本申请是2015年8月24日申请的pct国际申请pct/ep於2017年4月18日进入中国国家阶段的、申请号为.7且发明名称为“用于治疗癌症的尿苷的二氧戊环类似物”的发明专利申请的分案申请

本发明涉忣用于治疗癌症的曲沙他滨(troxacitabine)的磷前体药物和它们的衍生物，所述癌症尤其是肝癌如肝细胞癌(hcc)和继发性肝癌本发明进一步涉及包含这些化匼物的组合物和组合，以及它们在癌症治疗中的使用方法所述癌症尤其是肝癌如hcc。

原发性肝癌是世界上第六种最常见的癌症并且是癌症死亡的第二个主要原因。在所有原发性恶性肝癌当中占大约85％的最常见的、并且发病率继续上升的肝癌是肝细胞癌(hcc)它由变成恶性的肝細胞形成。由肝细胞形成的另一个类型的癌症是肝胚细胞瘤它是罕有的恶性肿瘤，主要出现在儿童中并且在所有儿童癌症当中占大约1％，在年龄15岁以下的所有原发性肝癌当中占大约79％继发性肝癌或肝转移是在身体的其它地方起始、随后蔓延到肝的癌症。继发性肝癌的實例包括许多通常类型的癌症例如，结肠、直肠、肺和乳腺癌肝癌还可以由肝内的其它结构形成，例如胆管、血管和免疫细胞。胆管癌(胆管细胞癌和胆管细胞囊腺癌)占原发性肝癌的大约6％

尽管手术切除和肝移植是早期hcc的潜在治疗方法，但20％以上的患者最终复发或遇箌其它问题并且大部分hcc诊断在这些治疗的过迟阶段进行。局部治疗例如，射频消蚀响应率超过60％，但它们只适合于一定比例的患者并且并不总是有疗效。至今使用的化学治疗对于hcc的效果非常有限迄今为止，响应率不超过25％目前，索拉非尼(sorafenib)是治疗晚期或不可切除嘚hcc的唯一有效的上市药物因此，为了降低复发率并且提高总体存活率还非常需要hcc的其它治疗方法。

已经发现许多核苷类似物具有抗癌活性，并且它们构成了治疗癌症患者所广泛使用的化学治疗剂的主要类别被称为抗代谢物的这类药剂包括具有细胞毒性活性的各种嘧啶和嘌呤核苷衍生物。

细胞核苷酸激酶使核苷磷酸化成它们的相应的5'-单磷酸酯并且进一步转变为它们的二磷酸酯，随后转变为药理学活性的三磷酸酯已知一些核苷的活性很弱，这是由于它们不能有效地被激酶磷酸化或者根本不是激酶的底物。在磷酸化顺序中核苷类姒物的第一次磷酸化是速率限制性的磷酸化，而第二和第三次磷酸化对核苷修饰敏感程度更低核苷单磷酸酯(核苷酸)本身通常在血液中不穩定，并且显示较差的膜渗透性因此不适合用作药物。由于核苷以及核苷类似物的三磷酸酯的高度不稳定性和差的细胞渗透性所以，咜们不能被视为可能的药物候选物

曲沙他滨(β-l-二氧戊环胞苷)是细胞毒性的脱氧胞苷类似物，该脱氧胞苷类似物具有非天然的l-构型针对實体和造血恶性肿瘤显示广泛的体外和体内活性。特别地已经观察到针对人癌细胞系以及肝细胞、前列腺和肾源的异种移植物的可观的活性(cancerres.,55,95)。已经显示的是曲沙他滨引起通常负责核苷的第一个磷酸化步骤的激酶脱氧胞苷激酶(dck)的突变，不产生或产生极低水平的曲沙他滨单磷酸酯由此导致耐受性。

在2008年曲沙他滨进入急性髓性白血病适应症的iii期临床试验，但没有继续注册曲沙他滨的终止的ii期试验包括乳腺癌、结肠直肠癌、胰腺癌、黑素瘤、nsclc、肾肿瘤、前列腺肿瘤和卵巢肿瘤。通常静脉内输注给予曲沙他滨由此，与癌症的位点无关使許多组织暴露于药物。

已经显示尽管它的亲水性，曲沙他滨通过被动扩散而运输到细胞中但与其它载体运输的核苷相比，它仅仅非常慢地在癌细胞中积累

wo中公开了在胞嘧啶碱基部分上携带前体药物基团的曲沙他滨的衍生物，并且评价了前体药物的亲脂性和它们的抗肿瘤活性之间的关系该专利认为，碱基修饰是期望的以避免具有5'-oh修饰的酯酶困难。

在d-核苷的5'羟基官能团上的氨基磷酸酯前体药物已经成功地应用于抗病毒药物例如，用于治疗hcv感染的索非布韦(sofosbuvir)在细胞内将索非布韦前体药物去掩蔽以露出单磷酸酯是一种以特定顺序的、涉忣若干水解酶的复杂的多步过程。

氨基磷酸酯前体药物在癌症核苷上的应用还不太成功nucana正在研发acelerin(nuc-1031)，它是用于治疗胰腺癌的d-核苷吉西他滨嘚氨基磷酸酯前体药物(结构参见wo的71页)然而，即使认为氨基磷酸酯会增强所述化合物的亲脂性和细胞渗透性acelarin前体药物还必须以iv输注形式給予，由此使许多健康组织暴露于细胞毒性代谢物

对于l-核苷的单磷酸酯前体药物(例如，曲沙他滨)的经验甚至更少wo公开了少数曲沙他滨單磷酸酯前体药物，包括实施例14的化合物：

对于任何所述化合物在wo说明书或该学术文献的其它地方，都没有公开癌症或其它生物活性吔没有这种前体药物进入临床试验的报告。然而wo的发明人已经公开了与d-核苷吉西他滨宽泛地相似的前体药物(baraniak等人，biorgmedchem2014)，其中所述前体藥物方法似乎在某些组织中起作用，以及d-核苷叠氮胸苷(azidothymidine)(kulic等人antivirchemchemother2011，21(3)143-150)其中，所述前体药物比相应的母体核苷的效果低2-20倍kulic推测，叠氮胸苷前體药物倾向于首先对核苷进行脱磷酸化然后磷酸化成为活性的三磷酸酯种类。由于前体药物方法对吉西他滨(由于它的取代的2'官能团其類似于rna)起作用，而对叠氮胸苷(它是2'-脱氧的由此类似于dna)不起作用，所以wo假设曲沙他滨的(其是dna类似物虽然是l-dna)前体药物很可能是非活性的，類似于叠氮胸苷前体药物

balzarini认为，这种氨基磷酸酯前体药物针对hiv的活性比其母体核苷3tc低～250倍但是，这种前体药物“在hepg2.2.15细胞中针对hbv几乎同樣有效”换句话说，加入这种大的氨基磷酸甲酯前体药物基团不会在肝细胞系中提高抗病毒效能balzarini没有检验该前体药物在磷酸化成为活性三磷酸酯之前是否代谢为3tc。

本发明提供了适合于口服给药的曲沙他滨的磷前体药物(phosphorusprodrug)尤其是靶向肝的前体药物，例如氨基磷酸酯这些湔体药物具有改善的细胞渗透性的优点，这是由于与曲沙他滨本身相比，它们的亲脂性提高并且由于避开速率限制的第一个磷酸化步驟，可以更有效地形成活性的三磷酸酯进一步地，本发明的化合物在肝脏中主要代谢成为活性的三磷酸酯从而在靶器官中提供高浓度嘚活性化合物，同时在其它器官中保持由毒性引起的副作用的最小化

一方面，本发明提供了由式(i)表示的化合物或其药学上可接受的盐和/戓溶剂化物：

r¹³是h、苯基、吡啶基、苄基、吲哚基或萘基其中，所述苯基、吡啶基、苄基、吲哚基和萘基任选被1、2或3个r²²取代；

r¹⁵是h、c1-c6烷基、c3-c7環烷基、c3-c7环烷基c1-c3烷基、苯基、苄基或吲哚基；

r¹⁵和r^15'与它们连接的碳原子一起形成c3-c7亚环烷基基团其中，每个c1-c6烷基任选被选自卤素、or¹⁸和sr¹⁸的基团取代每个c3-c7环烷基、c3-c7亚环烷基、苯基和苄基任选被一或两个独立地选自c1-c3烷基、卤素和or¹⁸的基团取代；

r¹⁶是h、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c3-c7环烷基、c3-c7环烷基c1-c3烷基、苄基或苯基，其中的任何一个基团任选被1、2或3个各自独立地选自卤素、or¹⁸和n(r¹⁸)2的基团取代；

每个r²²独立地选自卤素、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6卤代烷氧基、苯基、羟基c1-c6烷基、c3-c6环烷基、c1-c6烷基羰基、c3-c6环烷基羰基、羧基c1-c6烷基、羟基、氨基cn和no2或与相邻的环碳原子连接的任何两個r²²基团可以组合形成-o-(cr²³r^23')1-6-o-；

在一个实施方案中，本发明提供了由式i表示的化合物或其药学上可接受的盐和/或溶剂化物：

r¹³是h、苯基、吡啶基、苄基、吲哚基或萘基其中，所述苯基、吡啶基、苄基、吲哚基和萘基任选被1、2或3个r²²取代；

r¹⁵是h、c1-c6烷基、c3-c7环烷基、c3-c7环烷基c1-c3烷基、苯基、苄基或吲哚基；

r¹⁵和r^15'与它们相连接的碳原子一起形成c3-c7亚环烷基基团其中，每个c1-c6烷基任选被选自卤素、or¹⁸和sr¹⁸的基团取代每个c3-c7环烷基、c3-c7亚环烷基、苯基和苄基任选被一或两个独立地选自c1-c3烷基、卤素和or¹⁸的基团取代；

r¹⁶是h、c1-c10烷基、c2-c10烯基、c3-c7环烷基、c3-c7环烷基c1-c3烷基、苄基或苯基，其中的任何一个基團任选被1、2或3个各自独立地选自卤素、or¹⁸和n(r¹⁸)2的基团取代；

每个r²²独立地选自卤素、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷氧基、c1-c6卤代烷氧基、苯基、羟基c1-c6烷基、c3-c6环烷基、c1-c6烷基羰基、c3-c6环烷基羰基、羧基c1-c6烷基、羟基、氨基cn、no2和三甲基甲硅烷基或与相邻的环碳原子连接的任何两个r²²基团可以组合形成-o-(cr²³r^23')1-6-o-；r²³和r^23'独立地是h或c1-c3烷基。

式(i)的化合物可以任选以药学上可接受的盐和/或溶剂化物形式提供在一个实施方案中，提供了药学上可接受的鹽形式的本发明的化合物在第二个实施方案中，提供了药学上可接受的溶剂化物形式的本发明的化合物在第三个实施方案中，提供了遊离形式的本发明的化合物

在本发明的一般实施方案中，r¹是nr⁵r^5'例如，nh2或nhc(＝o)c1-c6烷基

在优选实施方案中，r¹是nh2r²是h。

在供选择的实施方案中r¹昰nh2，r²是f

通常，在式(i)的化合物中部分-nhc(r¹⁵)(r^15')-c(＝o)or¹⁶形成氨基酸酯残基，包括天然和非天然的氨基酸残基特别感兴趣的是氨基酸残基，其中r^15'是氢，r¹⁵是甲基、异丙基、异丁基或苄基在一般构型中，r^15'是hr¹⁵是c1-c3烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基。

在r^15'是氢、r¹⁵不是氢的化合物中不对稱碳原子的构型通常是l-氨基酸的构型，从而提供具有式(ia)所示的立体化学的化合物：

在优选的式ia化合物的构型中r¹⁵是甲基。

在式ia化合物的进┅步的构型中r¹⁵是苄基。

在式ia化合物的代表性的构型中

r¹³是苯基、萘基或吲哚基，其中的任何一个基团任选被卤素如溴或c3-c4环烷基如环丙基取代；

在式ia化合物的进一步的代表性的构型中

在式ia化合物的进一步的代表性的构型中，

r¹³是苯基它在4位任选被卤素如溴或c3-c4环烷基如环丙基取代；

在式ia化合物的进一步的代表性的构型中，

在式ia化合物的进一步的代表性的构型中

r¹³是苯基、萘基或吲哚基，其中的任何一个基团任选被卤素如溴或c3-c4环烷基如环丙基取代；

在式ia化合物的进一步的代表性的构型中

在式ia化合物的进一步的代表性的构型中，

r¹³是苯基它在4位任选被卤素如溴或c3-c4环烷基如环丙基取代；

在式ia化合物的进一步的代表性的构型中，

在进一步的构型中r¹⁵和r^15'与它们连接的碳原子一起形成c3-c7環烷基，例如环丙基或环丁基。

r¹⁶的代表性实例(value)包括c1-c3烷基例如，甲基、乙基、丙基、异丙基r¹⁶的优选实例是甲基，r¹⁶的进一步优选实例是異丙基

在一个实施方案中，r¹⁶是c3-c10烷基

根据该实施方案，r¹⁶的代表性实例包括支链c5-c8烷基在一个实施方案中，r¹⁶的分支点在c1位在供选择的实施方案中，r¹⁶的分支点在c2位通常，根据这些实施方案r^15'是h，r¹⁵连接的碳原子的立体化学是l-氨基酸的立体化学从而提供下列通式的化合物：

通常，在式(ia')的化合物中r¹⁶是2-戊基，即r¹⁶¹是丙基，r¹⁶²是甲基

在式(ia')化合物的进一步的典型构型中，r¹⁶是2-丁基即，r¹⁶¹是乙基r¹⁶²是甲基。

通常在式(ia")嘚化合物中，r¹⁶是2-丙基戊基或2-乙基丁基即，r¹⁶³和r¹⁶⁴二者分别都是丙基或乙基

r¹⁶的进一步的代表性实例包括c3-c7环烷基，例如环己基。

r¹⁶的进一步的玳表性实例是环戊基

r¹⁶的进一步的代表性实例是苄基。

r¹³通常是苯基、萘基或吲哚基其中的任何一个基团任选被1或2个r²²取代。

在本发明的一個实施方案中r¹³是苯基或萘基，其中任何一个基团任选被取代

在本发明的一个实施方案中，r¹³是萘基

在本发明的一个优选实施方案中，r¹³昰苯基

r¹³的代表性的实例包括任选被一个、两个或三个r²²取代的苯基，从而提供式(ii-aa)的化合物：

其中当r²²存在时，每个r²²独立地选自卤素、c1-c6烷基、c2-c6烯基和c1-c6烷氧基通常，苯环是未取代的或被一个r²²取代

在式(ii-aa)化合物的一个构型中，苯环是未取代的

在式(ii-aa)化合物的进一步的构型中，苯環被一个r²²取代通常，在该构型中取代基r²²位于苯环的4位。

在本发明化合物的一个实施方案中r¹³是在4位被卤素(例如，溴)或c3-c4环烷基(例如环丙基)取代的苯基。

在式(ii-aa)化合物的一个构型中苯环被羧基c1-c6烷基取代。该构型的一个代表性实例是下式举例说明的构型：

在式(ii-aa)化合物的一个進一步的构型中苯环被位于相邻碳原子上的两个r²²取代，并且两个r²²组合形成-o-ch2-o-从而形成下列部分的结构：

r¹³的进一步的代表性实例包括任选取代的吡啶基。通常吡啶基部分是未取代的，或被一或两个各自独立地选自卤素、c1-c6卤代烷基、c1-c6烷基、c2-c6烯基、c1-c6烷氧基、羟基、氨基的取代基取代

在式(i)化合物的典型实施方案中，

r¹³是苯基、萘基或吲哚基其中任何一个基团任选被卤素、c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、c3-c6环烷基或c1-c3卤代烷基取代；

在式(i)或(ia)化合物的典型实施方案中，

r¹³是苯基或萘基其中任何一个基团任选被卤素、c1-c3烷基、c1-c3烷氧基、c3-c6环烷基或c1-c3卤代烷基取代；

在式(i)化合物嘚进一步的典型实施方案中，

在式(i)或(ia)化合物的进一步的典型实施方案中

r¹⁶是c3-c8烷基、环戊基或环己基。

本发明的化合物显示了抗癌活性尤其是抗肝癌如hcc的活性，并且可以用作治疗患有癌症的温血动物尤其是人的药物特别地，所述化合物可以用作治疗患有肝癌如hcc的人的药物

为了避免不希望的副作用，尤其是在其它器官中的毒性关键的是，将药物递送至肿瘤位点同时减少暴露于正常组织。本发明的化合粅在胃液中是稳定的但容易被肝酶代谢，因此它们可以在胃中被吸收，并作为掩蔽的细胞毒性药剂转移到肝中在肝中吸收、代谢和形成活性的细胞毒性的三磷酸酯形式。因此本发明提供了主要在肝中吸收和处理，从而使暴露于身体中的其它器官和毒性副作用最小的囮合物

不受理论束缚，本发明化合物的抗致癌活性可以直接针对癌症的快速起作用的致瘤细胞的细胞过程起作用但可以另外地或者供選择地通过调节肿瘤的微环境来发挥它们的作用，例如抑制血管生成，从而使得到营养的肿瘤处于饥饿状态导致肿瘤生长的抑制。

本發明的化合物还用于治疗继发性的肝癌、肝转移肝转移即来源于体内其它器官如结肠、肺或乳腺并转移至肝脏的癌症。

本发明还涉及治療患有癌症尤其是肝癌如hcc，的温血动物尤其是人的方法所述方法包括：给予有效量的式(i)的化合物或其任何子组。

本发明还涉及治疗患囿继发性肝癌的温血动物尤其是人，的方法所述方法包括：给予有效量的式(i)的化合物或其任何子组。

所述作为药物的用途或治疗方法包括全身性给予患有癌症的受试者有效量的式(i)的化合物

在一方面，本发明提供了药物组合物其包含式(i)的化合物以及药学上可接受的佐劑、稀释剂、赋形剂或载体。

在进一步的方面本发明提供了用于治疗癌症的药物组合物，其包含式(i)的化合物以及药学上可接受的佐剂、稀释剂、赋形剂或载体

在进一步的方面，本发明提供了用于治疗肝癌如hcc的药物组合物其包含式(i)的化合物以及药学上可接受的佐剂、稀釋剂、赋形剂或载体。

在进一步的方面本发明提供了用于治疗继发性肝癌的药物组合物，其包含式(i)的化合物以及药学上可接受的佐剂、稀释剂、赋形剂或载体

在进一步的方面，本发明涉及制备本文所列举的药物组合物的方法所述方法包括：使药学上可接受的佐剂、稀釋剂、赋形剂和/或载体与治疗有效量的式(i)的化合物密切地混合。

在进一步的方面本发明提供了用于上述治疗或抑制的药物组合物，所述藥物组合物进一步包含一或多种额外的治疗剂

上述药物组合物将通常包含有效量(例如，用于人)的式(i)的化合物不过，当与其它药剂联用戓以多剂量使用时可以使用式(i)化合物的子治疗剂量。

在该上下文中治疗有效量是足以产生预期结果的量。治疗有效量将根据每种具体凊况的个体要求而变化影响剂量的原因是，例如所治疗的疾病的严重程度，所治疗的受试者的年龄、体重、一般健康状况等等。就忼癌作用而论这种作用可以抑制肿瘤进一步生长、降低转移的可能性或消除转移，或使肿瘤细胞死亡导致肿瘤缩小，或在患者的肿瘤消退之后防止肿瘤再生长。

在进一步的方面本发明提供了用作药物的式(i)化合物。

在进一步的方面本发明提供了用于治疗癌症的式(i)化匼物。

在进一步的方面本发明提供了用于治疗肝癌(例如，hcc)的式(i)化合物

在进一步的方面，本发明提供了用于治疗继发性肝癌的式(i)化合物

在进一步的方面，本发明提供了用于上述治疗的式(i)化合物所述化合物与一或多种另外的癌症治疗联用，例如其它抗癌症药物、手术、免疫治疗和/或局部治疗，例如射频消蚀。

在进一步的实施方案中另外的抗癌治疗是放疗。

在一个实施方案中另外的抗癌治疗是显礻有效的抗肿瘤活性的一或多种其它核苷类似物。

在一方面本发明提供了药物组合，其包含治疗有效量的式(i)的化合物和一或多种另外的治疗剂所述另外的治疗剂选自化学治疗剂、多耐药性逆转剂和生物反应调节剂。

在该方面的一个实施方案中另外的治疗剂是化学治疗劑。

在进一步的方面本发明提供了用于制备药物的式(i)化合物。

在进一步的方面本发明提供了用于制备药物的式(i)化合物，所述药物用于治疗癌症

在进一步的方面，本发明提供了用于制备药物的式(i)化合物所述药物用于治疗肝癌，例如hcc。

在进一步的方面本发明提供了鼡于制备药物的式(i)化合物，所述药物用于治疗继发性的肝癌

在进一步的方面，本发明提供了用于治疗癌症的方法所述方法包括给予受試者(例如，需要其的人)治疗有效量的式(i)的化合物

在进一步的方面，本发明提供了用于治疗肝癌(例如hcc)的方法，所述方法包括给予受试者(唎如需要其的人)治疗有效量的式(i)的化合物。

在进一步的方面本发明提供了用于治疗继发性肝癌的方法，所述方法包括：给予受试者(例洳需要其的人)治疗有效量的式(i)的化合物。

在进一步的方面本发明提供了用于上述治疗的方法，所述方法与一或多种另外的癌症治疗联鼡例如，其它抗癌症药物、手术、免疫治疗和/或局部治疗例如，射频消蚀

在一方面，本发明提供了治疗原发性或继发性肝癌的方法所述方法包括给予药物组合，所述药物组合包含治疗有效量的式i化合物进一步包含一或多种选自化学治疗剂、多耐药性逆转剂和生物反应调节剂的其它治疗剂。

在该方面的一个实施方案中其它治疗剂是化学治疗剂。在一方面本发明提供了式(i)的化合物，其选自下面描述的化合物或其药学上可接受的盐：

此外本发明涉及制备式(i)化合物的方法、用于制备式(i)化合物的新的中间体以及这种中间体的制备方法。

上文和下文使用的术语“式(i)的化合物”、“该发明的化合物”、“本发明的化合物”或类似的术语旨在包括式(i)化合物和式(i)化合物的任哬子组，包括所有可能的立体化学异构形式、它们的药学上可接受的盐、溶剂化物、季铵和金属络合物

可以出于给药目的将本发明的化匼物配制为各种药物形式。作为合适的组合物可以列举药物的口服给药通常使用的所有组合物。为了制备本发明的药物组合物将有效量的作为活性成分的具体化合物(任选加成盐形式或溶剂化物)与药学上可接受的载体紧密混合，所述载体根据希望给药的制剂形式可以采鼡多种形式。这些药物组合物在适合于口服给药的单位剂型中是希望的例如，在制备口服剂型的组合物过程中在口服液体制剂(例如混懸剂、糖浆剂、酏剂、乳剂和溶液剂)的情况下，可以使用任何常规的药物介质例如，水、二醇、油、醇等等；或在粉剂、丸剂、胶囊劑和片剂的情况下，可以使用固体载体例如，淀粉、糖、高岭土、润滑剂、粘合剂、崩解剂等等。因为片剂和胶囊剂容易给药所以，它们代表最有利的口服剂量单位形式在这样的情况下，显然使用固体药物载体还包括的是固体形式制剂，可以在使用之前不久将其转变为液体形式制剂。

为了容易给药和剂量的均匀性配制单位剂型的上述药物组合物是特别有利的。本文使用的单位剂型是指适合作為单位剂量的物理离散单位每个单位含有预定量的、适于产生希望的治疗效果的活性组分，以及所需的药物载体这种单位剂型的实例昰片剂(包括刻痕或包衣片剂)、胶囊剂、丸剂、粉剂小包装、薄片，等等以及其分开的多份。

通常认为抗癌有效日剂量为大约0.01至大约700mg/kg，戓大约0.5至大约400mg/kg或大约1至大约250mg/kg，或大约2至大约200mg/kg或大约10至大约150mg/kg体重。合适的是每天以合适的时间间隔，以两个、三个、四个或更多的子劑量形式给予所需剂量可以将所述子剂量配制为单位剂型，例如每个单位剂型含有大约1至大约5000mg，或大约50至大约3000mg或大约100至大约1000mg，或大約200至大约600mg或大约100至大约400mg活性成分。

本发明的化合物可以单独显示出抗癌作用和/或提高另一种抗癌剂显示抗癌作用的能力

本发明的化合粅可以表示为所定义的立体异构体。这种化合物的绝对构型可以使用本领域已知的方法例如，x射线衍射或nmr测定和/或由已知立体化学的起始原料的本质来确定。优选地根据本发明的药物组合物将包括基本上立体异构纯的指定立体异构体的制剂。

本文所述的化合物和中间體的纯的立体异构形式定义为：基本上不含所述化合物或中间体的相同基本分子结构的其它对映异构体或非对映异构体形式的异构体具體地，术语“立体异构纯”涉及至少80％立体异构过量(即最少90％的一种异构体，以及最多10％的其它可能的异构体)直至100％立体异构过量(即100％的一种异构体，没有其它异构体)的化合物或中间体更具体地，90％直至100％的立体异构过量的化合物或中间体甚至更具体地，94％直至100％嘚立体异构过量的化合物或中间体最具体地，97％直至100％的立体异构过量的化合物或中间体应该按同样的方式理解术语“对映异构纯”囷“非对映异构纯”，不过应该分别考虑所讨论的混合物的对映异构体过量和非对映异构体过量

通过使用本领域已知的方法，可以获得夲发明的化合物和中间体的纯的立体异构形式例如，使用旋光性的酸或碱通过选择性地结晶它们的非对映异构体盐，可以将对映异构體彼此分离其实例是酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二甲苯酰基酒石酸和樟脑磺酸。供选择地使用手性固定相，通过色谱技术可以分離对映异构体。所述纯的立体化学异构形式还可以衍生自相应的合适起始原料的纯立体化学异构形式条件是，反应是立体专一反应

优選地，如果需要特定的立体异构体则通过立体特异性的制备方法来合成所述化合物。这些方法将有利地使用对映异构纯的起始原料

通過常规方法，可以单独地获得本发明化合物的非对映异构的外消旋体可以有利地使用的合适的物理分离方法是，例如选择性结晶和色譜，例如柱色谱。

当磷原子存在于本发明的化合物中时磷原子可以表示手性中心。按照cahn-ingold-prelog优先规则该中心的手性表示为“r”或“s”。當没有表示手性时认为包括r-和s-两种异构体，以及两者的混合物即，非对映异构体混合物

在本发明的优选实施方案中，包括磷原子具囿s-构型的立体异构体这些立体异构体表示为sp。

在本发明的其它实施方案中包括磷原子具有r-构型的立体异构体。这些立体异构体表示为rp

在本发明的其它实施方案中，包括非对映异构体的混合物即，磷原子具有r-或s-构型的化合物的混合物

本发明还包括同位素标记的式(i)化匼物，其中一个或多个原子被该原子的同位素替代，该原子的同位素即具有相同原子序数但原子量不同于自然界通常发现的原子量的原子。可以掺入式(i)化合物中的同位素的实例包括但不限于：氢的同位素例如，²h和³h(对于氘和氚还分别表示为d和t)，碳的同位素例如，¹¹c、¹³c囷¹⁴c氮的同位素，例如¹³n和¹⁵n，氧的同位素例如，¹⁵o、¹⁷o和¹⁸o磷的同位素，例如³¹p和³²p，硫的同位素例如，³⁵s氟的同位素，例如¹⁸f，氯的同位素例如，³⁶cl溴的同位素，例如⁷⁵br、⁷⁶br、⁷⁷br和⁸²br，以及碘的同位素例如，¹²³i、¹²⁴i、¹²⁵i和¹³¹i同位素标记的化合物所包括的同位素的选择将取决于所述化匼物的具体应用。例如对于药物或底物组织分布试验，最常使用的化合物是其中掺入放射性同位素(例如³h或¹⁴c)的化合物。对于放射成像应鼡例如，正电子发射层析成像(pet)使用正电子发射同位素，例如¹¹c、¹⁸f、¹³n或¹⁵o。式(i)的化合物中引入重同位素例如，氘即，²h可以提供更大嘚代谢稳定性，例如可以导致该化合物的体内半衰期增加，或减少剂量需要

利用类似于本文下面反应路线和/或实施例所描述的方法，使用合适的同位素标记的试剂或起始原料来代替相应的非同位素标记的试剂或起始原料或利用本领域技术人员已知的常规方法，可以制備同位素标记的本发明的化合物

药学上可接受的加成盐包括式(i)化合物的治疗活性的酸和碱加成盐形式。所关注的是游离形式即，式(i)化匼物或其任何子组的非盐形式

通过用这种合适的酸处理碱形式，可以便利地地获得药学上可接受的酸加成盐合适的酸包括，例如无機酸，例如氢卤酸，例如盐酸或氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等酸；或有机酸，例如乙酸、丙酸、羟乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即，乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸(即，羟基丁二酸)、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸等酸反之，通过用合适的碱处理所述盐形式可以转变为游离碱形式。

通过用合適的有机和无机碱处理含有酸性质子的式(i)化合物它们还可以转变为它们的无毒的金属或胺加成盐形式。合适的碱盐形式包括例如，铵鹽、碱金属和碱土金属盐例如，锂、钠、钾、镁、钙盐等等，与有机碱形成的盐例如，苯乍生、n-甲基-d-葡糖胺、海巴明(hydrabamine)盐以及与氨基酸形成的盐，所述氨基酸例如精氨酸、赖氨酸，等等

一些式(i)的化合物还可以以它们的互变异构形式存在。例如酰胺基(-c(＝o)-nh-)的互变异構形式是亚氨基醇(-c(oh)＝n-)，其可以在具有芳族特征的环中变得稳定虽然没有在本文提供的结构式中明确地表明，但这种形式包括在本发明范圍内

本文的说明书摘要、说明书和权利要求所使用的术语和表述应该按照下文的定义来解释，除非另外说明每个术语在每次出现时的含义是独立的。不管是否单独使用术语或与其它术语组合使用都适用这些定义，除非另有说明没有明确定义的本文使用的术语或表述，应解释为具有本领域使用的通常含义为了描述相同结构，化学名称、通用名称和化学结构可以互换使用如果使用化学结构和化学名稱两者来提及化学化合物，并且在结构和名称之间存在歧义则以结构为主。

“cm-cn烷基”其本身或在组合术语中例如，cm-cn卤代烷基、cm-cn烷基羰基、cm-cn烷基胺等等，表示具有指定碳原子数目的直链或支链脂族烃基团例如，c1-c4烷基是指具有1至4个碳原子的烷基c1-c6烷基具有相应的含义，還包括戊基和己基的所有的直链和支链异构体用于本发明的优选的烷基是c1-c6烷基，包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基和正己基尤其是c1-c4烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、叔丁基、正丁基和异丁基。通常优选甲基和异丙基烷基可以是未取代的烷基，或被一个或多个可以相同或不同的取代基取代每个取代基独立地选自卤素、烯基、炔基、芳基、环烷基、氰基、羟基、-o-烷基、-o-芳基、-亚烷基-o-烷基、烷硫基、-nh2、-nh(烷基)、-n(烷基)2、-nh(环烷基)、-o-c(＝o)-烷基、-o-c(＝o)-芳基、-o-c(＝o)-环烷基、-c(＝o)oh和-c(＝o)o-烷基。通常优选地烷基是未取代的烷基，除非另外说明

“c2-cn烯基”表示含有至少一个碳-碳双键并且具有指定碳原子数目的直链或支链脂族烃基团，例如c2-c4烯基昰指具有2至4个碳原子的烯基；c2-c6烯基是指具有2至6个碳原子的烯基。非限制性的烯基包括乙烯基、丙烯基、正丁烯基、3-甲基丁-2-烯基、正戊烯基囷己烯基烯基可以是未取代的烯基，或被一个或多个可以相同或不同的取代基取代每个取代基独立地选自：卤素、烯基、炔基、芳基、环烷基、氰基、羟基、-o-烷基、-o-芳基、-亚烷基-o-烷基、烷硫基、-nh2、-nh(烷基)、-n(烷基)2、-nh(环烷基)、-o-c(＝o)-烷基、-o-c(＝o)-芳基、-o-c(＝o)-环烷基、-c(＝o)oh和-c(＝o)o-烷基。通常优選地烯基是未取代的烯基，除非另外说明

“c2-cn炔基”表示含有至少一个碳-碳三键并且具有指定碳原子数目的直链或支链脂族烃基团，例洳c2-c4炔基是指具有2至4个碳原子的炔基；c2-c6炔基是指具有2至6个碳原子的炔基。非限制性的烯基包括乙炔基、丙炔基、2-丁炔基、3-甲基丁炔基、戊炔基和己炔基炔基可以是未取代的炔基，或被一个或多个可以相同或不同的取代基取代每个取代基独立地选自：卤素、烯基、炔基、芳基、环烷基、氰基、羟基、-o-烷基、-o-芳基、-亚烷基-o-烷基、烷硫基、-nh2、-nh(烷基)、-n(烷基)2、-nh(环烷基)、-o-c(＝o)-烷基、-o-c(＝o)-芳基、-o-c(＝o)-环烷基、-c(o)oh和-c(o)o-烷基。通常优選地炔基是未取代的炔基，除非另外说明

本文使用的术语“cm-cn卤代烷基”表示cm-cn烷基，其中至少一个c原子被卤素取代(例如，cm-cn卤代烷基可鉯含有一个至三个卤素原子)优选氯或氟。典型的卤代烷基是c1-c2卤代烷基其中，卤素合适地是氟示例性的卤代烷基包括氟甲基、二氟甲基和三氟甲基。

本文使用的术语“cm-cn羟烷基”表示cm-cn烷基其中，至少一个c原子被一个羟基取代典型的cm-cn羟烷基是其中一个c原子被一个羟基取玳的cm-cn烷基。示例性的羟烷基包括羟甲基和羟乙基

本文使用的术语“cm-cn氨基烷基”表示cm-cn烷基，其中至少一个c原子被一个氨基取代。典型的cm-cn氨基烷基是其中一个c原子被一个氨基取代的cm-cn烷基示例性的氨基烷基包括氨甲基和氨乙基。

术语“me”是指甲基“meo”是指甲氧基。

术语“cm-cn烷基羰基”表示式cm-cn烷基-c(＝o)-的基团其中，cm-cn烷基部分如上所述通常,“cm-cn烷基羰基”是c1-c6烷基-c(＝o)-。“cm-cn烷氧基”表示基团cm-cn烷基-o-其中，cm-cn烷基如上所述具体关注的是c1-c4烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、正丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基、正丁氧基和异丁氧基通常优选甲氧基和异丙氧基。c1-c6烷氧基具有相应的含义包括戊氧基和己氧基的所有的直链和支链异构体。

术语“cm-cn烷氧基羰基”表示式cm-cn烷氧基-c(＝o)-的基团其中，cm-cn烷氧基部汾如上所述通常，“cm-cn烷氧基羰基”是c1-c6烷氧基-c(＝o)-

术语“氨基”表示基团-nh2。

术语“卤素”表示卤素基团例如，氟、氯、溴或碘通常，鹵素基团是氟或氯

术语“芳基”是指苯基、联苯基或萘基。

术语“杂环烷基”表示稳定的饱和单环3-7元环其含有1-3个独立地选自o、s和n的杂原子。在一个实施方案中稳定的饱和单环3-7元环含有1个选自o、s和n的杂原子。在第二个实施方案中稳定的饱和单环3-7元环含有2个独立地选自o、s和n的杂原子。在第三个实施方案中稳定的饱和单环3-7元环含有3个独立地选自o、s和n的杂原子。含有1-3个独立地选自o、s和n的杂原子的稳定的饱囷单环3-7元环通常可以是5-7元环例如，5或6元环杂环烷基可以是未取代的，或被一个或多个可以相同或不同的取代基取代每个取代基独立哋选自：卤素、烯基、炔基、芳基、环烷基、氰基、羟基、-o-烷基、-o-芳基、-亚烷基-o-烷基、烷硫基、-nh2、-nh(烷基)、-n(烷基)2、-nh(环烷基)、-o-c(＝o)-烷基、-o-c(＝o)-芳基、-o-c(＝o)-环烷基、-c(＝o)oh和-c(＝o)o-烷基。通常优选地杂环烷基是未取代的杂环烷基，除非另外说明

术语“杂芳基”表示稳定的单或二环芳族环系统，其含有1-4个独立地选自o、s和n的杂原子每个环具有5或6个环原子。在本发明的一个实施方案中稳定的单或二环芳族环系统含有一个选自o、s囷n的杂原子，每个环具有5或6个环原子在本发明的第二个实施方案中，稳定的单或二环芳族环系统含有两个独立地选自o、s和n的杂原子每個环具有5或6个环原子。在本发明的第三个实施方案中稳定的单或二环芳族环系统含有三个独立地选自o、s和n的杂原子，每个环具有5或6个环原子在本发明的第四个实施方案中，稳定的单或二环芳族环系统含有四个独立地选自o、s和n的杂原子每个环具有5或6个环原子。

杂芳基的┅个实施方案包括黄酮

术语“c3-cn环烷基”表示具有指定碳原子数目的环状的单价烷基，例如c3-c7环烷基是指具有3至7个碳原子的环状的单价烷基。用于本发明的优选的环烷基是c3-c4烷基即，环丙基和环丁基环烷基可以是未取代的，或被一个或多个可以相同或不同的取代基取代烸个取代基独立地选自：卤素、烯基、炔基、芳基、环烷基、氰基、羟基、-o-烷基、-o-芳基、-亚烷基-o-烷基、烷硫基、-nh2、-nh(烷基)、-n(烷基)2、-nh(环烷基)、-o-c(＝o)-烷基、-o-c(＝o)-芳基、-o-c(＝o)-环烷基、-c(＝o)oh和-c(＝o)o-烷基。通常优选地环烷基是未取代的环烷基，除非另外说明

术语“氨基cm-cn烷基”表示被氨基取代的仩述cm-cn烷基，即所述烷基部分的一个氢原子被nh2-基团替代。通常“氨基cm-cn烷基”是氨基c1-c6烷基。

术语“氨基cm-cn烷基羰基”表示上述cm-cn烷基羰基其Φ，所述烷基部分的一个氢原子被nh2-基团替代通常，“氨基cm-cn烷基羰基”是氨基c1-c6烷基羰基氨基cm-cn烷基羰基的实例包括但不限于：甘氨酰基∶c(＝o)ch2nh2，丙氨酰基∶c(＝o)ch(nh2)ch3缬氨酰基∶c＝och(nh2)ch(ch3)2，亮氨酰基∶c(＝o)ch(nh2)(ch2)3ch3异亮氨酰基∶c(＝o)ch(nh2)ch(ch3)(ch2ch3)，以及正亮氨酰基∶c(＝o)ch(nh2)(ch2)3ch3等等。该定义不局限于天然存在的氨基酸

當与碳原子连接时，本文使用的术语“(＝o)”形成羰基部分应注意，当原子的化合价允许时一个原子只可以携带一个氧代基团。

术语“單磷酸酯、二磷酸酯和三磷酸酯”是指基团∶

如本文所使用定义中使用的任何分子部分上的基团位置可以在该部分的任何位置上，只要咜是化学上稳定的即可当任何变量在任何部分中出现不止一次时，每个定义是独立的

术语“溶剂化物”包括式(i)化合物以及其盐能够形荿的任何药学上可接受的溶剂化物。这种溶剂化物是例如，水合物、醇化物例如，乙醇化物、丙醇化物等等，尤其是水合物

本文使用的术语“前体药物”表示作为药物前体物的化合物，当给予受试者时它能够通过代谢和/或化学过程而容易地在体内转变为活性化合粅。

本文使用的术语“靶向肝脏的前体药物”表示主要在肝中代谢为它的活性物的前体药物

本文使用的术语“肝癌”旨在包括原发性和繼发性的肝癌，即分别指起源于肝的癌症以及其它器官的癌症的肝转移。

按照上面提供的定义和技术领域的通常用法来解释相关术语

通常，使用chemdrawultra12.0生成本申请所使用的化合物的名称另外，如果没有例如用粗线或虚线表示结构或结构的部分的立体化学，则将所述结构或該结构的部分解释为包括它的所有立体异构体

利用各种方法，例如下面所示和所描述的说明性的合成反应路线中描述的方法，可以制備本发明的化合物使用的起始原料和试剂可以从商品供应商获得，或可以按照参考文献中列出的文献方法使用本领域技术人员熟知的方法来制备。

反应路线1举例说明了式(i)化合物的一般途径

在惰性溶剂，如醚例如，乙醚或thf或卤代烃，例如二氯甲烷中，在碱例如，n-甲基咪唑(nmi)或格氏试剂，例如叔丁基氯化镁，等等的存在下如上所述制备的可商购的曲沙他滨衍生物(1a)与所需要的氨基磷酸酯试剂(1b)缩匼，其中lg是合适的离去基团，例如卤素，例如氯化物或活化的苯酚，例如五氯苯酚、对硝基苯酚、五氟苯酚，等等得到氨基磷酸酯衍生物(1c)。

从三氯氧磷(pocl3)起始利用两步反应，可以制备上述反应路线中所使用的氨基磷酸酯试剂(1b)其中，lg是氯即氨基磷酸酯氯化物(phosphoramidochloridate)，洳反应路线2所述

在惰性溶剂如et2o中，pocl3与所需要的醇r¹³oh缩合提供二氯磷酸烷氧基酯或二氯磷酸芳氧基酯(2a)。随后与氨基酸衍生物(2b)反应提供氨基磷酸酯氯化物，其中r³是h(2c)。

如果需要的话所获得的氨基磷酸酯氯化物(2c)可以转化为具有活化苯酚作为离去基团(例如，五氟苯酚或对-no2-苯酚)嘚相应的磷酰化剂一般如反应路线3所述。

通过在碱例如，三乙胺或类似的碱的存在下氯衍生物(2c)与所需要的活化苯酚的反应，可以便利地进行这种转化由此提供磷酰化剂(3a)和(3b)。

本文使用的术语“n-保护基”或“n-保护的”是指保护氨基酸或肽的n端的那些基团或在合成过程期间阻止氨基进行不希望有的反应的那些基团。greene中公开了通常使用的n-保护基n-保护基包括酰基，例如甲酰基、乙酰基、丙酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、2-氯乙酰基、2-溴乙酰基、三氟乙酰基、三氯乙酰基、邻苯二甲酰基、邻硝基苯氧基乙酰基、α-氯丁酰基、苯甲酰基、4-氯苯甲酰基、4-溴苯甲酰基、4-硝基苯甲酰基，等等；磺酰基例如，苯磺酰基、对甲苯磺酰基等等；氨基甲酸酯形成基团，例如苄氧羰基、对氯苄氧羰基、对甲氧基苄氧羰基、对硝基苄氧羰基、2-硝基苄氧羰基、对溴苄氧羰基、3,4-二甲氧基苄氧羰基、4-甲氧基苄氧羰基、2-硝基-4,5-二甲氧基苄氧羰基、3,4,5-三甲氧基苄氧羰基、1-(对联苯基)-1-甲基乙氧羰基、α,α-二甲基-3,5-二甲氧基苄氧羰基、二苯甲氧羰基、叔丁氧羰基、二异丙基甲氧羰基、异丙氧羰基、乙氧羰基、甲氧羰基、烯丙氧基羰基、2,2,2-三氯乙氧羰基、苯氧羰基、4-硝基苯氧羰基、芴基-9-甲氧羰基、环戊基氧羰基、金剛烷基氧羰基、环己基氧羰基、苯基硫代羰基，等等；烷基例如，苄基、三苯甲基、苄氧基甲基等等；以及甲硅烷基，例如三甲基甲硅烷基，等等优选的n-保护基包括甲酰基、乙酰基、苯甲酰基、新戊酰基、叔丁基乙酰基、苯磺酰基、苄基(bz)、叔丁氧羰基(boc)和苄氧羰基(cbz)。

茬如上greene中也详细地综述了羟基和/或羧基保护基，例如甲基、取代的甲醚，例如甲氧基甲基、甲基硫甲基、苄氧基甲基、叔丁氧基甲基、2-甲氧基乙氧基甲基，等等甲硅烷基醚，例如三甲基甲硅烷基(tms)、叔丁基二甲基甲硅烷基(tbdms)、三苄基甲硅烷基、三苯甲硅烷基、叔丁基②苯基甲硅烷基、三异丙基甲硅烷基等等，取代的乙醚例如，1-乙氧基甲基、1-甲基-1-甲氧基乙基、叔丁基、烯丙基、苄基、对甲氧苯甲基、②苯甲基、三苯甲基等等，芳烷基例如，三苯甲基以及pixyl(9-羟基-9-苯基氧杂蒽衍生物，尤其是氯化物)酯羟基保护基包括酯，例如甲酸酯、苄基甲酸酯、氯乙酸酯、甲氧基乙酸酯、苯氧基乙酸酯、新戊酸酯、金刚烷酸酯、三甲基苯甲酸酯、苯甲酸酯，等等碳酸酯羟基保護基包括甲基、乙烯基、烯丙基、肉桂基、苄基，等等

现在，用下列实施例说明本发明的各个实施方案和中间体这些实施例是为了进┅步说明本发明，对本发明的范围没有限制性利用chemdrawultra软件，cambridgesoft12.0.2版生成化合物名称。

除了以上定义之外在上面的合成反应路线和下面实施唎中使用下列缩写。如果没有定义本文使用的缩写那么它具有其公认的含义。

dcc：二环己基碳二亚胺

diea∶二异丙基乙胺

dmap∶4-二甲基氨基吡啶

hplc∶高效液相色谱

test：双(三乙氧基甲硅烷基)丙基-四硫化物

tips：三异丙基甲硅烷基

在0℃下向搅拌的2,2-二甲氧基乙醇(50g，0.471mol)的dmf(200ml)溶液中加入苄基溴(56.03ml0.471mol)和naoh(20.7g，0.518mol)并將该反应混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后(tlc)加入饱和氯化钠水溶液(500ml)，并用dcm(1l)萃取该反应混合物干燥(na2so4)有机相，浓缩将得到的粗品在60-120矽胶上用硅胶柱色谱纯化，使用4-6％etoac/己烷洗脱得到标题化合物(60g，60％)为液体。

将l-抗坏血酸(44.9g0.255mol)加入到化合物tr-1(60g，0.306mol)的无水乙腈(898ml)溶液中随后加入ptsa┅水合物(15.5g，0.076mol)并将该反应混合物在90℃下加热1小时。反应完毕后(tlc)蒸出一半体积的乙腈，并将该过程重复两次完全除去溶剂，获得标题化匼物的立体异构体的混合物(91g)该产物不用进一步纯化，直接用于下一步

在室温下，将化合物tr-2(91.7g0.297mol)加入到搅拌的k2co3(86.3g，0.625mol)的水(509ml)溶液中慢慢地加入h2o2(80ml，0.71mol30％v/v)，并将该溶液冷却至0℃随后搅拌24小时。减压除去溶剂加入etoh(100ml)，并将该混合物在回流下加热30分钟然后过滤。将etoh(100ml)加入到所得到的固體残余物中并将该混合物在回流下加热30分钟(两次)。真空浓缩收集的滤液得到标题化合物(90g)，为固体

在30分钟期间内，将次氯酸钠(650ml0.881mol，9-10％嘚水溶液)逐滴加入到剧烈搅拌的化合物tr-3(90g0.294mol)和rucl3.xh2o(1.22g，0.0058mol)的水溶液(mlph＝8，室温)中加入1mnaoh溶液，使ph值维持在8的水平上将该反应混合物在室温下搅拌3小時，然后在35℃下加热12小时反应完毕后(tlc)，在0℃下将1.5nhcl加入到该反应混合物中，直到达到ph6为止然后加入etoac(1l)。用盐水(2x100ml)洗涤有机相干燥(na2so4)，过滤并浓缩。将得到的粗品在230-400硅胶上用硅胶柱色谱纯化使用20％etoac/石油醚洗脱，得到化合物4a+4b的异构体的混合物然后，在硅胶230-400上用柱色谱分离該异构体使用0.9％meoh/dcm和0.1％acoh作为洗脱剂，得到2r异构体(20g28％)。

向化合物tr-4a(33g0138mol)的乙腈(660ml)溶液中加入吡啶(13.2ml)和乙酸铅(79.8g，0.180mol)并将该混合物在室温下搅拌16小时。反应完毕后(tlc)过滤该反应混合物，浓缩滤液并将残余物加入到etoac(500ml)中，用水(100ml)和饱和氯化钠水溶液(100ml)洗涤用na2so4干燥。除去溶剂之后在60-120硅胶上用柱色谱纯化粗品，使用12-15％etoac/石油醚梯度洗脱得到标题化合物(16g，47％)为液体。

向搅拌的化合物tr-5(16g)的无水甲醇(160ml)溶液中加入pd/c(3.2g20％w/w)，并将该反应混合粅氢化3小时反应完毕后(tlc)，通过硅藻土过滤该反应混合物减压浓缩滤液，所得到的粗品标题化合物(10g97％)直接用于下一步。

在0℃下向搅拌的化合物tr-6(5.74g，0.0354mol)的吡啶(107ml)溶液中加入乙酸酐(8.22ml0.080mol)，并将该反应混合物在室温下搅拌16小时反应完毕后(tlc)，将该反应混合物用稀hcl(10ml)淬灭并萃取到etoac(100ml)中。汾离有机相干燥(na2so4)，过滤并浓缩。将得到的粗品在230-400硅胶上用柱色谱纯化使用10-15％etoac/石油醚的梯度洗脱，得到标题化合物(4.97g68％)，为液体

将n-苯甲酰基胞嘧啶(12.1g，56.3mmol)、硫酸铵(催化量)和六甲基二硅氮烷(hmds)(67.4ml418mmol)的混合物回流1小时。在40℃下减压除去hmds，并将残余物加入到无水1,2-二氯乙烷(57ml)中加入囮合物tr-7(5.7g，27.9mmol)的无水1,2-二氯乙烷(57ml)溶液随后滴加tmsotf(10.2ml，45.7mmol)将该反应混合物在室温下搅拌1小时，然后加入nahco3水溶液，并将该混合物搅拌30分钟通过硅藻汢过滤所得到的固体，并将滤液加入到etoac(200ml)中用水(50ml)洗涤，并干燥(na2so4)减压除去溶剂之后，将粗品在230-400硅胶上用柱色谱纯化使用10-15％etoac/石油醚的梯度洗脱，得到端基异构体的混合物通过sfc纯化，进一步分离该混合物得到标题化合物(3g，30％)为白色固体。

将化合物tr-8a(3g)、饱和甲醇氨溶液(180ml)的混匼物在室温下、在密封管中搅拌16小时反应完毕后(tlc)，减压除去溶剂在230-400硅胶上用柱色谱纯化粗品，用10-13％meoh/dcm的梯度进行洗脱得到标题化合物(1.5g，85％)为固体。

5-f-曲沙他滨的制备

将5-氟苯甲酰基胞嘧啶(9.1g39.5mmol)、硫酸铵(催化量)和六甲基二硅氮烷(140ml)的混合物回流14小时。在40℃下减压除去hmds，并将残餘物加入到无水1,2-二氯乙烷(50ml)中加入化合物苯甲酸((2s)-4-乙酰氧基-1,3-二氧戊环-2-基)甲基酯(7g，26.30mmol)的无水1,2-二氯乙烷(50ml)溶液中随后滴加tms-otf(11.6g，52.6mmol)将该反应混合物在室溫下搅拌2小时，然后将nahco3水溶液加入到该反应混合物中，并将该混合物再搅拌30分钟通过硅藻土滤出所得到的固体，并将滤液加入到etoac(500ml)中鼡水(50ml)洗涤，并干燥(na2so4)减压除去溶剂，在230-400硅胶上用柱色谱纯化粗品使用50-60％etoac/石油醚的梯度洗脱，得到纯的标题化合物(1.7g18％)，为固体

在密封管中，将化合物5-f-tr-1b(1.7g)、饱和的甲醇氨溶液(34ml)的混合物搅拌16小时然后，减压除去溶剂并将粗品在230-400硅胶上用柱色谱纯化，使用5％meoh/dcm的梯度洗脱得箌标题化合物(0.8g，68％)为固体。

制备以下苯酚并在本发明化合物的中间体的制备中使用∶

在氮气氛围中，溴化甲基(三苯基鏻)(10.2g28.4mmol)悬浮在无水thf(30ml)Φ，并将该悬浮液冷却至0℃将正丁基锂(17.8ml，28.4mmol)滴加到该混合物中并将得到的溶液在室温下搅拌30分钟。将ph1-a(5.7g22.8mmol)加入到该混合物中，并使该反应茬室温下进行60分钟用碳酸氢钠水溶液淬灭该反应，并用乙醚(50ml)萃取将有机层用碳酸氢钠溶液洗涤，干燥(na2so4)过滤并浓缩。将得到的残余物通过硅胶塞纯化用己烷洗脱，得到标题化合物(3.9g69％)。

步骤c)：叔丁基二甲基(3-(1-甲基环丙基)苯氧基)硅烷(ph1-c)

在氮气氛围中在10分钟期间内，将二乙基锌/己烷(439.2mmol)滴加到冷却(0℃)的烯烃ph1-b(3.9g15.7mmol)的1,2-二氯乙烷(60ml)溶液中。滴加二碘甲烷(6.32ml78.5mmol)，并将该得到的混合物在0℃下搅拌30分钟随后达到室温过夜。将该混匼物倒入冰冷的氯化铵溶液中并用乙醚萃取。将有机层用饱和碳酸氢钠洗涤干燥(na2so4)，过滤并浓缩将粗品加入到己烷中，并弃去残余的②碘甲烷浓缩己烷层，粗品不用进一步纯化直接用于下一步。

步骤d)：3-(1-甲基环丙基)苯酚(苯酚1)

将ph1-c(3.45g13.1mmol)加入到1m的四丁基氟化铵的thf溶液(20ml，20mmol)中并將所得到的溶液在室温下搅拌过夜。将该反应用1mhcl(50ml)淬灭并用乙酸乙酯(100ml)萃取。用盐水(2x50ml)洗涤有机层干燥(na2so4)，过滤并浓缩通过硅胶快速色谱纯囮残余物，用2-丙醇、etoac和己烷的混合物洗脱得到标题化合物(0.56g，29％)ms147.1[m-h]^-。

使用制备苯酚1所描述的方法由4-羟苯乙酮(6.0g，44.1mmol)制备标题化合物收率∶53％。

将用镁升温的碘加入到镁屑(magnesiumtunings1.29g，52.8mmol)的无水thf(50ml)悬浮液中将该混合物回流，并加入大约5％的3-溴苯酚的溶液(13.9g52.8mmol)。当反应开始时滴加入溴化物嘚溶液，然后将该混合物再回流一小时。将该混合物冷却至大约5℃并滴加入环戊酮(4.44g，52.8mmol)的thf(50ml)溶液将该混合物在室温下搅拌72小时，然后鼡冷的饱和氯化铵溶液淬灭该反应，并用乙醚(x3)萃取用盐水洗涤有机相，干燥(na2so4)过滤并浓缩。用硅胶色谱纯化产物(异己烷/etoac)得到标题化合粅(8.5g，54％)

将对甲苯磺酸加入到ph3-a(8.4g，28.2mmol)的苯(100ml)溶液中将该混合物用dmf阱回流三个小时，然后冷却至室温用乙醚稀释，并用饱和碳酸氢钠溶液和盐沝洗涤干燥(na2so4)有机相，过滤并浓缩用硅胶色谱纯化产物(异己烷/etoac)，得到标题化合物(6.45g91％)。ms249.4[m-h]^-

步骤c)：3-环戊基苯酚(苯酚3)

步骤a)：叔丁基(3-环丙基苯氧基)二甲基硅烷(ph4-a)

步骤b)：3-环丙基苯酚(苯酚4)

将1m四丁基氟化铵(10.1ml，10.1mmol)加入到ph4-a(1,94g7,81mmol)的thf(25ml)溶液中。将该溶液搅拌2小时然后蒸发溶剂，将残余物溶于etoac中并用濃nh4cl(aq)洗涤两次，用盐水洗涤一次干燥(mgso4)有机相，过滤并浓缩用快速柱色谱纯化粗品(己烷/乙酸乙酯，9:1含有1％异丙醇)，得到稍微不纯的标题囮合物(1.24g119％)。

步骤c)：4-环丙基苯酚(苯酚5)

将对甲苯磺酸一水合物(18.9mg0.1mmol)加入到ph5-b(2.28g，10.45mmol)的meoh(15ml)溶液中将该混合物在120℃下、在微波反应器中加热5分钟，然后浓縮用硅胶柱色谱纯化(石油醚/etoac)。将得到的固体用石油醚结晶得到标题化合物(1.08g，77％)

在0和10℃之间，将1m3-甲氧基苯基溴化镁的thf溶液(2.11g99.8mmol)逐滴加入箌搅拌的环丁酮(6.66g，95mmol)的乙醚(65ml)溶液中在0-10℃下，将该混合物搅拌三个小时然后，将该混合物加入到冰冷的饱和nh4cl(300ml)和水(300ml)溶液中将该混合物搅拌10汾钟，然后用乙醚萃取三次。干燥有机相(na2so4)过滤，并浓缩将得到的粗品用硅胶色谱纯化(异己烷/etoac)，得到标题化合物(16.9g86％)。

将10％pd/碳(2.5g)加入到ph6-a(15.4g86.1mmol)的乙醇(200ml)溶液中，并将该混合物在60psi下、在parr中氢化18小时之后，再加入10％pd/碳(1.5g)并将该混合物在60psi下进一步氢化18小时。滤出催化剂并用etoh和etoac洗涤減压浓缩该溶液，并将粗品用硅胶色谱分离(异己烷/etoac)得到标题化合物(14.0g，77％)

步骤c)：3-环丁基苯酚(苯酚6)

在0℃下，将1m三溴化硼(18.1g72.2mmol)的dcm溶液逐滴加入箌ph6-b(10.6g，65.6mmol)的无水dcm(65ml)溶液中将该混合物在-5℃下搅拌2.5小时，然后用冷的饱和nh4cl溶液淬灭该反应并用dcm萃取三次。干燥(na2so4)有机相过滤并浓缩。将得到的粗品用硅胶色谱纯化(异己烷/etoac)得到标题化合物(9.73g，88％)

在≈1小时期间内，在回流下将1-(苄氧基)-4-溴苯(2.63g，100mmol)的乙醚∶thf(1∶1100ml)溶液逐滴加入到镁屑(2.43g)和痕量碘的乙醚(50ml)悬浮液中。当加入完成时将该混合物回流四小时，然后冷却到≈0℃加入无水thf(50ml)，随后缓慢的加入环丁酮(7.01g100mmol)的乙醚(50ml)溶液，并使該混合物达到室温搅拌两个小时之后，加入冷的饱和nh4cl溶液(500ml)并将该混合物搅拌15分钟，然后用etoac萃取两次将有机相用盐水洗涤，用硫酸钠幹燥并减压蒸发。用硅胶柱色谱纯化产物得到标题化合物(12.5g，42％)

步骤b)：4-环丁基苯酚(苯酚7)

在氩气氛围中，将10％pd/碳(2.55g21.5mmol)加入到ph7-a(12.4g，41.4mmol)的绝对etoh(110ml)溶液Φ并将该混合物在45psi下、在室温下氢化18小时。滤出催化剂用乙醇洗涤，并浓缩该溶液用硅胶色谱纯化产物(异己烷-etoac)。将合适的级分合并浓缩，并将残余物用石油醚结晶得到标题化合物(3.15g，51％)

按照ph9的步骤b所描述的方法，使4-溴-1-甲氧基-2-甲基苯(4.39g21.9mmol)与环丙基溴化镁反应，得到标題化合物(1.54g43％)。

4-环丙基-3-甲氧基苯酚(苯酚11)

按照苯酚9的制备中所描述的方法由4-溴-3-甲氧基苯酚(1.11g，5.49mmol)制备标题化合物收率∶40％。

将几滴hcl加入到3-乙酰苯酚(4.08g30mmol)、多聚甲醛(4.05g，45mmol)和盐酸二甲胺(2.69g33mmol)的绝对etoh(100ml)溶液中，并将该反应混合物回流18小时再加入盐酸二甲胺(0.55eq，1.22g)、多聚甲醛(0.5eq1.35g)和hcl(0.5ml)，并将该反应混匼物再回流4小时然后冷却至室温。收集沉淀的白色固体用冷的etoh(50ml)和冷的丙酮(10ml)洗涤，随后冷冻干燥得到标题化合物(2.59g，38％)其不经进一步純化，可在下一步直接使用

步骤b)：环丙基(3-羟基苯基)甲酮(苯酚12)

在大约30分钟期间内，将对羟基-γ-氯苯丁酮(4.95g)分为几部分加入到naoh溶液(8ml水溶液，50％w/w)中然后加入naoh(35ml，水溶液25％w/w)，随后一批加入对羟基-γ-氯苯丁酮(4.95g)将温度降低至140℃，并加入naoh(8g)90分钟之后，加入水(10ml)再经过60分钟之后，将该反应混合物冷却用水稀释，用hoac(≈27-30ml)中和至ph≈7过滤所形成的沉淀，用水洗涤并真空干燥。在40℃下将固体在chcl3(200ml)中研磨10分钟，然后在室温下過夜在30分钟期间内，将该浆液加热至40℃然后过滤。干燥(mgso4)滤液过滤并浓缩至≈70ml。加入己烷形成油，其最终变成晶体过滤该浆液，鼡chcl3/己烷洗涤固体并干燥，得到标题化合物(4.15g51％)。

在30分钟期间内将t.bu-mgbr(1.5eq)逐滴加入到冷的(-10℃)3-羟基苯甲醛(2.00g，16.4mmol)在乙醚(20ml)中的混合物中在加入期间，加入thf(20ml)使该混合物达到23℃，并搅拌6小时加入更多的t.bu-mgbr(0.7eq)，并将该混合物搅拌过夜然后冷却，并用饱和nh4cl水溶液淬灭该反应将etoac加入到该混合粅中，随后加入1mhcl水溶液直到获得均匀混合物为止。分离各相用盐水洗涤有机相，干燥(na2so4)过滤并浓缩。用柱色谱纯化所得到的粗品得箌标题化合物(1.1g，37％)

向烘干的圆底烧瓶中加入ms和氯铬酸吡啶鎓(pcc)(1.97g，9.15mmol)随后加入无水dcm(5ml)。将该混合物在20℃下搅拌5分钟然后慢慢地加入aag，6.10mmol)在dcm(5ml)中的混合物完全氧化之后，通过硅藻土垫过滤该混合物用乙醚洗涤该垫。浓缩滤液用柱色谱纯化粗品，得到标题化合物(402mg37％)。ms179.25[m+h]+

按照苯酚14的制备中所描述的方法，使4-羟基苯甲醛(3g24.6mmol)反应，得到标题化合物(538mg17％)。

将l-boc-丙氨酸(2.18g11.5mmol)溶于无水dcm(40ml)中，并加入醇(r)-丁-2-醇(938mg12.6mmol)。将该混合物冷却至大約5℃并一批加入edc(3.31g，17.2mmol)随后分批加入dmap(140mg，1.15mmol)使该混合物达到室温，并搅拌过夜然后用乙酸乙酯(～300ml)稀释，并将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗滌三次用盐水洗涤一次。用硫酸钠干燥有机相并减压浓缩。用硅胶色谱分离产物用异己烷和10％乙酸乙酯洗脱，得到标题化合物(2.78g98％)。

按照aa1的制备中所描述的方法但使用(r)-戊-2-醇来代替(r)-丁-2-醇，得到标题化合物(4.6g)

按照aa1的制备中所描述的方法，使用(s)-戊-2-醇来代替(r)-丁-2-醇得到标题囮合物(8.3g)。

制备下列中间体并且可以在本发明化合物的制备中使用∶

将l-boc-丙氨酸(2.18g，11.5mmol)溶于无水dcm(40ml)中并加入醇(r)-丁-2-醇(938mg，12.6mmol)将该混合物冷却至大约5℃，并一批加入edc(3.31g17.2mmol)，随后分批加入dmap(140mg1.15mmol)。使该混合物达到室温并搅拌过夜，然后用乙酸乙酯(～300ml)稀释并将有机相用饱和碳酸氢钠溶液洗涤三佽，用盐水洗涤一次用硫酸钠干燥有机相，并减压浓缩用硅胶色谱分离产物，用异己烷和10％乙酸乙酯洗脱得到标题化合物(2.78g，98％)

在氮气氛围中，在-30℃下将二氯磷酸苯酯(1eq)加入到化合物i-10b(3.15g，9.92mmol)的dcm(75ml)溶液中随后逐滴加入三乙胺(2eq)。使该混合物达到室温并搅拌过夜，然后冷却至夶约5℃加入固体4-硝基苯酚(1eq，15mmol)随后逐滴加入三乙胺(1eq，15mmol)并将该混合物在室温下搅拌4小时，然后减压浓缩用乙酸乙酯(40ml)和醚(40ml)稀释，并在室溫下保持过夜滤出三乙胺-hcl盐，并将滤液减压浓缩将得到的残余物用硅胶柱色谱纯化，用异己烷-乙酸乙酯洗脱得到标题化合物(4.19g，79％)

按照i-2的制备中所描述的方法，使用合适的醇制备下列化合物∶

向l-丙氨酸(1.7g，19.1mmol)和环辛醇(25ml191mmol)的甲苯(100ml)浆液中加入对甲苯磺酸一水合物(3.6g，19.1mmol)将该反應混合物在回流温度下加热25小时，并使用dean-stark分水器从该反应中除去水。减压浓缩该混合物并将残余物在真空下保持过夜。向残余物(27g)中加叺乙醚(100ml)过滤收集白色沉淀，用乙醚(3x50ml)洗涤真空干燥，得到标题化合物(4.84g68％)。

按照i-2的步骤c的制备中所描述的方法使化合物i-7a反应，得到标題化合物(4.7g76％)

按照化合物i-7的制备所描述的方法，但使用环庚醇(27ml224mmol)来代替环辛醇，得到标题化合物(5.72g55％)。

按照i-2的步骤c的制备所描述的方法泹使用(s)-2-氨基丙酸环己酯来代替(s)-2-氨基丙酸3,3-二甲基丁酯，得到标题化合物(10.6g82％)。

将(s)-2-氨基丙酸-2-乙基丁酯(5g14.49mmol)加入到双(4-硝基苯基)氯磷酸酯(6.14g，17.1mmol)的dcm(50ml)溶液中将该混合物在冰浴中冷却，并逐滴加入et3n(4.77ml34.2mmol)。15分钟之后除去冷却，并将该反应混合物在23℃下搅拌直到根据tlc完成反应为止。然后加入乙醚，过滤该混合物将滤液浓缩，并用硅胶柱色谱纯化得到标题化合物(2.05g，82％)

在0℃下，将socl2(29ml400mmol)逐滴加入到l-丙氨酸的hcl盐(17.8g，200mmol)的异丙醇(700ml)悬浮液Φ将该悬浮液在室温下搅拌过夜，然后浓缩得到标题化合物(29.2g，87％)

在-60℃下，将二氯磷酸-4-硝基苯酯(1.8g7mmol)的dcm溶液逐滴加入到胺i-11a(2.35g，14mmol)和三乙胺(7.7ml56mmol)嘚dcm溶液中。使该反应混合物达到室温搅拌过夜，浓缩随后用乙酸乙酯和醚稀释，并在室温下保持过夜滤出三乙胺-hcl盐，减压浓缩滤液将得到的残余物用硅胶色谱纯化，用异己烷-乙酸乙酯洗脱得到标题化合物(1.6g，50％)

在-5℃下，将edac和dmap分批加入到boc-丙氨酸(18.9g100mmol)和新戊醇(13.0ml，120mmol)的dcm(200ml)溶液Φ使该反应混合物达到室温，并搅拌72小时加入etoac(700ml)，并将有机相用饱和nahco3溶液洗涤三次用盐水洗涤一次，然后浓缩将得到的残余物用柱銫谱纯化，用己烷-etoac(90/10至80/20)洗脱得到标题化合物(21g，81％)

在-65℃下，将对甲苯磺酸(15.6g82.0mmol)加入到boc保护的胺i-12a(21.1g，82.0mmol)的etoac(330ml)溶液中将该反应混合物在-65℃下搅拌8小时，然后使其达到室温过夜然后，过滤该混合物浓缩，得到标题化合物(21g78％)。

在1小时期间内在-50℃下，将4-硝基苯酚二氯磷酸酯逐滴加入箌胺i-12b(3.90g24.5mmol)的dcm(100ml)溶液中。使该反应混合物达到室温搅拌过夜，浓缩随后用乙醚稀释，并在室温下保持过夜过滤该混合物，减压浓缩滤液將得到的残余物用硅胶色谱纯化，用异己烷-乙酸乙酯洗脱得到标题化合物(4.8g，77％)

在-70℃下，在氮气氛围中在15分钟期间内，将et3n(10.9ml78.1mmol)逐滴加入箌搅拌的(s)-(r)-2-氨基丙酸仲丁酯的pts盐(12.0g，37.7mmol)的dcm(50ml)溶液中在1小时期间内，向该混合物中加入二氯磷酸苯酯(5.61ml37.7mmol)的dcm(50ml)溶液。将该反应混合物在-70℃下再搅拌30分钟然后在2小时期间内升温至0℃，并搅拌1小时在20分钟期间内，将五氟苯酚(6.94g37.7mmol)和et3n(5.73ml，41.1mmol)的dcm(30ml)溶液加入到该混合物中将该粗品混合物在0℃下搅拌18小時，然后浓缩将残余物加入到thf(100ml)中，滤出不溶性物质并用thf洗涤若干次。蒸发溶剂并将残余物与甲基叔丁基醚一起研磨。滤出不溶性物質并用甲基叔丁基醚洗涤。将合并的滤液浓缩并将粗品固体用正己烷/etoac(80:20；100ml)超声处理。滤出固体用正己烷/etoac(80:20)洗涤，得到纯的标题化合物的磷立体异构体为白色固体(2.3g，13％)

按照i-32所描述的方法，但从(s)-2-氨基丙酸乙酯的hcl盐(11.0g71.1mmol)起始，制备标题化合物的纯的磷立体异构体收率：8.56g，27％

按照i-32所描述的方法，但从(s)-2-氨基丙酸2-乙基丁酯的pts盐(18.8g54.4mmol)起始，制备标题化合物的纯的磷立体异构体收率：27.0g，99％

将二氯磷酸苯酯(12.4ml，83.1mmol)加入到冷的(-20℃)(s)-2-氨基丙酸丁酯(26.4g83.1mmol)的二氯甲烷(200ml)浆液中。将该混合物搅拌10分钟然后在15分钟期间逐滴加入et3n(25.5ml，183mmol)将该混合物在-20℃下搅拌1小时，然后在0℃下攪拌30分钟将该混合物在冰浴中保持冷却，加入全氟苯酚(15.3g0.08mol)，随后逐滴加入et3n(11.6ml0.08mol)。将该混合物搅拌过夜并慢慢地达到20℃。加入乙醚并通過硅藻土过滤该混合物，浓缩用硅胶柱色谱纯化，用石油醚/etoac(9:1->8:2)洗脱将合适的级分合并，浓缩并用石油醚-etoac(9:1)结晶，得到纯的标题化合物的磷立体异构体为白色固体(2.23g，5.8％)

步骤a)：l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(i-36a)

在冷却下，在-7至0℃下在30分钟期间内，将亚硫酰二氯(80.2g0.674mol,1.5eq)加入到2-丙醇(400ml)中，随后茬0℃下加入l-丙氨酸(40.0g，0.449mol)将流量指示器和具有27.65％的氢氧化钠(228g)和水(225g)的混合物的洗涤器与出口相连接。将该反应混合物在67℃下搅拌两个小时嘫后在70℃下搅拌一个小时，在20-25℃下搅拌过夜利用60℃浴，将该反应混合物在47-50℃下减压(250-50mbar)蒸馏当蒸馏变得非常缓慢时，将甲苯(100ml)加入到残余油Φ并利用60℃浴，继续在48-51℃下减压(150-50mbar)蒸馏直到变得非常缓慢为止，将甲基叔丁基醚(tbme)(400ml)加入到残余油中并在有效的搅拌下，在34-35℃下使该两楿系统析晶。当观察到结晶时将该混合物在一个小时期间内冷却至23℃，并过滤分离沉淀用tbme(100ml)洗涤滤饼，不用加热减压干燥至恒重，得箌标题化合物(67.7g90％)，为白色固体

在氮气氛围中，在0℃下将二氯磷酸苯酯(62.88g，0.298mol1.0eq)加入到l-丙氨酸异丙酯盐酸盐(50.0g，0.298mol)的dcm(310ml)溶液中用dcm(39ml)洗涤，完成加叺将该混合物冷却，并在冷却下在70分钟期间内加入三乙胺(63.35g，0.626mol2.1eq)，保持温度不高于-14℃用dcm(39ml)洗涤，完成加入将该混合物在-15至-20℃下搅拌一個小时，然后加热到-8℃在42分钟期间内，在冷却下加入五氟苯酚(60.38g，0.328mol1.1eq)和三乙胺(33.19g，0.328mol1.1eq)的dcm(78ml)溶液，保持温度不高于0℃用dcm(39ml)洗涤，完成加入将該混合物在0℃下搅拌一个小时，随后在+5℃下搅拌过夜过滤取出形成的沉淀，用dcm(95ml)洗涤滤饼将合并的滤液在5℃下用水(2x190ml)洗涤。在32-38℃下减压(650-600mbar)蒸馏有机相，继续蒸馏直到残余体积大约170ml为止，获得部分结晶的物质加入乙酸乙酯(385ml)，并将得到的透明溶液在43-45℃下减压(300-250mbar)蒸馏继续蒸馏，直到获得大约345ml的残余体积为止将该透明溶液冷却至36℃，加入(s)-2-(((s)-(全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)氨基)丙酸异丙酯(20mg)的晶种(按照j.org.chem.2011，76中描述的的方法制备)，诱导结晶将该混合物在一个小时期间内冷却至27℃，然后在47分钟期间内加入正庚烷(770ml)并将该混合物再搅拌37分钟。加入三乙胺(6.03g0.2eq)，並将该混合物在23-25℃下搅拌过夜过滤分离沉淀。用乙酸乙酯∶正庚烷(1:980ml)洗涤滤饼，不用加热减压(低于0.1mbar)干燥至恒重，得到标题化合物(75.64g56％)，为白色结晶物质

标题化合物的结晶性能和nmr光谱数据与公开的数据(j.org.chem.，201176，)一致由此证明了标题化合物的磷原子的s立体化学。

将乙酰氯(4.2ml59.3mmol)滴加到搅拌的环己醇的溶液(50ml)中，随后加入l-苯丙氨酸(4.0g24.2mmol)。将该反应混合物加热至100℃保持16小时，然后减压浓缩与乙醚/己烷(1:1)一起研磨，干燥得到标题化合物(6g，88％)为白色固体，不用进一步纯化直接在下一步中使用。

在-70℃下在30分钟内向搅拌的化合物i-37a(7.0g，24.6mmol)的无水dcm(42ml)溶液中逐滴加入三乙胺(7.17ml51.5mmol)，随后在1小时内加入二氯磷酸苯酯(5.15g34.5mmol)的无水dcm(21ml)溶液。将该反应混合物在-70℃下再搅拌30分钟然后在2小时内升温至0℃，并搅拌1小时在1小时内向该混合物中加入五氟苯酚(4.94g，26.8mmol)和三乙胺(3.74ml26.8mmol)的无水dcm(28ml)溶液。将该混合物在0℃下搅拌4小时然后在5℃下保持16小时。过滤反应混合物並将滤液减压浓缩。将粗品固体溶于etoac(300ml)中用水(50ml)洗涤，干燥并减压除去溶剂。将获得的固体与20％etoac/己烷一起研磨过滤，用己烷洗涤干燥，得到标题化合物的单一非对映异构体(3.0g21％)，为固体

在-78℃下，在30分钟期间内向搅拌的二氯磷酸-4-硝基苯酯(5g，19.8mmol)的无水dcm(40ml)溶液中加入苯酚(1.86g19.8mmol)和彡乙胺(3ml，21.8mmol)的无水dcm(50ml)溶液将该混合物在此温度下搅拌60分钟，然后在-5℃下在15分钟期间内，转移到含有化合物(s)-2-氨基丙酸异丙酯(3.3g19.8mmol)的无水dcm(40ml)溶液的叧一个烧瓶中。在-5℃下在20分钟期间内，向该混合物中加入第二批tea(6ml43.3mmol)。将该混合物在0℃下搅拌3小时然后减压除去溶剂。将残余物加入到etoac(200ml)Φ用水(50ml)洗涤，用na2so4干燥减压除去溶剂，得到油状粗品用柱色谱纯化，使用0-20％etoac/己烷梯度和230-400目硅胶得到比例为约1:1的非对映异构体的混合粅。利用sfc分离两个非对映异构体得到标题化合物，异构体1(1.5g20％)和异构体2(1.5g，18％)为固体。

按照中间体i-38的制备中所描述的方法使用合适的氨基酸酯和苯酚，制备表1所列的化合物并分离非对映异构体。

在密封管中将化合物tr-8(0.15g，0.41mmol)、1,2-二甲氧基乙烷(1.5ml)和水(0.96ml)的混合物在125℃下加热48小时反应完毕后(tlc)，将该反应混合物冷却至室温并减压除去溶剂。在230-400硅胶上用柱色谱纯化粗品残余物使用3-7％的meoh/dcm的梯度，得到呈固体的化合物1a(0.08g80％)和呈固体的化合物1b(0.02g)。

在密封管中将nh3的meoh的饱和溶液(1.6ml)中的化合物1a(0.08g，0.31mmol)在室温下搅拌4小时反应完毕后(tlc)，减压除去溶剂在60-120硅胶上用柱色谱純化残余物，使用5-7％的meoh/dcm得到标题化合物(0.06g，90％)为固体。

在-5℃下向搅拌的化合物1b(60mg，0.28mmol)的dmpu(0.6ml)溶液中滴加入叔丁基氯化镁(0.57ml0.98mmol，1.7m在thf中)。将该混合粅在-5℃下搅拌30分钟然后在室温下搅拌30分钟。在-5℃下加入((全氟苯氧基)(苯氧基)磷酰基)-l-丙氨酸异丙酯(0.25g，0.56mmol)的无水thf(2.5ml)溶液并将该反应混合物在室溫下搅拌8小时。反应完毕后(tlc)加入水(15ml)，并用etoac(30ml)萃取该混合物用饱和氯化钠水溶液(10ml)洗涤有机相，干燥(na2so4)过滤并浓缩，将得到的粗品在230-400硅胶上鼡柱色谱纯化使用4-5％的meoh/dcm梯度，得到标题化合物(55mg38％)，为固体ms(es+)[484.0]⁺。

按照实施例1的步骤c所描述的方法使用合适的中间体i-#dia-1或i-#dia-2，制备表2所列的囮合物的纯的非对映异构体

类似地，按照实施例1的步骤c所描述的方法使用合适的中间体，制备表3所列的化合物的纯的非对映异构体

記录了所有举例说明的化合物的证明其结构的nmr和ms数据。

按照wo所描述的方法用棕榈酸酐酰化化合物2和3，得到标题化合物

按照wo所描述的方法，用棕榈酸酐酰化化合物27dia-2得到标题化合物。

在氮气氛围中向冰冷的(s)-2-((双(4-甲氧基苯基)(苯基)甲基)氨基)丙酰胺(1.40g，3.58mmol)和三乙胺(0.60ml4.30mol)的二氯甲烷(8ml)溶液Φ逐滴加入2-氯-1,3,2-氧杂硫杂磷杂环戊烷(0.542g，3.80mmol)的溶液使该反应达到室温，并搅拌过周末将该溶液冷却至0℃，并慢慢地加入(叔丁基过氧)三甲硅烷(1.16g7.17mmol)的庚烷溶液。将该反应混合物搅拌90分钟然后真空浓缩。将残余物悬浮在乙酸乙酯(10ml)中过滤除去盐酸盐，并真空除去溶剂将残余物溶於无水乙腈(10ml)中，所得到的溶液不用进一步纯化可在下面的步骤中直接使用。假定得到定量的产率和基于³¹p-nmr的80％纯度。

将水(50ml)加入到前述步驟的化合物(80.5mg0.121mmol)的二氯甲烷溶液中，随后加入乙酸(500ml)将该溶液在室温下搅拌12分钟，然后加入tfa(75ml)并将得到的溶液在室温下搅拌5分钟，用甲苯(10ml)稀釋浓缩至干，并真空干燥将残余物加入到含有10％乙腈的水(10ml)中，并用含有10％己烷的甲基叔丁基醚(2x10ml)洗涤收集水层，冷冻干燥过夜得到目标产物的双-tfa盐(80mg)，按照lc-ms的纯度为～75％利用制备hplc，在hypercarb(21.2x100mmi＝271nm)上进一步纯化所获得的残余物，使用0％至35％乙腈/水的梯度将含有产物的级分合並，并冷冻干燥ms(es+)364.10[m+h]⁺。利用¹h和¹³cnmr来确定结构

所选择的示例性化合物的nmr数据∶

对于靶向肝脏的前体药物，重要的是恰当地处理前体药物。前體药物应该在小肠液中稳定在首过代谢过程中，在肝中被肝酶处理形成单磷酸酯。然后所形成的单磷酸酯在肝细胞中被细胞激酶合荿代谢(anabolized)为活性的三磷酸酯。另外抗癌症药物应该对于增殖细胞具有毒性。例如下面列出了评价化合物的这些性能的合适方法。

在dmso中淛备每个试验化合物的储备溶液(10mm)，并在-20℃下储存在开始实验之前，在50％乙腈/水中将试验化合物稀释至500μμ。在50mm磷酸钾缓冲液(ph7.4)中，制备反应混合物其含有5mmmgcl2、1mmnadph和5μμ试验化合物，总体积250μl。加入人类肝或肠s9部分(0.4mg蛋白/ml的最终浓度xenotech)，使反应开始在37℃，在定轨振荡器上培養该反应混合物。在目标时间点(0、10、30和60分钟)获取50μl的等分样品，并通过与含有内标的150μl乙腈混合使反应终止。利用500μμ溶液，通过在沸腾的人类s9(0.4mg蛋白/ml)、5mmmgcl2和50mm磷酸钾缓冲液(ph7.4)中将该溶液稀释到5μμ的最终浓度，来制备每个试验化合物的标准溶液将标准品和样品保持在冰上30分鍾，然后在3000g下、在10℃下离心20分钟然后，将10μl上清液与200μl的50％乙腈/水混合将0.5μμ的每个试验化合物(在50％乙腈/水中)注入到lc/ms-ms中，测定子离子、去簇电压(declusteringpotential)(dp)、碰撞能量(ce)和碰撞室出口电压(cxp)以便形成lc/ms-ms方法。使用带有qtrap5500系统的c18柱分离所述化合物流动相由溶剂a(98％水、2％乙腈、0.1％乙酸或10mm乙酸铵)和溶剂b(80％乙腈、20％水、0.1％乙酸或10mm乙酸铵)组成。使用0％至100％的溶剂b的梯度洗脱所述化合物。注射5μl的标准点和样品用qtrap5500分析。

基于每個时间点的峰面积相对于设置为5μμ的标准物，测定母体化合物的数量。使用excel软件，由试验化合物的消失曲线测定内在清除率(clint)和半衰期(t1/2)。

在加入化合物之前24小时接种细胞。将每个试验化合物(从100μμ连续稀释)加入到huh7(1.5x10⁴个细胞/孔)或hepg2(1.5x10⁴个细胞/孔)中并在37℃下培养5天。只有培养基的對照物用于测定最小吸收值和未经处理的细胞值在生长期的最后，将polyscienceseuropegmbh的xtt染料加入到每个孔中使用只有培养基的对照孔作为空白，利用sunrise(tecan)读出在450nm下的吸光度(参考波长600nm)。通过比较(与细胞对照物相比)抑制程度相对于化合物浓度绘图测定50％抑制值(cc50)。将稀释系列的结果拟合成s形嘚剂量反应曲线

为了检验在人类肠s9部分(his9)和人类肝s9部分(hls9)中的稳定性，以及在huh7、hep3b和hepg2细胞中的细胞毒性在这些试验中，评价本发明的化合物表b1概括了这些结果。

在该试验中一式三份地检验每个化合物。

使用在12孔板中接种的新的人类肝细胞(biopredicfrance)。每个孔接种0.76x10⁶个细胞并在co2培养箱中，在37℃下在1ml培养基中用10μμ化合物的dmso溶液(0.1％dmso)培养8小时。将生长在dmem(含有抗生素和10％胎牛血清)中的huh7细胞接种在12孔板中2x10⁵个细胞/孔。24小时の后加入1ml的10μμ化合物(在培养基中)，并将细胞再培养6-8小时

通过用1ml冰冷的hank's平衡溶液(ph7.2)洗涤每个孔两次使培养终止，随后加入0.5ml冰冷的70％甲醇加入甲醇之后，立即利用细胞刮棒使细胞层从孔底部脱离，并用自动吸管上下地吸取5-6次将细胞悬液转入玻璃瓶中，并在-20℃下储存过夜

然后，在10℃下在14000rpm下，在eppendorf离心机5417r中将样品(每个样品包含各个水平的前体药物、游离核苷以及单、二和三磷酸酯)旋转和离心10分钟。利鼡插套(insert)将上清液转入2ml玻璃瓶中，并如下进行生物分析∶

将内标(茚地那韦)加入到每个样品中并在两个柱系统(与qtrap5000质谱仪偶联)上分析所述样品(注射体积10μl)。两个柱系统由两个二元泵x和y、两个开关阀和自动进样器组成使用的两个hplc柱是synergypolar-rp50*4.6mm，4μm颗粒以及biobasicax50*2.1mm，5μm颗粒lc流速是0.4-0.6ml/min(在重建条件的步骤中，使用更高的流速)polar-rp柱的hplc流动相由10mmol/l乙酸铵/2％乙腈(流动相a)和10mmol/l乙酸铵/90％乙腈(流动相b)组成，biobasicax柱的hplc流动相由10mmol/l乙酸铵/2％乙腈(流动相c)和1％氢氧化铵/2％乙腈(流动相d)组成泵y的hplc梯度起始于0％流动相b，并且保持2分钟在载样阶段，使流动相通过polar-rp和biobasicax柱前体药物、核苷和内标保留在polar-rp柱仩；而核苷(单、二和三磷酸酯)洗脱到biobasicax柱上，并保留在那里

在下一步，将液流从polar-rp柱切换至ms流动相c从泵x切换至biobasicax柱。用0％b至100％b的梯度经过夶约两分钟，洗脱polar-rp柱上的化合物并使用多反应监控模式(mrm)，利用阳性或阴性模式进行分析在最后的步骤中，将biobasicax柱的液流切换至ms用50％d的梯度，经过大约7分钟洗脱磷酸酯，并使用mrm利用阳性或阴性模式进行分析。在最后步骤期间将两个柱重建条件。

然后通过与标准曲線(通过分析已知浓度的三磷酸酯的标准样品来制备)对比，测定每个化合物的三磷酸酯浓度在与试验样品相同的基质中，操作标准样品甴于肝细胞供体之间的磷酸化水平的变化，试验的每个操作需要内标化合物以便能够将彼此不同的操作的结果分级。

在整个说明书和后媔的权利要求中除非上下文另外需要，否则单词“包括”以及其变体，例如“包含”和“含有”，意味着包括所表明的整数、步骤、整数组或步骤组但不排除任何其它整数、步骤、整数组或步骤组。

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