【图文】3-紫外吸收法和Bradford法检测蛋白质浓度_百度文库
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3-紫外吸收法和Bradford法检测蛋白质浓度
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【求助】小鼠取血问题
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这个帖子发布于7年零119天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
大家好，制备单抗已经免疫过第二次了，很快就要取血测效价。为了练手，买了几只普通小白鼠，采取断尾取血，但是根本就取不到几微升，而且很快就凝了。又不敢采用眼球取血，生怕失血过多导致死亡，而且总共就两只眼，就只能测两次。大家都是怎样开展的呢？需要加抗凝剂么？除了这两种方法还有更好的方法么？谢谢
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另外饲养细胞必须用BABL/C小鼠吗？普通小鼠可以吗?
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还是眼球取血比较方便，不会死掉的。方法是左手抓紧小鼠颈部皮肤，使眼球凸出，右手用一次性采血管扎小鼠内眼角，一次可以取200微升左右不会影响视力，取完后赶紧松开左手，用干棉花止血。饲养细胞可以用昆明鼠的，便宜细胞量又多。
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同意楼上，也可以把小鼠尾巴用热水泡一下，让血管充血，然后拿刀片在尾巴尖附近上割个小口，用手一撸，呵呵。
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ethel533533 大家好，制备单抗已经免疫过第二次了，很快就要取血测效价。为了练手，买了几只普通小白鼠，采取断尾取血，但是根本就取不到几微升，而且很快就凝了。又不敢采用眼球取血，生怕失血过多导致死亡，而且总共就两只眼，就只能测两次。大家都是怎样开展的呢？需要加抗凝剂么？除了这两种方法还有更好的方法么？谢谢Have a try on saphenous vein.It works very well for my purpose.Anaesthesia is not required Accurate venepuncture Remove of enough blood up to 150 ul Repeated/serial sampling is possible (at least once every two weeks)
Low tissue damage ~ 5 min are needed to remove blood from one mouse Increased animal distress
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热水泡尾巴的方法我也试了，不知道是我的问题还是老鼠的问题，咋就那么一滴滴点血呢、谢谢大家
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剪尾取血的话呢，每次挤一滴血出来，用枪吸到EP管里，然后把老鼠放松，等看到尾巴用充血的时候，从前往后撸，再取一点，反复几次应该能取到20ul左右，不过你要检测效价的话能得到几微升的血清足够了啊。真的要很多血清的话还是眼眶静脉窦取血吧
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血太少的话，血清也很少，用枪吸血清的时候好吸么？
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凝固很快的是个别高血脂的老鼠。正常的采个20ul就足够了。用手把尾巴摸红再剪了挤血。
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曾经看到有位朋友用这种方法：把取出的血放在少量的PBS液中，之后直接离心，取上清，这样等于把血清进行了若干倍的稀释，到时候稀释血清的时候算上就OK了这种方法我觉得很棒，但是我有个question：全血是定量的，但是血清是未知的啊，怎么知道把血清稀释了多少倍呢？另外，楼上几位朋友说20ul就足够了，但是吸出的血清很少，用移液器好吸么？
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1、用酒精棉球擦拭，起到毛细血管扩张作用2、可以用热水预热3、剪掉的尾巴梢多一些，有助于出血4、顺着尾巴向下捋5、捋出来一些，就用EP管内壁蘸下来6、分离血清时间把握好祝顺利
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ethel533533 曾经看到有位朋友用这种方法：把取出的血放在少量的PBS液中，之后直接离心，取上清，这样等于把血清进行了若干倍的稀释，到时候稀释血清的时候算上就OK了这种方法我觉得很棒，但是我有个question：全血是定量的，但是血清是未知的啊，怎么知道把血清稀释了多少倍呢？另外，楼上几位朋友说20ul就足够了，但是吸出的血清很少，用移液器好吸么？对地，，，俺们就是用这种方法，根据以往经验，全血一般可以析出来1/10的血清，。。。俺们一般从小鼠的尾巴里采出10uL的全血再加入90uL的生理盐水或者PBS。进行离心，这样算出来的的话其实是把血清已经稀释了100倍。。。。。。。。。
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我也顺便请教高手们，如果取小鼠血做肝功指标，怎么才能取到多哦，取多少才能测啊，采用什么方法取血？谢谢高手们！
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回楼上的：测肝功的话，需要的血清会比较多。建议眼眶取血。1.5-2cm长的采血管，约呈45度角边转边插入眼眶。一定要攥紧小鼠并使其眼球充分暴露。取400ul全血，37度保温2h左右，析出血清，大概能拿到150ul血清。祝好。
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小鼠采血，我们推荐使用眼睑采血方式。即用手的大拇指和食指的第三关节抓住小鼠颈后部皮毛（多抓些，但别抓脖子），向后抻，使得小鼠眼睛突鼓，头部不能自由旋转（防止被咬）。再用小拇指（如若手小，可以和无名指和中指一起用）和小鱼际肌肉夹住小鼠尾部，或尾部和后肢（不让它自由晃动，防止其挣扎），将其头部倚靠并简易固定在比较重的物体上（如鼠笼的一角）。待其眼球突鼓后，用另一只手持毛细玻璃管（或采血管等）直接插入其眼睑部位采血。有可能血流非常快，也有可能很慢，但总的原则是，尽量采集到2/3-1管血，且无气泡。然后，把小鼠放回鼠笼，将毛细玻璃管倒至于0.5ml离心管中，使其全部流出（90%以上也可，再不行就用嘴吹，不过别沾到嘴上）。将离心管在室温条件静置1小时，然后3000r/min离心15min即可，最好的情况下，用0.1到10微升的移液器可以得到30-40微升血清。那可是原倍的。祝好运
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很简单，直接剪掉1cm的尾巴用Ep管取血，如果在广州可以联系我哦
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左手拇指和食指抓紧小鼠颈部皮肤，中指按住小鼠头部，使眼球凸出，右手拿200ul的Tip倾斜插入小鼠内眼角，轻轻转动，血很快就会上来，采取完后稍松一下，用干棉花止血，带血的Tip放到EP管里用枪打下去（最好又另一人完成，动作要快，防止凝血）。一只小鼠不要时间太长，也不要太用力捏，防止小鼠窒息死亡。一次一两百微升没问题，也不会影响视力，一周即可恢复。
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本人采用的是断尾采血，一次采血10微升就够了，如果是一个人，就把小鼠放入50ml离心管中，把盖剪一个口，尾巴拉出来，可以搓一搓让其充血，然后剪掉一小截，把尾巴撸两下就可以挤出一滴血，然后用10微升的枪吸起打入pcr管中，管越小越好，一定要打在管底，然后正常分离就可了，其实测效价一两微升就够了，这种方法一般可以获得4微升左右
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Agree!It's faster. You can bleed one mouse in 1 min.Here is the information of this method. you can use needle instead of lancet. conanthird wrote:Have a try on saphenous vein.It works very well for my purpose.Anaesthesia is not required Accurate venepuncture Remove of enough blood up to 150 ul Repeated/serial sampling is possible (at least once every two weeks)
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眼球采血快，不会死的，不要抓的太紧了·~方法楼上有人介绍了，我就不说了~~~为采慢一些，每次都要反复的律一下尾巴~~~泡热水的效果会好一些如果采到的血少的话，可以用生理盐水做缓冲液稀释10倍，10ul的血够检测好几次的了ethel533533 wrote:大家好，制备单抗已经免疫过第二次了，很快就要取血测效价。为了练手，买了几只普通小白鼠，采取断尾取血，但是根本就取不到几微升，而且很快就凝了。又不敢采用眼球取血，生怕失血过多导致死亡，而且总共就两只眼，就只能测两次。大家都是怎样开展的呢？需要加抗凝剂么？除了这两种方法还有更好的方法么？谢谢
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这个主要看你需要的血量，如果只要10微升的话，每次取血只要剪掉一小段尾巴，还是可以的眼睛取血的话，有两种办法，一种是楼主所说的只能用两次的摘掉眼球，这个的取血量很大，基本可以把小鼠的血取掉一大半；另外一种就是眼眶静脉丛取血，用一个较细的玻璃吸管（最好带有斜面）扎入眼眶静脉丛，这样血量也可以取得较多，而且，让小鼠休息几天之后可以反复取血。
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ethel533533 热水泡尾巴的方法我也试了，不知道是我的问题还是老鼠的问题，咋就那么一滴滴点血呢、谢谢大家你的问题
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可以试试采血前一天断粮，只喂水，断尾采血时多捋几下。我试了几次，还是可以的，多的时候能采十几微升，少也有5微升。
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可以腮部取血，具体的就不细说了，这样采血对小鼠的伤害也小，手法不熟练的话可能会扎成面瘫
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zzsong1984
很简单，直接剪掉1cm的尾巴用Ep管取血，如果在广州可以联系我哦 您好，用EP管采血的话怎么进行保存？
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50ml 离心管盖上弄个洞，小鼠放进去，尾巴从洞里伸出来，尾尖端剪去2-3mm，用手从尾根部捏住往尖端推，血一滴一滴蹭到 0.65ul
EP管内壁，10滴左右就够，离心后能得到5ul 以上血清，测效价从1：100开始，2-3ul就够了。
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你要那么多干嘛！只要三四滴就可以了！
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zzsong1984
很简单，直接剪掉1cm的尾巴用Ep管取血，如果在广州可以联系我哦
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关于丁香园血清 稀释注意事项
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产品描述：本品100%来自人的血源！没有稀释或掺杂其它任何动物血清！本品艾滋病、梅毒、乙肝、丙肝，四个标本检测均为阴性！本品无支原体、无噬菌体，低内毒素！基尼亚生物提供的正常动物血清生物制品，均未经灭活，可用于实验材料，以及作为动物免疫、血清的IgG制备、病理组化封闭、ELISA等免疫实验中的封闭和保护剂的使用。均不能用于医用，本品已加入0.02
上海信帆生物科技有限公司专业供应 科研用 人血清，有混合型和AB型 两种。常年备有库存，发货及时，如果有需要，欢迎广大老师前来订购。【品质承诺】100%来自人血源，没有稀释！！没有掺其它动物血清！！人血清（混合型血型），不含防腐剂；艾滋病、梅毒、乙肝、丙肝，四个标本检测均为阴性。 【注意事项】未融化或融化未经摇匀的正常人血清禁止直接放入
天 府 新 区 华 阳 正 龙 生 化 制 品 研 究 室
产品说明书 产品名称：
正常人血清IgG 产品编号：
G0111 产品批号：
见产品标签 纯
&96% 原始材料：
正常人血清。经检验，HIV-Ab、HBsAg
采制鸡血清价格作为优质的血清(无菌采制)价格厂家提供优级血清价格及最新报价、规格、使用说明书等技术方面的咨询。中文名称：采制鸡血清价格产品货号：GD-568-A规格：1个采制鸡血清价格产品使用注意事项（仅供参考）：1.血清解冻最好采用逐步解冻法（-20℃→2—8℃→25℃或37℃），解冻过程中必须随时轻摇，使血清受热温度均匀。2.血清凝絮物，血清解冻后
规格：100ml/瓶【产品规格】100ml/瓶【产品编码】168015【产品介绍】我司保证100%来自人的血源,没有稀释！！不掺有其它血清！！不含防腐剂；艾滋病、梅毒、乙肝、丙肝,四个标本检测均为阴性。本产品未灭活、未除菌。【适用范围】为实验材料,以及作为动物免疫、病理组化封闭、血清IgG 制备、细胞培养(需自行灭活、除菌)、ELISA 等免疫实验
￥200-3280
青岛捷世康生物科技有限公司 ，为您提供专业的售前售后技术指导，并提供免费待测样本服务。捷世康始终坚信：用心做好品质，企业方能远航 ，的理念竭诚为您服务。产品名称:橙血清培养基产品规格：250g产品编号：BS1028用途：用于食品及饮料中耐酸菌的检测注意事项：1
实验应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释过后的标准品应丢弃，不可
的血液、组织液和外分泌中。人体的免疫球蛋白主要有五类：IgM、IgA、IgG、IgD、IgE。抗体是具有4条多肽链的对称结构，其中2条较长、相对分子量较大的相同的重链(H链)；2条较短、相对分子量较小的相同的轻链(L链)。链间由二硫键和非共价键联结形成一个由4条多肽链构成的单体分子。轻链有κ和λ两种，重链有μ、δ、γ、ε和α五种。兔抗人血清【注意事项】：·
索取请直接联系在线销售人员血清总补体ELISA报告内容及标准：1、ELISA标准曲线；2、详细的实验步骤；3、完整的实验报告（试剂耗材，实验方法，实验结果及结果说明）；300、实验进行阶段，我公司客服人员会及时向您汇报实验进程。血清总补体ELISA操作注意事项：试剂应按标签说明书储存，使用前恢复到室温。稀释过后的标准品应丢弃，不可保存。实验中不用
。正常血清在检测一般或特异抗体纯化方法的时候也经常作为对照使用。产品描述：本品100%来自人的血源！没有稀释或掺杂其它任何动物血清！本品艾滋病、梅毒、乙肝、丙肝，四个标本检测均为阴性！本品无支原体、无噬菌体，低内毒素！基尼亚生物提供的正常动物血清生物制品，均未经灭活，可用于实验材料，以及作为动物免疫、血清的IgG制备、病理组化封闭、ELISA等免疫实验中的
￥100-1000
6个月的条件：2-8℃底物请避光保存；Elisa试剂盒不同批号组分不得混用，从标本收集、保存、预试验、实验、数据分析等全实验过程提供完整的技术指导。血清一氧化氮,NO ELISAkit注意事项：1．
试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2．
浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时
（3）酶的底物；（4）阴性对照品和阳性对照品（定性测定中），参考标准品和控制血清（定量测定中）；（5）结合物及标本的稀释液；（6）洗涤液；（307）酶反应终止液。ELIS试剂盒注意事项:底物请避光保存。严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准.所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。本试剂不同批号组分不得混用。血清
反复冻融。标本2 -8 ℃可保存48 小时，-20 ℃可保存1 个月。-70度可保存6 个月。部分激素类标本需添加抑肽酶。人血清白蛋白(HSA)计算：以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，
在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD
值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释
倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标
（货号：36116ES10）是以冻干粉形式提供的，本品需要先溶解配制成100%原液后再稀释使用。溶解方法：用10ml 蒸馏水（dH2O）充分溶解冻干粉（如果不澄清，可对其离心处理），此时得到的即是100%原液。然后按照1:20的比例用缓冲液，如PBS或PBST，稀释到需要的5%工作液。也可以根据自身实验条件，稀释到合适的工作液浓度。2）
正常驴血清（货号
产品详细说明 产品名称：人血清C-肽 ELISA试剂盒 检测方法：ELISA检测类型：酶免免疫夹心法检测范围：见说明书灵敏度：见说明书检测目标：人大小鼠猪犬羊兔等样品形式：血清/血浆/细胞培养上清/其它生物液体保存与运输：短期4℃/长期-20℃保存应用范围：科研用检测试剂 一、服务内容：凡购买本司任何一种ELISA检测试剂盒
【关于样品收集、处理及保存方法】1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转
、2-20uL、20-200uL、200-1000uL3.
37℃恒温箱操作注意事项1.
试剂盒保存在2-8℃，使用前室温平衡20分钟。从冰箱取出的浓缩洗涤液会有结晶，这属于正常现象，水浴加热使结晶完全溶解后再使用。2.
实验中不用的板条应立即放回自封袋中，密封（低温干燥）保存。3.
预处理后的样本无需稀释，直接取10μL加样即可。4
在洗液和稀释液中加叠氮钠，叠氮钠可抑制过氧化物酶的活性。 14
当测定混合液体中的抗原时，如血清，建议在标本稀释液中加不相干的Ig.
每个试剂盒操作是不同的，请按说明书操作。 （注：以上试剂盒仅供科研使用。具体事项请来电咨询。） 上海瓦兰生物科技有限公司专业提供抗体：进口试剂,原装试剂,进口抗体及ELISA试剂盒等等（以信誉求发展
评价。小鼠牛血清白蛋白(BSA)ELISA试剂盒价格的注意事项： 实验操作中必须使用一次性吸头，避免交叉污染。 加样：加样时，要控制加样速度，避免第一孔与最后一孔间的时间间隔过大，否则将会导致不同的预孵育时间，从而影响实验的准确性以及重复性。 孵育：严格按照说明书上规定的孵育时间和温度进行。 反应时间的控制：加入底物后请定时观察反应孔
抗酶抗体的合成。3.显现微量的免疫沉淀反应。4.定量检测体液中抗原或抗体成分。保存条件及有效期1.保存：；2-8℃。2．有效期：6个月人血清IL-32ELISA试剂盒稳定性好报告注意事项1.从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未用完，板条应装入密封袋中保存。2.浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中
：鱼、牛蛙等。动物类：小鼠、大象、虎、羊、马、蝌蚪、蟾蜍、牛、熊猫、金黄地鼠、猪、兔、蜥蜴、河马、猕猴、类人猿、狒狒、鹿等。 小鼠牛血清白蛋白（BSA)ELISA试剂盒操作步骤　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:　　1.　包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0
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