细胞12孔板接种细胞数时，细胞混悬液用什么配置

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2016-08-09 03:28 标签： 细胞接种
未将对象引用设置到对象的实例。
“/”应用程序中的服务器错误。
未将对象引用设置到对象的实例。
说明: 执行当前 Web 请求期间，出现未处理的异常。请检查堆栈跟踪信息，以了解有关该错误以及代码中导致错误的出处的详细信息。
异常详细信息: System.NullReferenceException: 未将对象引用设置到对象的实例。
执行当前 Web 请求期间生成了未处理的异常。可以使用下面的异常堆栈跟踪信息确定有关异常原因和发生位置的信息。
[NullReferenceException: 未将对象引用设置到对象的实例。]
book_2.LoadFlexPaperInfo() +351
book_2.Page_Load(Object sender, EventArgs e) +16455
System.Web.Util.CalliHelper.EventArgFunctionCaller(IntPtr fp, Object o, Object t, EventArgs e) +24
System.Web.Util.CalliEventHandlerDelegateProxy.Callback(Object sender, EventArgs e) +41
System.Web.UI.Control.OnLoad(EventArgs e) +131
System.Web.UI.Control.LoadRecursive() +65
System.Web.UI.Page.ProcessRequestMain(Boolean includeStagesBeforeAsyncPoint, Boolean includeStagesAfterAsyncPoint) +2427
版本信息:&Microsoft .NET Framework 版本:2.0.; ASP.NET 版本:2.0.搞不清症状？试试
当前的位置：&&&&&&
英文名称：Rabies Vaccine (Vero Cell) for Human Use ,Freeze-dried
辽宁依生生物制药有限公司
沈阳市新城子区财落镇大辛二村*
注：请仔细阅读说明书并按说明使用或在药师指导下购买和使用
说明书修订日期
【药品名称】
通用名称：冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)
英文名称：Rabies Vaccine (Vero Cell) for Human Use ,Freeze-dried
本品系用狂犬病病毒接种Vero细胞培养后，收获病毒液，经浓缩、灭活、纯化，并加入适量的人血白蛋白、右旋糖酐制成。
用于预防。
【用法用量】
使用时将0.5毫升稀释液注入西林瓶中，振荡直至完全溶解。溶液应是均一、澄明的液体。
本疫苗供上臂三角肌肌肉注射，幼儿可在大腿前外侧区肌肉注射。禁止臀部注射
【不良反应】
产生不同程度的不良反应。胃肠道功能紊乱
由于狂犬病是致死性疾病，暴露后接种疫苗无任何禁忌证。
暴露前接种时：
(1)已知该疫苗的所含任何成分，包括辅料以及硫酸庆大霉素过敏者。
(2)患急性疾病、严重慢性疾病、慢性疾病的急性发作期和发热者。
(3)患未控制的癫痫和其他进行性神经系统疾病者。
【注意事项】
1.本品不能进行血管内注射，禁止针头插入血管2.用稀释液溶解疫苗后立即使用3.抗狂犬病免疫球蛋白和本疫苗绝不能使用同一注射器或在同一部位注射4.使用前注意检查包装容器、标签、外观、有效期是否符合要求
于2～8℃避光保存和运输
【有效期】
【批准文号】
【说明书修订日期】
核准日期：日
修改日期：日
【生产企业】
企业名称：辽宁依生生物制药有限公司
生产地址：沈阳市新城子区财落镇大辛二村*
联系电话：024-
如有问题可与生产企业联系
关注或联系我们
官方微信公众号：39药品通
联系邮箱：ypk@mail.39.net
合作电话：020-1/8673(媒体&市场合作)
就医助手APP
掌上用药查询、预约挂号、问医生，随时与万千病友交流。
更多药品信息扫描二维码查看→ 吸入用布地奈德混悬液的用量是什么？
吸入用布地奈德混悬液的用量是什么？
健康咨询描述：
我有个同学有支气管哮喘的毛病，今年天气变化挺快的，他就有些不适应了，这几天他很是难受，一般上个两层楼就喘得不行了，听医院说是吸入用布地奈德混悬液对哮喘有效果。
想得到怎样的帮助：吸入用布地奈德混悬液的用法用量是多少？
其他类似问题
医生回复区
帮助网友：26715称赞：37
&&&&&&你好，吸入用布地奈德混悬液成人：一次1～2mg，一天二次。儿童：一次0.5～1mg，一天二次。维持剂量维持剂量应个体化，应是使病人保持无症状的最低剂量。建议剂量；成人：一次0.5～1mg，一天二次。儿童：一次0.25～0.5mg，一天二次。
疾病百科| 哮喘（别名：支气管哮喘,吼病）
挂号科室：呼吸内科
温馨提示：当患者在治疗哮喘时一定要保持持续性用药，切勿因为病情稍微好转就放弃用药等。
支气管哮喘是由多种细胞(如嗜酸性粒细胞、肥大细胞、T淋巴细胞、中性粒细胞、气道上皮细胞等)和细胞组分参与气道慢性炎症性疾患。这种慢性炎症导致气道高反应性的产生，通常出现广泛多变的可逆性气流受限，并引起...
好发人群：所有人群
是否医保：医保疾病
常见症状：小支气管平滑肌挛缩、气喘、鼻煽、喉鸣声、
治疗方法：药物治疗
参考价格：35
参考价格：22
参考价格：11.5
您可能关注的问题
用药指导/吃什么药好
驱痨补肺，镇咳祛痰。本品主要用于肺痨咳嗽，咯痰，...
参考价格：￥15
本品用于过敏性鼻炎，过敏性支气管哮喘。...
参考价格：￥6
下载APP，免费快速问医生细胞库/细胞培养
ELISA试剂盒
实验室仪器/设备
原辅料包材
体外检测试剂
实验方法原理
SD胎鼠脑皮层神经元体外培养7 d ，微量移液器塑料滴头于培养孔内机械性划割培养之神经元，依划割程度不同分为轻、中、重3组，对照组除不进行机械性划割，其余处理同损伤组，伤后不同时间点（10，30 min ， 1，3，6，12，24 h）检测细胞存活率及培养液上清乳酸脱氢酶(LDH)含量。
试剂、试剂盒
仪器、耗材
一、实验步骤
1. 孕16 d SD 大鼠经戊巴比妥钠麻醉后，碘酒、75%乙醇消毒腹部皮肤，依次剪开皮肤、肌肉、皮下筋膜，无菌操作下取出胚胎放入预冷的 D-Hanks’平衡盐液中。
2. 在解剖显微镜下分离并取出胚胎大脑皮层，除去脑膜，剪碎组织成约1mm3 大小，加入胰酶-EDTA 消化液并放入 37℃孵箱内消化20 min，中间摇晃一次。
3. 随后用滴管吸出组织转移到装有预冷的培养液(DMEM＋10%FBS)的离心管内终止消化液作用5 min。
4. 用滴管吸出组织转移到装有预冷的 DMEM＋10%FBS 的离心管内，用火焰抛光的巴斯德滴管吹打数次，静置后取上清吸到另一支离心管内。重复上述步骤 2～3 次。
5. 将所收集的上清经200 目筛网过滤。
6. 过滤后的细胞悬液于800 rpm 离心5 min，弃上清，管内加入新鲜培养液(DMEM＋20%FBS)并吹打 成单细胞悬液。
7. 细胞计数，调整细胞密度按1.5×105/cm2
种入6 孔板内，放入CO2 孵箱中培养。培养48 h 后换液并 加入Ara-C使其终浓度为 1×10-5 mM/L。Ara-C作用24 h 后全量换液。以后每隔 3 天半量换液一次。
1. 上面的步骤是传统方法。有许多地方可以进行改动：如消化时可以直接用0.125-0.25%的胰酶消 化15-20 min 左右，也可用 DNA 酶进行消化，有人还直接进行吹打，都可行。
2. 上面虽然时大鼠皮层神经元，但是同样适用于小鼠，但是应该选择孕13 d 左右的小鼠。
3. 神经元是一种比较难培养的细胞，因此在接种时细胞的密度一定要够。
4. 在玻片上培养神经元时，一定要注意玻片的来源和处理方法，这个非常重要，对神经细胞的影响 是很大的。如果您现在在玻片上培养的神经元生长情况还不错的话，那么您在以后的培养中最好还是用同 一来源(厂家)的玻片。
5. 如果有B27 和neurobasal 培养基，那么就方便了(不用加 AraC):
(1)把细胞悬液用(DMEM＋20%FBS)悬浮，种到培养皿上6－12 h 后，全量换成 2% B27 的 neurobasal 培养基，继续培养，3 d 半量换液。
(2)把细胞悬液用直接用 2% B27 的 neurobasal 培养基悬浮接种。
(3)可以用新生1 d 内的胎鼠皮层直接培养。
试剂、试剂盒
仪器、耗材
一、小鼠大脑皮层神经元原代培养步骤
于无菌条件下切取鼠头并以75%酒精浸泡1 min，解剖出完整鼠脑。
预冷解剖液中分离去除软膜、血管、取大脑皮质漂洗，用眼科剪将皮质反复剪切成碎块。
移入培养皿中，吸除解剖液加入0.25%胰蛋白酶2 ml，37℃培养箱中消化30 min。
将皮层组织碎块移入离心管，弃去剩余消化液，用接种液洗3次，每次洗涤后使组织块充分沉降到试管底，弃去上清液。
最后再用接种液1 ml混悬，反复吹打（巴氏吸管）混悬液中组织块，力度适中，至浑浊后将上清液移入培养瓶待用。
加入1ml接种液后再次吹打，如此反复3-4次，组织块逐渐消化后，弃去最终残块。
收集含单细胞悬液的上清液约4-5 ml于培养瓶中，以接种液重新悬浮细胞，细胞记数；接种1x107个细胞于6孔培养板中。
培养24 h至细胞贴壁后，换全培养液（DMEM/F12+2%B27）培养3d，观察神经元生长状况。
换用阿糖胞苷培养液、
每隔3d换全培养液1次，每次换半液。
二、神经元免疫化学鉴定
4%多聚甲醛固定细胞30 min，PBS洗涤3次。
加入无水甲醇:30%双氧水（5:1）处理30 min，PBS洗涤3次。
加入5%羊血清封闭20 min，弃去多余液体。
加入Rabbit Anti-NSE（1:100）（神经元特异性烯醇化酶），培养箱中孵育2-4 h，PBS洗涤3次。
加入DAPI染液（1:40），室温放置5-10 min；PBS洗涤3次。
荧光显微镜观察。
图1： 刚接种时细胞图
图2： 刚接种时细胞图培养1d后
图3： 刚接种时细胞图培养2d后
图4： 刚接种时细胞图培养3d后
图5： 刚接种时细胞图培养4d后
图6： 刚接种时细胞图培养5d后
图7： 刚接种时细胞图培养6d后
图8：第7d免疫鉴定图
最新实验心得
(共6个心得)
培养24h后，细胞周围粘附有碎片，如何解决？
发表于 17:52
剪碎并消化后细胞杂质多解决办法。
发表于 03:22
简单可行的大脑皮层神经元原代培养。
发表于 00:16
(共3个问题)
相关实验Protocol
谁能提供实验帮助？
谁做这个实验？
细胞太少了
小鼠培养起来更难。
谁关注这个实验？
丁香通采购热线：400-
Copyright (C)
DXY All Rights Reserved.

我要回帖

更多关于 细胞接种 的文章

 

随机推荐