求助荧光定量pcr试剂盒统计方法

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-12-06 17:01 标签： 荧光定量pcr结果分析
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【求助】实时荧光定量PCR数据统计
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最后用什么做变量进行统计分析呢？
是用2的-ΔΔCt次方做变量吗？
统计方法的选择呢？使用非参数秩和检验吗？
好多战友都只算到2的-ΔΔCt就没再说下去了。。。。谁能解惑啊？？
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参照是认为设定的，选择参照不会影响最终的分析结果，把所有正常样本作为参照，就是把所有正常样本的ΔCt作生物学平均，然后疾病样本的平均ΔCt与之比较得出表达量的情况。
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你好！我最近做QPCR，分析目标基因在实验组和对照组之间表达是否有差异，选了16个样本，8个阳性，8个阴性，加内参基因正好一块板。我想问的是，最后统计的时候我先把阳性的各样本deltaCT平均，阴性的deltaCT平均，两个平均值相比较，这样算比值可以吗？还是其他的统计方法？
机器上的软件是用2-deltadeltaCT，取的默认的一组作为参照，直接算出RQ值，但我觉得用这个RQ值来分析的方法是不对的。
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第一步：计算ΔCt
1号：ΔCt1正常=18.25-15.75=2.5
2号：ΔCt2正常=18.25-16.75=1.5
3号：ΔCt3正常=18-16=2
1号：ΔCt1病=17.25-16.5=0.75
2号：ΔCt2病=18-18.5=-0.5
3号：ΔCt3病=17-18.5=-1.5
第二步：计算ΔΔCt，以1号正常样为参照
ΔΔCt2正常=2-（ΔCt2正常-ΔCt1正常）=2
ΔΔCt3正常=2-（ΔCt3正常-ΔCt1正常）=1.4
ΔΔCt1病=2-（ΔCt1病-ΔCt1正常）=3.4
ΔΔCt2病=2-（ΔCt2病-ΔCt1正常）=8
ΔΔCt3病=2-（ΔCt3病-ΔCt1正常）=16
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请问选择哪个正常组作对照有区别吗？比如你选1号正常和2号正常？谢谢
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第一步：计算ΔCt
1号：ΔCt1正常=18.25-15.75=2.5
2号：ΔCt2正常=18.25-16.75=1.5
3号：ΔCt3正常=18-16=2
1号：ΔCt1病=17.25-16.5=0.75
2号：ΔCt2病=18-18.5=-0.5
3号：ΔCt3病=17-18.5=-1.5
第二步：计算ΔΔCt，以1号正常样为参照
ΔΔCt2正常=2-（ΔCt2正常-ΔCt1正常）=2
ΔΔCt3正常=2-（ΔCt3正常-ΔCt1正常）=1.4
ΔΔCt1病=2-（ΔCt1病-ΔCt1正常）=3.4
ΔΔCt2病=2-（ΔCt2病-ΔCt1正常）=8
ΔΔCt3病=2-（ΔCt3病-ΔCt1正常）=16
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如过将每一组值（做的多的话）的ΔCt减去最大或最小的是不是就能全部每一粉都可以比较了？TTEST，但是选则双尾还是单尾？是成对检验1还是其他2或3（excel中）
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如果是几块板不同批次跑qPCR，那每一块板是否要都设置一个相同的样本，否则没有对照？如果每块板没加同一个对照样本怎么统一RQ值啊 谢谢？实验5个分组,实时荧光定量pcr求得的2-△△ct,统计分析的时候方差不齐怎么办如题，做的单因素方差分析，方差不齐，对照组的数值都为1，是不是不能用方差分析？我做了非参数检验，可是非参数检验不能得出两两比较的结果，求各位大神帮忙，不胜感激！
浮生如梦608
非参数检验可以做两两比较，只是你不会而已我替别人做这类的数据分析很多的
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【求助】SYBY GREEN I 荧光定量PCR数据的统计分析
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这个帖子发布于2年零97天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
问题已解决悬赏丁当:2
最近做荧光定量PCR，用2-ΔCT的方法计算得到mRNA的水平后，用SPSS分析发现，各个基因的mRNA水平的值不成正态分布，请问一下，怎样进行统计分析？用那些统计学方法？T检验和方差分析可以用么？还是用非参数检验?谢谢！
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应该用对照和病例组的ΔCT进行t检验而不是2-ΔCT，不成正态分布的数据可经对数变换，而2-ΔCT经对数变换就得到ΔCT
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丁香园助理版主
After the normalizing with GAPDH, relative change ingene expression of β-catenin was determined by the comparative Ct method (2-ΔΔCmethod). 一般基础文章中，写定量ＰＣＲ方法学部分是这样写的，没有关注过这个问题，我感觉做基础实验每个组大概在１０个对象左右，所以并没有涉及这个正态的问题。个人经验，仅供参考
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还是给你篇文章看吧，很多文章都是利用了错误的统计方法，很多研究人员也搞不清应该如何统计分析荧光定量PCR数据，不要被误导了。这里面讲了几种方法，其中最简单的方法就是我上面讲的
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seuzsl edited on
这里有一篇非常经典的ABI公司关于QPCR 数据分析的文章Analysis of Relative Gene Expression Data Using Real-Time Quantitative PCR 这个链接是关于以上文章的翻译和总结：PS:太晚了，不知道这算广告吗？不行我就拷贝成文档上传.....
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reyuppy edited on
您好，请问您知道用什么做SPSS了吗？是用??△Ct、2^﹣△Ct还是2^-ΔΔCt？谢谢您
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danieltian泰医
您好，请问您知道用什么做SPSS了吗？是用??△Ct、2^﹣△Ct还是2^-ΔΔCt？谢谢您
同问这个问题
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想问一下，我用的是染料法，PCR的时候在all channels，忘了选fluorophores，最后结果在FAM下能看到ct值，这结果能用吗？各位大神，拜托告诉一下，急
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高品质2×逆转录MIX，操作方便简单，RT反应只需加入模板和水，免费试用申请进行中，有意请PM我······
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荧光定量PCR得出的结果，2-delta delta Ct值在多大范围内有意义？大于2有上调意义，小于0.5有下调意义。是不是对的？有没有相关文献呢。非常感谢大神赐教！！
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