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细胞毒实验是一种在体内、外研究具有杀伤靶细胞功能的免疫效应细胞与分子的实验技术。随着免疫学技术的发展，近年来对具有杀伤功能的免疫效应细胞与分子的报道有很多。在免疫效应细胞与分子中，既有非特异性杀伤细胞和特异性杀伤细胞，同时又有非特异性细胞毒因子和特异性细胞毒因子，他们的免疫反应最终会导致靶细胞裂解死亡。细胞毒作用检测研究应用大致可以分为以下几类：
(1) 非特异性杀伤肿瘤细胞：如自然杀伤细胞（NK细胞）、K细胞，在肿瘤细胞的杀伤中扮演重要的角色。
(2) 特异性杀伤肿瘤细胞：如：TC或者TK杀伤细胞，该细胞的特异杀伤需要抗原预先致敏TC或TK细胞。
(3) 中药对杀伤细胞的调节作用：中药的现代研究证明许多补气类药物可以促进细胞产生干扰素（IFN-&，&，&）、IL-2等细胞因子，增强NK，TC细胞的杀伤效应。
(4) 单克隆抗体的生物导弹作用：将杀伤肿瘤的毒性药物与肿瘤细胞抗原单克隆抗体结合，就会特异性杀伤肿瘤细胞。
(5) 药物的毒性作用：为了筛选细胞毒物质和抑制物质（如化疗药物），通过体外实验寻找最佳化疗药物和最佳用药浓度，从而为临床提供参考。
检测这些免疫效应细胞和分子细胞毒活性的方法有很多，大都是体外细胞毒实验，且都有一定的局限性和缺点，如51Cr释放实验是标准的细胞毒活性测定法，虽然得到广泛应用，但51Cr半衰期短且国内没有生产。MTT法难以客观反映细胞毒活性。近年来，随着流式细胞术的不断发展和普及，建立了以荧光素标记靶细胞并结合细胞毒相关酶染料检测细胞毒活性的流式细胞术体内和体外分析方法。
相关产品：CyToxiLux& , GranToxiLux&, 和PanToxiLux&基于单细胞水平荧光探针细胞毒测定试剂盒。
1．检测原则：
通过流式细胞仪或荧光显微镜测定导致细胞死亡细胞毒性淋巴细胞致死性打击的传导和相关蛋白酶活性，反映和探讨细胞杀伤作用及机制。
CyToxiLux& : 测定caspase下游信号
GranToxiLux&: 颗粒蛋白酶B
PanToxiLux&: 颗粒蛋白酶B 和caspase 上游信号
CyToxiLux& , GranToxiLux&, 和PanToxiLux&三种方法测定细胞毒作用不管从检测时间还是敏感度都优于LDH（乳酸脱氢酶）、51Cr和PI等方法。
检测原理：端粒酶B存在于CTL和NK等效应细胞的溶酶体颗粒内，通常没有活性。当靶细胞诱导效应细胞脱颗粒时，颗粒酶B和其他颗粒物质如穿孔素等就随后释放出来作用于靶细胞。因此检测靶细胞内颗粒酶B的活性可以对细胞介导的杀伤作用进行定量评价。
2. 技术优点：
1) 细胞毒测定基于导致细胞死亡的基本生物化学反应，而不是仅仅针对细胞膜缺失及其他结局。
2) 与其他检测方法相比灵敏度高。
3) 节约检测时间,效应细胞和靶细胞共孵育的时间约为0.3～2h。
4) 可以采用流式细胞仪和免疫组化的方法对靶细胞进行测定。
5) 结合流式细胞仪的多参数检测分析，不仅可以对CTL细胞毒作用进行分析还可以对效应细胞的生理和生化进行分析，增加了结果分析的广度。
注：不宜使用荧光标记的探针标记细胞，因为探针会影响效应细胞和靶细胞共孵育时的相互作用。
3. 检测步骤：
实验前准备：
配置TLF4：加25&l TFL稀释液至Vial TFL4 中，混匀溶解，-20℃冻存。
Medium T配置：标记靶细胞用，1&PBS+ 配置好的TFL4（若培养基中含有10%FBS，则浓度为1000：1；若无，则3000：1；可根据预实验结果调整浓度）。
洗液：按标明用量离心洗涤细胞，小心去上清，轻弹重悬细胞，注意勿斡旋混匀。
1) 靶细胞准备：
将靶细胞用Medium T重悬成2*106cells/ml（建议小于该浓度使用，确保流式分析可以收集到个靶细胞即可），37℃孵育15min（孵育时间长短可依照预实验结果进行调整）；用10倍体积的PBS洗涤2次，300g 离心弃上清，用wash buffer 重悬标记后的靶细胞，1*105cells/孔（依照实验设计调整细胞数目）分配细胞。
2) 效应细胞的准备：
将效应细胞PBS洗涤一次计数，用wash buffer 调整效应细胞最佳浓度（依照实验设计调整），若E:T Ratio为20：1，则每孔加入2*106cells
3) 孵育靶细胞和效应细胞：
加100ul 效应细胞悬液至靶细胞管，留两个靶细胞空白管，再加两个不含靶细胞只含有效应细胞的管，对照组补足wash buffer 终体积为200ul/tube；300g离心5min，小心弃上清，加入Vial GS底物（对照组加PBS），加入ADCC抗体，迅速离心30s，孵育0.5～2h（建议预实验调整孵育时间，一般单时间点孵育1h，不宜孵育过长）。
样品设置：
A：靶细胞（TFL-4标记后）
B: 靶细胞+GS底物
C：效应细胞
D：效应细胞+ GS底物
E：效应细胞+靶细胞+ GS底物
4) 用200&l wash buffer洗涤每个样品，100&l重悬时用移液枪混匀；
5) 流式细胞仪检测分析（TFL-4-APC；CG-FITC）,步骤如下：
A. 上A和D样品设定流式细胞仪APC，FITC通道电压：上A样品将APC阳性细胞群调至103 ，上D样将FITC阳性细胞群调至101 ；则B样品细胞APC处于 103，FITC荧光处于101 （注：正常健康细胞TFL-4标记靶细胞应该是单个细胞群，如果不是单个细胞群则降低TFL-4的标记时间或者降低TFL-4浓度）。
B. 上其余样品管，收集5000～10000个细胞分析结果。
4. 产品组成：
GranToxiLux&PLUS（80tests）
CyToxiLux&PLUS（80tests）
PanToxiLux&（80tests）
4瓶颗粒酶B底物（Vial GS）
4瓶颗粒酶B底物（Vial GS）
4瓶PanToxiLux&底物（Vial PS）
1瓶TFL4（靶细胞标记物）
1瓶TFL4（靶细胞标记物）
1瓶TFL4（靶细胞标记物）
TFL稀释液（配置TFL4用）
TFL稀释液（配置TFL4用）
TFL稀释液（配置TFL4用）
CyToxiLux?&PLUS!
OncoImmunin
￥7,500.00
GranToxiLux?&PLUS!
OncoImmunin
￥7,500.00
PanToxiLux?
OncoImmunin
￥7,500.00
Nuclear Fluorescent Label
100 assays
OncoImmunin
￥2,000.00乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明_百度文库
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乳酸脱氢酶(LDH)法操作说明
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&&乳​酸​脱​氢​酶​(​L​D​H​)​在​胞​质​内​含​量​非​常​丰​富​,​细​胞​处​于​正​常​状​态​下​其​不​能​通​过​细​胞​膜​,​但​当​细​胞​受​到​损​伤​或​死​亡​时​便​可​释​放​到​细​胞​外​,​此​时​细​胞​培​养​液​中​ ​L​D​H​ ​的​活​性​与​细​胞​的​死​亡​数​目​呈​正​比​,​通​过​用​比​色​法​测​定​并​与​靶​细​胞​对​照​孔​的​ ​L​D​H​ ​活​性​进​行​比​较​,​可​计​算​出​效​应​细​胞​对​靶​细​胞​的​杀​伤​百​分​数​。​该​实​验​方​法​操​作​简​便​、​快​速​,​可​应​用​于​ ​C​T​L​ ​和​ ​N​K​ ​细​胞​活​性​测​定​及​药​物​、​化​学​物​质​或​放​射​所​引​起​的​细​胞​毒​性​,​目​前​已​有​ ​L​D​H​ ​法​测​定​ ​C​T​L​ ​活​性​的​试​剂​盒​。
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【求助】探讨一下，请问MTT可否测定凋亡？
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众所周知，MTT是通过能够同活细胞内部的线粒体结合来测定细胞存活率的，而往往凋亡细胞中的细胞器还存在功能，是否这个时候会使MTT的测定结果产生偏差，无法合理的现实的药物的抑制率。
这是我突然想到的，再加上以前曾经碰见过细胞已经完全死亡但染色很深的情况，所以想问问大家，不知大家有没有碰见过。查看完整版本请点击这里：
园丁## ( 19:27:20)
LDH法是什么方法？
zsxan1990 ( 19:27:39)
相关疾病：
心肌梗死肝炎
MTT实验是对线粒体内膜上琥珀酸脱氢酶活性的检测：
琥珀酸脱氢酶是琥珀酸氧化呼吸链（氧化呼吸链之一）里重要的复合酶之一，它可以催化琥珀酸脱氢生成延胡索酸，从而使FAD接受两个氢原子生成FADH2，然后再将氢传递给CoQ，生成CoQH2，继续呼吸链的电子传递过程。当琥珀酸脱氢酶活性增高时（如细胞增殖等情况），就会催化MTT生成更多的紫红色不溶性的有色产物。－－－所以凋亡时琥珀酸脱氢酶活性并不一定会降低，所以MTT法不适合去检测细胞凋亡，而坏死或晚期凋亡常常伴有能量合成的障碍，所以琥珀酸脱氢酶活性可能会发生变化。
＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝＝
LDH实验也叫乳酸脱氢酶释放实验，
乳酸脱氢酶是细胞能量代谢（糖酵解）中的一个重要的酶，可以催化乳酸生成丙酮酸，同时产生ATP。如果细胞死亡，胞膜破裂，那么LDH也就从胞浆中释放出来，因此LDH是质膜完整性的标志，也是检测细胞死亡的指标，LDH升得越高就说明细胞损伤得越严重。
这是我们也就不难理解在急性心肌梗塞或肝炎时为什么要检测LDH了吧！
乳酸脱氢酶法（LDH）有专门得试剂盒，应该是检测细胞死亡的一个较好而且方便的指标。
ending ( 19:28:02)
不可以。MTT只能区分死活细胞，而无测凋亡的特征性。
redbutterfly ( 19:28:21)
如果这样来说的话,我利用MTT选选择的高抑制率的药物应该都是没有诱导细胞 凋亡的药物,可以这么说么?
ending ( 19:28:41)
不可以。凋亡最后的结果还是细胞死亡，存活细胞数减少或消失，所以MTT会有反映。MTT不能反映的是细胞死亡的原因是凋亡还是坏死。
不过刚看到国内有篇文献说MTT结合形态观察也能测凋亡，但是能否得到公认就不知道了。
dog002 ( 19:29:14)
请问midas乳酸脱氢酶法（LDH）专门试剂盒哪有卖的谢谢！！
star#room ( 19:30:31)
南京建成公司就买 LDH试剂盒，50人份的130元，100人份的250元，我们同学用过，测的效果还不错，你可以联系一下。他的电话号码是：025-。E-mail：
dog002 ( 19:30:57)
请问为什么文献检测活细胞时多用MTT很少用LDH？谢谢！！！
园丁## ( 19:31:37)
请问为什么文献检测活细胞时多用MTT很少用LDH？谢谢！！！
——————————————————
检测死细胞时多用LDH释放试验！
zranqi_1 ( 19:31:53)
LDH法，测细胞乳酸脱氢酶释放水平，常用来检测药物或其它刺激因子造成的细胞毒性，MTT(四唑盐比色法），检测细胞增殖程度。测细胞凋亡应该用流式细胞仪。
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[求助]LDH检测细胞活性
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[求助]LDH检测细胞活性
我想用LDH 试剂盒检测药物对神经元 的毒性作用和诱导凋亡结果，请问哪位做过这种实验，用哪里的试剂盒，上清液和细胞是不是都要分别做。重复性怎么样？
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没做过神经元的LDH测定.不过做其它细胞时用过南京建成生物工程研究所的盒子,仅供参考.
一般的试剂盒内的说明都比较详细,但主要是测生物样本(血浆\均浆等)的,如测细胞还需要自己摸一下条件.
如果细胞量足够大,可以用分光光度计,如果量不足就考虑一下酶标仪,虽然不如分光光度计准确,但是线性范围内也是有效的.
我们做时是只测上清液的,通过上清的LDH量确定细胞死亡量的多少,如需要测死亡率,则需对残留细胞进行破碎使细胞内LDH渗出.不论是冻融还是超声都可以.
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所以我想问说明书上写的样本是血浆，能不能用来测细胞？我查到的公司上面都没提到样本是细胞，既然你已经做过了，那我也试试。
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没做过神经元的LDH测定.不过做其它细胞时用过南京建成生物工程研究所的盒子,仅供参考.
一般的试剂盒内的说明都比较详细,但主要是测生物样本(血浆\均浆等)的,如测细胞还需要自己摸一下条件.
如果细胞量足够大,可以用分光光度计,如果量不足就考虑一下酶标仪,虽然不如分光光度计准确,但是线性范围内也是有效的.
我们做时是只测上清液的,通过上清的LDH量确定细胞死亡量的多少,如需要测 “死亡率”, 则需对残留细胞进行破碎使细胞内LDH渗出.不论是冻融还是超声都可以.
纠正： 不是“死亡率”，而是如需要测“存活率”则需对残留细胞进行破碎使细胞内LDH渗出.不论是冻融还是超声都可以.
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我最近也再做这方面的工作，用的试剂盒是南京建成的。
测LDH标准的方法是分别测定培养液和细胞内的LDH量，从而得到一个百分比来表示细胞的死亡率，但也有很多人只测了培养基里的LDH量，这是很不标准的方法。建议你把培养基和细胞内的LDH活力都测一下。
有一点需要注意，（个人经验，可以参考一下），神经元的密度要接种的高一点，这样才能一定程度上减少培养基对最后结果的干扰，因为我做时发现单纯的培养基对照组（即空白测定管）在440nm有一定的波长吸收，所以细胞量最好控制在10e5以上，才能减少培养基的干扰。
有事可以PM讨论下！
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我是24孔板培养的细胞，所以细胞数还算可以，但是培养基就500ml，会不会有影响？
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培养基就500ml，会不会有影响？
什么意思？没看懂
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培养基500ml多不多？
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应该是500ul吧
刚好我也是准备做这方面的实验，是测定缺氧损伤神经元的损伤指标。本想订建成的试剂盒，但此前在园内搜了一下，发现评价不高。就打算交给检验科测，但预测了一下，发现浓度很低，现正想怎么浓缩呢!我是测培养上清液内的LDH。
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哦！写错了，是500ul，用分光光度计吗？