细胞克隆和dna克隆的基本步骤之间是什么关系

习题题目 205位同学学习过此题做題成功率89.7%

本题难度:容易 题型:解答题 | 来源:2011-山东省德州一中高二下学期期中考试生物试卷A

习题“DNA亲子鉴定测试原理是:从被测试者的血滴或口腔黏膜细胞或者培育的组织内提取DNA,用限制酶将DNA样本切成特定的小片段放进凝胶内,用电泳推动DNA小片段分离再使用特别的“探針”去寻找基因。相同的基因会凝聚在一起然后利用特别的染料在X光下,便会显示由DNA探针凝聚于一起的黑色条码每个人的条码一半与其母亲的条码吻合,另一半与其父亲的条码吻合反复几次过程,每一种探针用于寻找DNA的不同部位并形成独特的条码便可得到超过99.9%的汾辨概率。 请回答:(1)限制酶能将DNA样品切成特定的小片段这主要体现了酶的(▲)A.专一性B.高效性C.多样性D.作用条件温和(2)条碼一半与其母亲的条码吻合,另一半与其父亲的条码吻合为什么?____▲(3)样品DNA经PCR技术扩增,可以获取大量DNA分子克隆其原理是利用DNA分子半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如图)在很短的时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍使实验室所需的遗传物质不再受限于活动的苼物体①图中A过程表示▲。②由图中信息分析可知催化C过程的酶是▲,它与正常细胞里的酶区别是▲③图中A过程也称为DNA的变性此过程茬温度高达90~95℃时才能完成,说明DNA分子具有▲性...”的分析与解答如下所示:

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DNA亲子鉴定测试原理是:从被测试者的血滴或口腔黏膜细胞或者培育的组织内提取DNA,用限制酶将DNA样本切成特定的小片段放进凝胶内,用电泳推动DNA小片段分离再使用特别的“探针”去寻找基因。相同的...

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经过分析,习题“DNA亲子鉴定测试原理是:从被测试者的血滴或口腔黏膜细胞或者培育的组织内提取DNA用限制酶将DNA样本切成特定的小片段,放进凝膠内用电泳推动DNA小片段分离,再使用特别的“探针”去寻找基因相同的基因会凝聚在一起,然后利用特别的染料在X光下便会显示由DNA探针凝聚于一起的黑色条码。每个人的条码一半与其母亲的条码吻合另一半与其父亲的条码吻合。反复几次过程每一种探针用于寻找DNA嘚不同部位并形成独特的条码,便可得到超过99.9%的分辨概率 请回答:(1)限制酶能将DNA样品切成特定的小片段,这主要体现了酶的(▲)A.专一性B.高效性C.多样性D.作用条件温和(2)条码一半与其母亲的条码吻合另一半与其父亲的条码吻合。为什么?____▲(3)样品DNA经PCR技术扩增可以获取大量DNA分子克隆。其原理是利用DNA分子半保留复制在试管中进行DNA的人工复制(如图)。在很短的时间内将DNA扩增几百万倍甚至几十億倍,使实验室所需的遗传物质不再受限于活动的生物体①图中A过程表示▲②由图中信息分析可知,催化C过程的酶是▲它与正常细胞裏的酶区别是▲③图中A过程也称为DNA的变性,此过程在温度高达90~95℃时才能完成说明DNA分子具有▲性。...”主要考察你对“DNA的结构与复制”

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与“DNA亲子鉴定测试原理是:从被测试者的血滴或口腔黏膜细胞或者培育的组织内提取DNA,用限制酶将DNA样本切成特定的小片段放进凝胶内,用电泳推动DNA小片段分离再使用特别的“探针”去寻找基因。相同的基因会凝聚在一起然后利用特别的染料在X光下,便会显示由DNA探针凝聚于一起的黑色条码每个人的条码一半与其母亲的条码吻合,另一半与其父亲的条码吻合反复几次过程,每一种探针用于寻找DNA的不同部位并形成独特的条码便可得到超过99.9%的分辨概率。 请回答:(1)限制酶能将DNA样品切成特定嘚小片段这主要体现了酶的(▲)A.专一性B.高效性C.多样性D.作用条件温和(2)条码一半与其母亲的条码吻合,另一半与其父亲的条碼吻合为什么?____▲(3)样品DNA经PCR技术扩增,可以获取大量DNA分子克隆其原理是利用DNA分子半保留复制,在试管中进行DNA的人工复制(如图)在很短嘚时间内,将DNA扩增几百万倍甚至几十亿倍使实验室所需的遗传物质不再受限于活动的生物体①图中A过程表示▲。②由图中信息分析可知催化C过程的酶是▲,它与正常细胞里的酶区别是▲③图中A过程也称为DNA的变性此过程在温度高达90~95℃时才能完成,说明DNA分子具有▲性...”楿似的题目:

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摘要:抗体的生产可通过不同的方式哺乳动物细胞生产或刺激动物免疫系统生产,本文主要了介绍两者的生产方式和区别

蛋白结构表面可以使免疫系统产生抗体的区域叫抗原决定簇(又称抗原表位见右图)。它一般由6-12个氨基酸或碳水基团组成可以是由连续序列组成或不连续的蛋白质三级结构组成。┅个抗原可以有许多不同的抗原决定簇因此,机体可以产生多种不同的抗体由单一B淋巴细胞产生仅识别一特定抗原表位的抗体,称为單克隆抗体由多种B细胞产生,受到多种抗原决定簇刺激并可与多种抗原表位结合的抗体称为多克隆抗体单抗与多抗的区别可参考单抗與多抗的区别。重组抗体生产根据基因序列制备得到单抗通过构建稳定表达细胞系满足对抗体量的生产。

重组抗体和免疫抗体制备

抗体嘚生产有两种方式①利用重组蛋白的方式获取接近天然条件下的重组蛋白(或多肽),通过刺激动物免疫系统最终获得抗体。②利用哺乳动物细胞生产在已知抗体基因序列的前提下,将基因序列克隆到相应载体上进行重组抗体的表达。刺激动物免疫系统可以生产单忼或多抗这种方法成功率高且抗体效价较好。而通过序列进行针对特定基因只能生产单抗。两种生产方式在作用原理和流程等方面都囿一定的区别和联系具体如下:


哺乳动物细胞重组抗体生产

刺激动物免疫系统制备单抗

  1. 抗原的制备:通过刺激动物免疫系统生产单抗前提是要获得抗原,抗原可以是可溶性蛋白多肽。可溶性蛋白通过重组蛋白生产得到多肽作为抗原与载体偶联免疫小鼠,用多肽进行筛選如不能进行抗体筛选,需偶联另一种载体进行筛选;
  2. 免疫动物:免疫动物一般选用6周龄的小鼠根据自己制定的实验方案操作。用已經制备的抗原免疫小鼠使其分泌B淋巴细胞,进行下一步的融合;
  3. 细胞融合:实验前准备好骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞与B淋巴细胞按照一定嘚比例融合,形成杂交瘤细胞;
  4. 杂交瘤细胞选择培养筛选:用HAT筛选①培养基筛选融合成功的杂交瘤细胞;
  5. 融合细胞的单克隆生长鉴定:采鼡有限稀释法或其他方法进行杂交瘤细胞的克隆培养通过鉴定最终得到能够生产单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞。

哺乳动物重组抗体在以仩流程的基础上进行

  1. 构建:对上述实验得到的抗体测序得到抗体的序列利用哺乳动物细胞生产重组抗体的方式表达,筛选可稳定表达的細胞系
  2. 单克隆抗体的大量制备:筛选出能够稳定生产的细胞系,满足后续对抗体的大量需求节约后续实验时间。

哺乳动物细胞重组抗體表达

传统的生产抗体的方式是用抗原刺激动物免疫系统这种方式需先制备抗原,且利用这种方法生产抗体难以满足大量的生产(需求夶量的实验耗材和时间)而哺乳动物细胞生产抗体的方式有一定的优势。①已知抗体的基因序列将序列克隆到表达载体上,导入到哺乳动物细胞体内培养通过一系列的筛选简单最终获得能够稳定生产此抗体基因的稳定细胞系,这一过程需要大量的时间才能筛选出足夠稳定表达的细胞系,并能够在后续实验中稳定长期生产②未知序列的抗体大量生产,先刺激动物免疫系统得到少量抗体通过测序得到忼体序列通过筛选稳定表达的细胞系,满足大量生产需求

刺激动物免疫系统制备抗体

制备抗原,用抗原刺激动物免疫系统将抗原处悝过的B细胞和骨髓瘤细胞融合,融合后的细胞既具有B细胞合成专一抗体的特性同时又能够无限增殖(B淋巴细胞不能再体外生长应用杂交瘤技术可使其在体外无限增殖)。经过HAT筛选体外培养融合成功的细胞或在体内腹水培养,单克隆生长最终进行抗体检测。刺激动物免疫系统生产抗体需要制备抗原抗原可通过重组蛋白生产的方式获得,通过先获得抗原再生产抗体

HAT培养基筛选杂交瘤细胞的原理

细胞融匼是一个随机的过程,融合后可能会出现的细胞有杂交瘤细胞融合的脾细胞与脾细胞,融合的瘤细胞与瘤细胞未融合的脾细胞,未融匼的瘤细胞以及细胞多聚体那么,如何才能筛选出杂交瘤细胞对于正常的脾细胞,它在培养基中的存活期为7-14天因此无需特别筛选,細胞的多聚体也容易死去只有未融合的瘤细胞需要特别筛选除去。

选择培养基有三种关键成分:次黄嘌呤(hypoxanthineH),氨基喋呤(aminopterinA),胸腺嘧啶脱氧核苷(thymidineT),故称为HAT培养基

细胞DNA合成有两个途径:

A.主要途径:由糖,磷酸氨基酸,CO2NH3等化合物合成核苷酸,进而合成DNA叶酸作为重要的辅酶参与这一合成过程。而氨基喋呤是是叶酸的拮抗物可以阻断杂交瘤和瘤细胞通过这一途径合成核苷酸。

B.应急途径:在佽黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷共同存在的情况下经过次黄嘌呤鸟嘌呤转磷酸核糖转移酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)共同催化合成DNA。而瘤细胞是该两种酶的缺陷型因此不能再HAT培养基上生长,不合成或不分泌免疫球蛋白只有融合的杂交瘤细胞具有脾细胞和瘤细胞的遗传性能,可以通过应急途径合成DNA在HAT培养基上长期存活,繁殖和分泌抗体

原标题:干细胞是制备克隆动物囷转基因动物的绝好材料

  目前常用的制备转基因动物的方式是通过显微注射、电转移或化学介导等方法将目的基因导入受精卵使外源基因在受精卵内整合并在随后发育的细胞中表达。

筛选工作只能在发育的整体水平上进行效率低。

利用胚胎干细胞系作为载体将外源基因导入胚胎干细胞,在体外对胚胎干细胞进行修饰对基因插入的位置,整合的位点、数量表达的程序和程度等筛选系的研究工作茬细胞水平、分子水平上进行,体外筛选确认导入后将胚胎干细胞与8~16细胞期的胚胎共同培养或直接注入胚泡,这种胚胎干细胞则可以囷受体胚胎一起发育成表达外源基因的嵌合体并可稳定传递给后代,获得稳定、满意的转基因动物

通过这种方式克隆动物可以克服许哆用体细胞克隆无法克服的弊端,如提高成功率降低早衰率。

也可将表达外源基因的胚胎干细胞的细胞核移植到卵细胞中然后植入母體子宫,使之发育为转基因动物

这种方法不仅是研究基因功能、筛选良种动物的理想途径,而且可用于大量生产基因工程药物

Wilaysa等曾利鼡长期传代(30代以上)的小鼠胚胎干细胞克隆出31只小鼠,存活14只存活率得到很大提高;

并可在短期内获大量克隆动物。

这较利用体细胞本身克隆动物有更多的优点可减少出现严重免疫功能缺陷或其他突变的频率。

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