对于安捷伦液相色谱柱，物质的出峰时间和什么有关系的？会受到什么影响

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-09-22 02:38 标签： 液相色谱仪
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江大色谱思考题
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高效液相色谱峰型良好，可是出峰时间极度不稳定
检测方法参考国标GB/T - 2003测定牛磺酸标准品，流速从国标的1ml/min改为0.5ml/min。然后在实验的过程标准样的出峰时间极度不稳定在7~8min之间。求教下这是因为是什么原因？是因为三种流动相在流动的过程中混合不均匀还是什么其他的原因，怎么解决？急需，麻烦各位比较懂的大神支招！
我用的是安捷伦1200，柱温箱是裸露的，比例阀是否有问题不大清楚。
是有时，走几个样出峰时间稳定在某个时间点，过会在下一个时间点，出峰时间从十分多到最后的八分左右。purge彻底了，水：乙腈：甲醇=80:10:10.水换过，效果不是很明显。之前室内温度不稳定，后来空调打开，门窗关紧，出峰时间漂移的现象有所改善，但还是有漂移，只是幅度变小了，大的漂移时间在0.1s& && &请问现在该怎么做？流动相有混合在一起使用过，但是把混合后的流动相放上去之后，一会管路里就逐渐布满气泡，怕柱子进气泡就停止这么做了
我现在走的都是标准品，出过峰之后，基线是几本没有什么很大的波动，与平衡后期的波动值差不多。请问下这样也有必要走一会基线吗？
我们组在用HPLC的时候以前走样的时候峰也不大好，现在每次走一会儿基线再进样就会好很多。你可以试试，也就走几分钟的基线吧
我们的峰型不错，只是出峰时间会有波动。（不过你说的方法我们会去试试，谢谢啦:hand:）
有柱温箱，但是柱温箱的盖子没了，基本等于没有。我们只能把实验室的门窗尽可能的关起来，然后把空调的温度，调到与目的温度一致，以此来保持柱温的稳定。这样做了之后出峰时间的波动会相对变小，但是会在0.2min内波动
门窗都关着，空调不是对着仪器吹。不确定恒温，只是尽力保持它恒温
0.2min已经算很小了，一般保留时间在5%以内算一致，你可以走序列看看，平衡多走几针，这样可以保证进样条件一致
没有漏液，柱压在正常的波动范围内
我要进行定性分析，担心到到时候出峰时间不稳，峰对不上。再问下，这个5%的分母是什么？平衡很久了，基本可以排除平衡时间不够造成的影响
你们有什么好的解决办法没？流动相混在一起试过，不行！
这个我们还在尝试，不过还是有一点点的波动
有一点点波动是很正常的，我甚至遇见过实验室多一个人都会有变化的情况。
不要太过保留时间很稳定，有些色谱条件可能就会不是很稳定，为什么一定要没有变化呢？？
如果实在是想让保留时间稳定，建议采用柱温箱，温度比室温高5℃以上，一般不要超过40，室温及其他环境保持稳定可能会有改善。
要是保留时间不稳定的话，貌似没法做定性分析吧？
不大清楚你所说的序列。我们是安捷伦1200手动进样的，就是平行组之间的出峰时间会飘，不同浓度的样品之间也会飘
我使用的都是纯品甲醇乙腈还有水。而且我是先把流动相超声脱气，再放上去的（因为我们这台在线脱气效果不是特别好）
梯度洗脱？同一次配制的流动相，样品不同进针也飘是吗？
等度洗脱。对，同样的流动相，同一样品不同针会飘
找工程师过来 维修 泵的流速是非常关键的
我觉得是柱温箱的问题，柱温箱要密封。安捷伦1200的柱温箱是密封的啊？
打比方8min出峰，0.4min内算出峰一致
我们那台买挺久的了，柱温箱的盖子早没了。所以现在温度挺难控制的
这样都算一致？怎么做定性分析？或者能不能麻烦你推荐下这个0.4min的出处，我去参考下，不然导师不信
实在不信也只能这么办（话说找工程师好贵的说，因为仪器过保N年了）
液相本来就不是用来做定性的，谁说保留时间一致两物质就一样！
没关系就没关系吧 呵呵
泵流速不准不稳能影响出峰时间，怎么能说没一毛钱关系呢？
好谢谢:work:
我的样品只含氨基酸，出峰时间一致应该可以说明是同一种物质吧？
以前测的时候，同一浓度的标准品的处分时间能保证小数点后一位一致（单位min），所以觉得不稳定:(
嗯，好的谢谢您的建议
安捷伦轮1200，检测方法不一样（流动相换了）
嗯，谢谢啦
混合后由于有抽滤吗？
没有抽滤。难道甲醇乙腈水混合也需要滤？请问没抽滤会损坏柱子吗（我就用这个混合流动相走了一小会，几分钟的样子）？
我们实验室规定要滤的，抽滤可以除气泡
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共有&13&人回复了该问答液相流动相出峰时间的问题
同样的乙腈，同样的磷酸盐，同样的比例，但是配制出来的流动相有的出峰时间会有5分钟左右的差别，听说跟有无柱温箱有关系，可是原来没有柱温箱时也没有事啊，请问是什么原因？多谢
快速回复【花三五分钟，帮别人解决一个问题，快乐自己一天！】
回复于： 11:34:41
磷酸盐缓冲液pH多少？
回复于： 11:53:31
乙腈质量可能有问题
回复于： 13:00:20
跟流动相极性、柱温都有关系！
回复于： 13:11:36
液相没柱温箱做啥液相，至少配个外置的，几千块钱就能搞定的事
回复于： 13:17:14
测定下pH是否有变化？这还和柱子使用时间也有关系。也就是和其填料的膨胀有关。
回复于： 14:09:50
跟柱温会有关，还有跟外界环境温度也有关系，我之前分析的一个样品，夏天和冬天用同样的条件做，保留时间也是差距很大，温度越高，保留时间越提前。
回复于： 14:19:08
色谱柱没有平衡好，也会出现这样的问题！
回复于： 15:42:50
室内温度影响也很大。
回复于： 15:44:56
首先先试着多平衡一会儿色谱柱，平衡好之后。如果走的是等度，保留时间变化这么大，建议楼主预先混合好相应比例的流动相，单泵进样看看。连续进样一直的话，液相比例配比有问题个人认为出现这种保留时间波动，是机器梯度配比精度问题：& & & & & & & &
1可能是流动相瓶里的砂滤头脏了，导致的流量不均匀。我曾经含量测定时，不同浓度标品连续进样7针，出现了7个不同的保留时间。我将砂滤头去下，把管子直接放入流动相，进样保留时间一直。后将砂滤头以百分之三十的硝酸超声清洗，超纯水洗至PH接近7，改用甲醇超声，装上机器一切正常。& & & & & & & & &
2第二种可能流动相混合有问题，如四元低压液相的四项比例阀出问题就会出现这样的情况。（这个一般不会出现问题，但如果别的地方没问题，那就只能是这个问题，需要跟工程师联系，看看，多半是要更换配件的）
回复于： 20:33:19
回复于： 8:51:16
主要影响因素我觉得可能来自流动相和色谱柱，流动相影响大的是pH，不是同一根色谱柱影响也很大，另外仪器不同也有差异
回复于： 18:22:25
这个保留时间相差5min的两次实验相隔多长时间做的？色谱柱有没有换过？色谱柱平衡是否充分？环境温度变化大吗？
回复于： 16:17:25
1、可能是柱子柱效差（即柱子不好）。2、磷酸盐的PH值有关，太高或太低都对柱子有很大的影响。3、流动相的微小差异也可能造成保留时间差异。4、当然柱温也是一个因素。5、有时候样品也是因素，比如样品的性质比较极端：强酸强碱等。6、其他。
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