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【求助】Fibronectin包被后为什么要用BSA(牛血清白蛋白)封闭呢
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这个帖子发布于7年零30天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
请教，在用Fibronectin(简称FN)包被培养板等基材培养细胞的时候，一些文献上说FN包被之后要用BSA(牛血清白蛋白)进行封闭，然后再种植细胞。(1)请问大家在FN包被时候都用BSA封闭了么？(2)为什么要用BSA封闭，封闭后会不会对FN表面的细胞结合域产生影响进而影响细胞的粘附呢？欢迎大家参与讨论。:)例子：“实验组以不同终浓度的FN(0, 10, 20, 40mg/L)包被96孔培养板和24孔培养板, 4℃过夜。PBS轻洗3次,加入20g/L BSA溶液, 37℃封闭2h。对照组不加FN,只以20g/L BSA溶液封闭2h。DMEM漂洗3次,超净台内备用。设实验组、对照组和空白组,空白组只加培养液,不加细胞,用于比色调零。每个浓度设4个复孔,实验重复3次。”[1][1]刘驰 and 付荣嵘 (2009). "纤维连接蛋白对人晶状体上皮细胞系的增殖、黏附和移行的影响." *** v.9(08):
The coating procedure involved dissolving the matrix protein in phosphate buffered saline (PBS) at a concentration of 50 ug/mL and using it in 12-well culture plates (200 uL per well). Plates were left at 4°C overnight, washed with PBS, and incubated with a blocking agent (1% BSA) for 2 hours at 37°C before the onset of culture.[2][2]Jiang, F., Y. Z. Jia, et al. (2002). "Fibronectin- and protein kinase C-mediated activation of ERK/MAPK are essential for proplateletlike formation." Blood 99(10):
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chinajinlei 编辑于
应该是要除去非特异性的结合位点。
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haijing12585 应该是要除去非特异性的结合位点。难道BSA不会影响特异性的结合位点么，欢迎大家参与讨论
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楼主，请问你从哪里买的FN呀？我也想做这个实验
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leala 楼主，请问你从哪里买的FN呀？我也想做这个实验不好意思，刚看到。我用的是341635
Fibronectin, Human Plasma，是已经毕业的师兄买的，具体的公司我也不清楚。
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封闭其实是继包被之后用高浓度的无关蛋白质溶液再包被的过程。抗原或抗体包被时所用的浓度较低，吸收后固相载体表面尚有未被占据的空隙，封闭就是让大量不相关的蛋白质充填这些空隙，从而排斥在ELISA其后的步骤中干扰物质的再吸附。封闭的手续与包被相类似。最常用的封闭剂是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白，也有用10%的小牛血清或1%明胶作为封闭剂的。脱脂奶粉也是一种良好的封闭剂，其最大的特点是价廉，可以高浓度使用（5%）。大量实践证明，封闭剂一般情况下不会对结合域产生影响，如果有影响，ELISA试剂盒还有什么用？
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关于丁香园武汉艾美捷科技有限公司
叶正青先生
公司编号：2532309
主营行业：生物试剂,进口试剂,
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如何退换货
&&&&牛血清白蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)是牛血清中的一种球蛋白，又称第五组分(需要注意的是，第五组分并不是BSA的一种组份，而是Edwin J. Cohn教授早期从血液中通过特定的分离技术得到5种组份，其中第五种就是白蛋白)，CAS号为，包含583个氨基酸残基，分子量为 66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot中作为封闭试剂。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。
无脂肪酸牛血清白蛋白产品及应用
牛血清白蛋白(无脂肪酸)，或者称为无脂肪酸牛血清白蛋白，或者称为Fat Acid Free BSA，产品不含有或含有极微量的脂肪酸，如Equitech Bio公司货号为BAH66的BSA。常规方法纯化的BSA难以有效去除其结合的脂肪酸。除了特别纯化的BSA产品外，市售的普通BSA试剂含脂肪酸量的范围一般是: 每mol BSA含0.2~1.5 mol脂肪酸。然而，一些生物医学研究要求使用不含游离脂肪酸的BSA，否则BSA所含高浓度的脂肪酸将影响细胞培养、分化、代谢反应、生化测定等。例如，在3T3-L1脂肪细胞分化过程中不能使用普通BSA试剂，否则影响分化和细胞代谢状态；在测定培养的组织细胞释放的游离脂肪酸浓度时，也必须用不含 脂肪酸的BSA，否则难以准确测定甘油三酯水解和游离脂肪酸释放。相关产品如下：
牛血清白蛋白fen末,无脂肪酸
Equitech-Bio的牛血清白蛋白fen末,无脂肪酸产品是使用专利的热处理方法纯化而来的超纯粉末。经过专门的去脂纯化处理，脂肪酸含量低于0.002% (w/w)，性价比高，方便溶解。该无脂肪酸BSA可用于脂肪代谢相关分析的载体蛋白，也可与某种特异性的脂肪酸结合以形成白蛋白，可应用于增强细胞培养 体系的性能；若实验中脂肪或脂肪酸的存在影响激素或者胆固醇的读数时，这个产品是首选；还可以作为某些脂肪以及脂肪酸分析的替代品。还提供5kg以及 10kg等更大规格包装，是目前市场上最高质量以及最高性价比的无脂肪酸BSA牛血清白蛋白产品。
BSA Powder, Fatty Acid Free, Heat Shock
Equitech-Bio
BAH66-0050
BSA Powder, Fatty Acid Free, Heat Shock
Equitech-Bio
BAH66-0100
BSA Powder, Fatty Acid Free, Heat Shock
Equitech-Bio
BAH66-0500
BSA Powder, Fatty Acid Free, Heat Shock
Equitech-Bio
BAH66-1000
如何选择合适的牛血清白蛋白(BSA)？
由于牛血清白蛋白(BSA)具有多种产品样式，可满足不同种的应用。目前网上的信息大多模棱两可，有牛血清白蛋白，也有牛血清白蛋白v组分等，很多 供货商对其区别也是不清楚的；另外，市场上还提供无蛋白酶、无DNase及无RNase、无脂肪酸、微生物级、试剂级、诊断分析级等不同等BSA粉末，因 此如何选择合适的BSA产品是很重要的前提。一般来说，普通的BSA粉末或者第五组分适合于细胞和组织培养，也可以用于一些蛋白补充物；而其它无蛋白酶、 无DNase及无RNase、无脂肪酸等处理的BSA则适合于更多的免疫学、蛋白学等应用，作为封闭剂、蛋白Marker、半抗原载体以及蛋白稳定剂等。 下面做一下简单的介绍：
产品特点与应用
经热处理的普通BSA产品，可作为组织细胞(微生物、动物及昆虫细胞等)培养养料和培养成分以及蛋白分子量标准组份，为性价比较高的BSA产品，如EquiTech-Bio的BAH62系列产品。
BSA第五组分
BSA第五组分较普通的BSA纯度更高。BSA第五组分使用Cohn方法纯化而来，是生物技术级的产品，一般可用于细胞培养，也可作为半抗原载体、保护剂以及蛋白补充物对照等。如EquiTech-Bio的BAC62或BAC63系列产品。
无IgG试剂级BSA
试剂纯级BSA比BSA第五组分具有更好的纯度，该粉末中不含有可能会干扰分析的球蛋白IgG成分。可作为组织细胞培养养料和培养成分以及蛋白分子量标准组份。如EquiTech-Bio的BAH64系列产品。
无蛋白酶BSA
无蛋白酶的牛血清白蛋白可用于细胞培养生产蛋白实验，尤其适用于表达对蛋白酶活性敏感的蛋白。另外无蛋白酶的牛血清白蛋白也非常适合。如EquiTech-Bio的BAH67系列BSA产品和BAC65系列第五组分产品。
无脂肪酸BSA
无脂肪酸BSA可用于脂肪代谢相关分析的载体蛋白，也可与某种特异性的脂肪酸结合以形成白蛋白，可应用于增强细胞培养体系的性能；若实验中脂肪或脂肪酸的存在影响激素或者胆固醇的读数时，这个产品是首选。如EquiTech-Bio的BAH66系列。
低内毒素BSA
低内毒素牛血清白蛋白是细胞和组织培养非常理想的选择。可作为无血清和合成培养基营养补充剂的载体，另外作为实验室的一般试剂用来稳定和稀释敏感 蛋白溶液，也可以作为诊断、分析工具，如ELISA。如EquiTech-Bio的BAH系列，内毒素含量低于1.0 EU/mg。
无蛋白酶/IgG BSA
不含有蛋白酶以及RNase酶活性，同时不含IgG，纯度等级更高，作为稀释液或封闭液应用于EIA和ELISA等试验中。如Jackson的001-000-16X系列以及EquiTech-Bio的BAH67(无蛋白酶/IgG，也不含RNase)系列产品。
诊断级牛血清白蛋白fen末是专门用于减少可能会产生背景干扰以及细胞培养体系抑制等因素，不含蛋白酶、生物负载以及IgG，具有很低活性的内毒素 (低于3.0 EU/mg)。可用于蛋白标准品、稀释剂、偶联物或者酶稳定剂，也可以作为免疫试剂应用于高灵敏度的免疫分析实验、细胞培养以及杂交实验等。如EquiTech- Bio的BAH68系列产品。
作为全球血清生产工艺和分离技术的先驱，Equitech-Bio持续在品质、保证以及经济性方面保持着领先地位，也因此成为全球主要研究机构和制 药以及 针对公司的金标准。通过对每一步产品流程的苛刻检测以及严格的质量控制程序，Equitech-Bio最终为客户提供最优的批次间稳定性。 Equitech-Bio在中国的区域总代理，艾美捷科技有限公司将为您提供专业的技术咨询、售后以及产品发送服务。我们通过提供订制化的配制以及包装包 括，从而为您精心订制最适合您的完整解决方案。请致电400-艾美捷科技有限公司问询更多产品和技术方案。
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[求助] BSA和BSA组分五是不是同一种东西
各位大虾，小弟近来在做蛋白芯片方面的工作，要用BSA封闭片子，但是实验室只有BSA组分五，师兄说BSA组分五就是BSA，我觉得不太对劲，望赐教，先谢过了！
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无蛋白酶BSA牛血清白蛋白
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无蛋白酶BSA 牛血清白蛋白产品
牛血清白蛋白(Bovine SerumAlbumin, BSA)是牛血清中的一种球蛋白，又称第五组分(需要注意的是，第五组分并不是BSA的一种组份，
而是Edwin J. Cohn教授早期从血液中通过特定的分离技术得到5种组份，其中第五种就是白蛋白)，CAS号为，包含583个氨
基酸残基，分子量为66.430 kDa，等电点为4.7。牛血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如在western blot 中作为封闭试剂。
血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中，添加白蛋白可起到生理和机械
保护作用和载体作用。
无蛋白酶BBSSAA牛血清白蛋白产品及应用
牛血清白蛋白(无蛋白酶)，或者称为无Protease牛血清白蛋白，或者称为ProteaseFreeBSA，产品不含有DNAse酶、蛋白酶以及IgG，
如EquitechBio公司货号为BAH67的BSA；另外，EquitechBio公司的BAC65系列BSA第五组分，则是相比较纯度更高的BSA，而BAH67
系列的则不仅去除了蛋白酶，也不含有DNase以及IgG 等分子。 Jackson的001-000-161/162/173系列提供的无IgG、无蛋白酶牛血清
白蛋白BSA以干粉状形式提供，经检测不含牛IgG 和蛋白酶。相关产 品如下：
牛血清白蛋白ffeenn末,,无蛋白酶
Equitech-Bio的牛血清白蛋ffeenn末,无蛋白酶产品是使用专利的热处理方法纯化而来的超纯粉末。产品为白色冻干粉末，pH 值6.8–7.2，重
金属含量低于10ppm，白蛋白含量超过98%。不含有可检测到的残留蛋白酶活性，其它酶活性也非常低。可作为RIA以及ELISA等免疫
学实验中的稀释液或封闭液使用。这种无蛋白酶的牛血清白蛋白ffeenn末可用于细胞培养生产蛋白实验中表达对蛋白酶活性敏感的蛋白。还
提供5kg以及10kg等更大规格包装。
BSAPowder,Protease Free,HeatShock
Equitech-Bio
BAH65-0050
BSAPowder,Protease Free,HeatShock
Equitech-Bio
BSAPowder,Protease Free,HeatShock
Equitech-Bio
BSAPowder,Protease Free,HeatShock
Equitech-Bio
牛血清白蛋白ffeenn末,,无蛋白酶//IIggGG
血清白蛋白在生化实验中有广泛的应用，例如作为免疫试剂在免疫印迹Western Blot中作为封闭试剂。然而绝大多数商品化的BSA，甚
至高纯度BSA内都含有IgG，而这些IgG 分子就不可避免的会形成交叉反应。BSA内含有的IgG 是牛来源的IgG 分子，而由于牛与山羊、
绵羊的同源性，因此在二抗是抗牛IgG、抗山羊IgG(牛来源的抗山羊IgG 例外)、抗绵羊IgG 等时就更加明显。在很多实验里，即使BSA
中的IgG含量很低，也因为大量使用BSA封闭而导致形成很高的背景。Jackson的无IgG、无蛋白酶的牛血清白蛋白BSA以干粉状形式
提供，经检测不含牛IgG 和蛋
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