细胞骨架有哪几种与AD PPT

实验六 细胞骨架有哪几种的观察 ┅、考马斯亮兰R250染色法 【实验目的】 掌握用考马斯亮蓝R250(Coomassie blue R250)染色法观察植物细胞骨架有哪几种的方法 【实验原理】 细胞骨架有哪几种是指存在于真核细胞中的蛋白纤维网架体系。其概念具有狭义和广义之分:狭义的细胞骨架有哪几种是指细胞质骨架包括微丝、微管和中间纖维;广义的细胞骨架有哪几种包括细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质核骨架、核纤层与中间纤维在结构上相互连接,贯穿于细胞核和细胞质的网架体系 【实验原理】 细胞骨架有哪几种(Cytoskeleton) 组成:主要包括微管、微丝和中间纤维以及核骨架-核纤层体系。微管主要分布在核周围呈放射状向四周扩散,微丝主要分布于细胞质膜的内侧而中间纤维则分布在整个细胞中。 细胞骨架有哪几种作用:具有维持细胞形态结构和内部结构的有序性、参与细胞运动、物质运输、能量转换、信息传递和细胞分裂等重要功能 细胞骨架有哪几種的研究方法:考马斯亮兰R250染色法、荧光素标记的鬼笔环肽染色法、间接免疫荧光法等。 考马斯亮兰R250染色法的原理:考马斯亮蓝R250可以对各種蛋白质进行染色细胞骨架有哪几种有一个特性,即用非离子去垢剂(如Triton X-100)处理时可以保持非溶解状态。当用这类试剂处理细胞时細胞内其它可溶性的物质和膜成分都被抽提出来,只留下细胞骨架有哪几种考马斯亮蓝R250虽不能对微丝进行特异性染色,但当其它蛋白成汾被抽提后就能清晰地显示微丝束的形态。 [实验器材、材料和试剂] 光学显微镜;烧杯、吸管、镊子、玻片染色缸、载玻片、盖玻片; 新鮮洋葱; [实验步骤] 1、撕取洋葱鳞茎内表皮(约1平方厘米)置于3~5ml pH6.8 磷酸缓冲液中待其下沉(烧杯1) ;对照无PBS处理; 2、用3~5ml 1%Triton X-100处理20 min(烧杯2) ;对照无1%Triton X-100的M缓冲液处理20min; 3、吸去Triton 7、将表皮铺放在载玻片上加盖玻片,在高倍显微镜或者油镜下进行观察 细 胞 骨 架 洋葱表皮细胞骨架有哪几种 * * Triton X-100 SDS 6mM磷酸盐缓冲液(pH6.8)、M緩冲液、1%Triton X-100、0.2%考马斯亮蓝R250、3%戊二醛。 3%戊二醛用PBS配制 *

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