蛋白胨10g ，牛肉膏15g ，NACL15g ，蒸馏水1000ml ，琼脂18g 。 调节PH7.2,0.1MPA20min 灭菌。如果用液体做培养基，则去掉琼脂即可。100 mL/组，其中20 mL液体培养基/250 mL△中（内装玻璃珠10颗）；50 mL固体斜面培养基分装在试管中：5mL/支，10支。或是 （J-琼脂培养基： 胰蛋白胨5g,酵母膏15g,
1、 试剂：3-10%过氧化氢
2、 接种与培养：一般将测试菌种接种于肉汤琼脂斜面上，30度下培养1-2天。
3、 试验方法：取一干净载玻片，在上面加一滴3-10%的双氧水，挑取1环1-2天的的菌苔，在双氧水溶液中涂抹，如有气泡出现（O2），作为过氧化氢酶阳性，无泡为阴性。也可以将过氧化氢液直接加入斜面上，观察气泡的产生。
2、 接种与观察：用一小环的肉汤菌液，穿刺接种到上述培养基中（穿刺管底），一般与30 度 培养3-7天观察结果。若芽孢杆菌在琼脂柱表面生长为好氧菌，沿穿刺线生长则为厌氧菌。
四、 酪素水解（用于检测不同种类的芽孢杆菌是否具有分解酪素的特点）
（1） 脱脂牛奶制备 取新鲜牛奶，煮沸后去掉上层油脂，再经离心脱脂（3000r/min,10min）,除去上层油脂，即为脱脂牛奶。
（2） 牛奶平板的制备 取50ml的脱脂牛奶放入一只三角瓶中，另外称1.5g琼脂置于含有50ml蒸馏水的另外3只三角瓶中，然后将两液分开灭菌，0.06Mpa-20min，带冷至45-50摄氏度时，速将两液混匀倒平板，即为牛奶平板。将平板倒置过夜，使表面水分干燥。
将测试菌种以三点法点接在牛奶平板上，一般于30度培养1,3,5,7和14天，如菌落周围和下面呈透明，表明酪素已被分解。
1.2 肉汤（NA）培养基（营养琼脂）：蛋白胨10g/L 牛肉膏3-5g/L NaCl5g/L PH7.2—7.4（保存计数或分离纯化用） 营养琼脂：麦芽汁培养基=1：1混合使用，菌落不易扩散，形态特征典型
1.5产蛋白酶菌株筛选培养基
1.5.1酪素培养基：
2.1.5.1.2牛肉膏3g/L或酵母浸粉5g/L 酪素10g/L NaCl 4-5g/L PH7.2—7.4 先将酪素用少量2%氢氧化钠润湿，玻棒搅动，再加适量的蒸馏水，在沸水浴中加热搅拌至完全溶解（10-15min），补足1000mL蒸馏水，加入其他成分，调PH分装灭菌。
4℅酪素母液制备：4g酪素溶解于0.1N的30-35mL的氢氧化钠溶液中，水浴溶解20min，溶解完毕后加入60-70℃热水定溶到100mL.200mL培养基加20mL. ★★2.1.5.2脱脂奶培养基：
将脱脂奶（粉）加水溶解制成10℅溶液，于115℃加热灭菌20-30min，与牛膏蛋白胨固体培养基1：9混合均匀倒平板。
2.1.6纤维素产生菌培养基：
2.1.7促芽胞形成培养基：
2.1.8产蛋白酶发酵培养基：
2.1.9产淀粉酶发酵培养基：
2.2分离纯化（或复壮）
2.2.1冻干管的活化及菌种复壮 ：
活化：用无菌吸管吸取0.5mL无菌水滴入安管中，轻荡使干菌体溶解成菌悬液， 做梯度稀释后取0.1-0.2mL涂布或直接划线于肉汤（麦芽汁）培养基平皿，或转 接于斜面（活化）37℃ 24-36h。
复壮：挑取选择生长快，菌落大的菌落于4.5mL无菌水试管中，振荡摇匀后置于 80℃水浴加热15-20min，梯度稀释后涂布于促芽胞形成培养基平皿或蘸取菌悬 液直接划线，37℃ 24h。反复二至三次，选取平皿上菌落大而且生长快的菌落转 接于斜面37℃ 18-20h，4℃冰箱保存。
2.2.2商品微生物制剂中菌种选育
1g（1mL）商品制剂加入99mL无菌（生理盐）水/250mL三角瓶（带玻璃珠），置 于摇床振荡20-30min，80-85℃水浴加热15-20min，进行梯度稀释成10-3、10-4、 10-5、10-6、10-7，根据活菌含量选取两至三个梯度进行混菌或涂布35℃-37℃ 24 h，挑取一环生长快，菌落大的不同典型菌落分别转接5mL无菌水试管中，混合 器混合5-10min，做成菌悬液梯度稀释后混菌或涂布，或直接蘸取菌悬液直接划 线，37℃ 18-20h。结合镜检直到菌落大小基本一致，转接于斜面37℃ 18-20h， 于4℃冰箱保存。或将梯度菌液1mL加入平板，然后分别注入淀粉和酪素培养基 中，30-37℃ 24-48h，挑取D/d大的（淀粉培养基加碘液，观察透明圈）转接于 斜面备用或用划线法进行纯化。并通过染色镜检观察，从菌落形态和细胞形态进行鉴别。
150-200r/min振荡24h，染色镜检，连续两至三次培养备用。或取1g底泥（土）置于20mL肉汤培养基/250mL三角瓶，八层纱布封口，75℃-80℃水浴处理15-20min，然后150-200r/min振荡24h。镜检形成芽孢情况，挑取具有芽孢的菌落进行划线纯化培养，获得单菌落。
取富集菌液置于75℃-80℃水浴15-20min，梯度稀释10-3、10-4、10-5、10-6、10-7，选择三个合适的梯度混菌或涂布于营养琼脂麦芽汁培养基或直接涂布于酪素培养基上初筛，也可划线分离（划线法先将平板置于30℃（24-48 h）或37℃（18-24h），无菌检查，表面冷凝水干燥）。每个梯度二个平皿，将平板倒置，于35℃-37℃ 24-48h。对长出的单菌落进行编号，选择生长快、菌落大，表面干燥，粗糙，不透明的菌落转接于斜面备。挑取少许菌苔涂片，做芽胞染色判断是否为芽孢杆菌。
