试剂盒。目前也有商业化的平末端PCR产物克隆试剂盒，不过较少用。平末端的连接效率低，通常需要高浓度的连接酶，较长的连接时间，合适的片断：载体比例，有的时候还需要调整反应体系的ATP浓度或者增加聚乙二醇（PEG2000），以得到较高的连接效率。许多厂家都有推出快速连接试剂盒，比如New England Biolabs新出的5分钟快速连接试剂盒，能够简化平端连接步骤和条件，缩短连接时间，提高连接效率。
不过需要注意的是一些厂家（例如Clontech、Gibco/BRL、Roche）也生产一些用于PCR的高保真混合酶，是采用常规Taq酶和一些有校读功能的（proofreading）的聚合酶按比例混合（这样得到的混合酶的保真性比普通Taq酶高一点，但通常不如Pfu、ProofStart等酶），因而得到的PCR产物也是平端和A末端的混合产物，是否能用TA克隆试剂盒需要参考厂家的说明。
方法2是比较常用的经济的方法，不需要购买T载体，可以直接通过酶切PCR产物，得到粘末端，直接连接到目的载体上。在顺的时候，这种方法是非常简单的。可有时候也会出问题，双酶切就是连不上，比较常见的原因是PCR产物双酶切不完全，比如没有纯化产物就直接双酶切，有的酶比较“娇气”容易出现“切不动”或者是“星号活力”，得不到正常的粘末端而连不上。有时是因为选定的两种酶反应条件相差比较大，为了省事同时双酶切（通用Buffer不是一定通用的，不能过分迷信，有时会成为莫名其妙出错的根源），也会出现类似的错误。还有一种情况是由于有些酶在酶切时需要一定的“占位空间”，也就是要求酶切识别序列的前后有一定数量的碱基才能正常酶切，而设计引物时酶切位点直接就在5"末端，没有留下足够的保护碱基而导致PCR产物酶切不动，无法正常的克隆。由于这些错误很难检查，有的时候会浪费大量的时间，还是莫名其妙没有结果。
由于常见的Taq酶或者没有校读功能的DNA聚合酶（即不是高保真）在PCR扩增的时候通常会在PCR产物末端多添加一个A（即增加一个模版上不存在的A）。这个突出的A成为PCR产物TA克隆技术的基础。带有互补的突出T末端的线性载体能够有效提高PCR产物的克隆效率，解决方法2遇到的难题，所以方法1也是目前比较常见的方法。
TA克隆在顺的时候也很简单，简直就是“a piece of cake”，不用考虑酶切位点，引物设计等等问题，好的载体克隆效率高、重组率高而且两端有丰富的单酶切位点便于后继的克隆，但是烦的时候也会出现无缘无故克隆不上或者重组率很低的问题。比较容易忽略的问题是用高保真的酶进行PCR扩增，应该选用平端克隆载体而错用了TA载体。常见但很难解决的问题则是由于T末端容易和其他碱基错配而导致自身环化或者克隆了引物/自身褪火引物二聚体或者PCR不完整产物，因而出现假阳性。因而QIAGEN公司推出了UA克隆试剂盒，用突出的U末端代替T末端，由于U碱基能够有效减低和其他碱基（T、C、G）非特异退火的几率，因而能有效提高PCR产物的克隆效率。
但是，是否还有其他因素会影响PCR产物的克隆效率呢？最近，QIAGEN公司的研发专家发现，PCR引物5"端的碱基（也就是引物第一个碱基）的不同，会影响PCR产物的克隆效率！以后设计引物可要注意了！看看QIAGEN的专家怎么说——
Ralf Peist, Dorothee Hosel, Thea Tutjes, and Dirk Loffert
基于UA的克隆技术广泛应用于PCR产物的快速、简便和高效的克隆。由Taq DNA聚合酶为PCR产物添加的多出来的一个A碱基能够和pDrive Cloning Vector（QIAGEN PCR CLoning Kit提供）载体上的互补的U碱基配对结合。PCR产物能够高效地结合到载体上，无需在引物中引入限制性内切酶位点，无需酶切或者平端连接。
在某些特殊情况下，由于一些未知的原因，一些表面很正常的PCR产物的克隆效率却很低。在这里，我们证实：PCR引物的5"末端碱基能够显著影响TaqDNA聚合酶添加A末端的效率——有的时候导致只有一小部分PCR产物带有A末端，从而使PCR产物克隆效率明显降低。在这里我们提供一些简单的建议如何提高这些“难克隆”的PCR产物的克隆效率。
材料和方法
GeneScan&分析以确定PCR产物的长短
用QIAGEN公司的QIAprep Spin Miniprep提取质粒pTZ19R。采用没有校正功能的DNA聚合酶和特异性引物分别扩增质粒上的112bp、213bp和363bp片断。每个片断的扩增都分别进行4组反应，采用同一个荧光标记的正向引物（forward primer）和4个不同的反向引物之一进行扩增，4个reverse primer的区别仅在于引物的5"端碱基分别为（A、T、G、C），其他序列都相同。PCR产物用ABI PRISM 377测序仪分析，并用ABI GeneScan分析软件进行分析。
分析克隆效率
用DNeasy Tissue Kit和QIAamp DNA Blood Mini Kit分别纯化小鼠和人类基因组DNA。用QIAGEN Taq DNA聚合酶或者HotStarTaq DNA聚合酶分别扩增小鼠p53基因上一段500bp的片断、人类prion蛋白基因上一段750bp的片断，以及人类白介素9基因上一段1000bp的片断。每个片断的扩增都分别进行4个反应，分别采用4对引物（区别仅在于5"末端碱基分别为A、T、G、C，其他序列相同，如表1）进行扩增。PCR产物克隆到QIAGEN PCR克隆试剂盒中的pDrive
Cloning Vector中。计算克隆数，以其中一组5"端带A碱基的克隆数为基准（normalized to）进行比较,结果如图。
Table1:Conbinations of primers used to genetate a 1000 bp fragment of the human interleukin 9 gene
PCR fragment Forward primer Reverse
A 5"-ACTC...TGC-3" 5"-ACGC...TGT-3"
C 5"-CCTC...TGC-3" 5"-CCGC...TGT-3"
G 5"-GCTC...TGC-3" 5"-GCGC...TGT-3"
T 5"-TCTC...TGC-3" 5"-TCGC...TGT-3"
结果和讨论
引物的5"末端碱基对添加A末端反应的影响
没有校读功能的DNA聚合酶如Taq酶，会在PCR产物的3"末端添加多一个A（即：比模版多加一个A）为了比较引物的5"末端碱基对添加A末端反应的影响，我们比较了3个不同片断的各4组PCR产物的长短。结果表明：引物5"末端是A碱基的，PCR产物末端添加A的效率最高。引物5"末端是G的，PCR产物末端添加A的效率也很高，但是反应时间的延长，会导致添加2个A，从而影响后继的PCR产物克隆。
The effect of the primer"s 5"terminus on A-addition was investigated using 3 different PCR products. Efficiency of A-addition was deternined by analyzing the PCR product length on an ABI PRISM 377 Sequencer. Absolute percentages of A addition for each fragment are shown.
引物5"末端碱基对PCR产物克隆效率的影响，以及连接时间对克隆的影响
既然引物的5"末端碱基的不同会影响PCR产物末端添加A的反应效率，我们也研究了这种现象对PCR产物克隆的影响。结果表明PCR产物克隆效率与添加单个A碱基的效率正相关，引物5"末端是A的PCR产物得到的重组阳性克隆（insert-bearing colonies）最高。不同长短的片断克隆结果都证实了这一点。因此，引物设计时应该尽可能在5"末端添加A碱基。
The effect on the cloning efficiency for primers with different 5" ends was investigated using 3 different PCR products. Each of the 4 reverse primers was identical except for a different base(A,C,G,T, as indicated) at the 5" terminus. The PCR products were cloned into the pDrive Cloning Vector using the QIAGEN PCR Cloning Kit. Numbers of colonies were normalized to the number obtained when both primers contained a 5"-terminal A.
如果引物设计时5"末端无法加A，延长连接时间能够弥补克隆效率的不足。30分钟的连接时间能够保证引物末端带A的PCR产物有足够高的克隆效率。如果延长连接时间到2小时，能够显著提高引物末端带C的PCR产物克隆效率。
The effect of ligation time on cloning efficiency was determined for two 1000bp PCR fragments,generated using primers containing either 5"-terminal Cs or 5"-terminal As. The PCR products were cloned using the QIAGEN PCR Cloning
Kit with the indicated ligation times. Numbers of colonies were normalized to the number obtained using primers containing a 5"- terminal A and a 120-minute ligation time.
1.QIAGEN PCR Cloning Kit能够简单快速将PCR产物克隆到PCR载体中，采用QIAGEN试剂盒中特制的感受态细胞，只需要40分钟可以完成从克隆到涂板的全过程。
2.偶然，PCR产物克隆效率会意外的低，此时可以通过设计一对5"端带A的引物（引物的第一个碱基是A），这样可以提高Taq酶在PCR产物末端添加A的效率，从而提高PCR产物在UA（TA）载体的克隆效率。
3.如果不能在引物5"端加A，可以通过延长连接时间来提高克隆效率。
高保真酶扩增的PCR产物也可用来做TA克隆。方法就是用高保真酶扩增后，用Taq酶加A.回复:
你说的没错,我通常用taq和高保真pfu 1:1 混合使用.
但我发这篇文献主要原因是看中她对引物设计所做的提示.回复:
这篇文献是PROMEGA做的
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分子新手，PCR产物回收浓度太低，请教各位虫友！
本人刚开始接触分子方面的试验，准备做RNA干扰，目前正用带T7的引物跑PCR，产物带挺亮，然后用天根的试剂盒切胶回收的浓度太低，一般都在30ng/μl左右。我后续要用这个回收产物做模板走promega T7BiboMAX Express RNAi System 这个试剂盒的程序，要求模板量在1 μg，但我的回收产物远不够这个量，请教各位虫友怎么提高回收产物的量，或者有做过这个的我想请教下整个过程，非常感谢！
谢谢，我再试试，今天刚跑的PCR产物有500-600的浓度，按你的说法做做试试看能回收到多少
谢谢！我准备试一下你的方法。不知道能否留下你的联系方式，还有很多问题想要求教！谢谢！
高手，赞一个，:P
你好,我想问一下,你用天根的那个试剂盒来回收RNA?能给个货号或名字我吗?
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