求大神相助~丙烯和2-丁烯哪个亲电反应活性大，为什么，什么叫亲电反应活性！？_百度知道
求大神相助~丙烯和2-丁烯哪个亲电反应活性大，为什么，什么叫亲电反应活性！？
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龙聚缘客知道合伙人
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参与团队：
烯烃的亲电加成反应，会形成碳正离子中间体，那么形成的碳正离子越稳定，反应越容易进行。那么原来的那么烯烃的活性相比之下就高一点。丙烯与硫酸中的氢离子形成的是二级碳正离子，2—丁烯形成的是三级碳正离子，而三级碳正离子比二级碳正离子稳定，所以2—丁烯的反应活性比丙烯高。
亲电反应活性就好是发生反应难易程度
那乙烯，一溴乙烯，一氯乙烯，1.2-二氯乙烯的反应活性又怎么比较？！
喂！采纳了就不理了啊
乙烯&溴乙烯&氯乙烯&1,2-二氯乙烯因为亲电试剂在进攻双键时,电子云密度越高,越容易进行,卤素是吸电子原子,而且原子半径越小,吸电子能力越强,双键碳上连得卤素原子越多,电子云密度越低,反应活性就越低.
没有啊，电脑坏了，正在到处休
现在还用手机上网
哦哦，谢谢啊
不客气，都还在用手机的
嗯嗯，再问一个可好
你在百度上发问我第一时间回答
都一样啊，在上面回答人多，相互验证
快去！！！！
麻烦看下D，如果可以能不能帮我把过程写在纸上出来，发给我一下，谢谢
C6H5-CH2CH2OH
产物就是它
额。。。不好意思，可能又要打扰你了
第四个，为什么把羧基和氢放在纵向，而不是羧基和乙基？也不是羧基和溴呢？
只要构型一样
怎么放都可以
老师说要满足主链竖向排列，并使主要官能团向上端
就有些迷茫了
横变竖不变
什么横竖不变就可以了？！不管官能团，不管主碳链！？只要位置正确，怎么摆都可以！？
氢原子 在横向上
我就问费希尔投影式
谢谢!今天才看到
k4u2nv知道合伙人
来自科学教育类芝麻团
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参与团队：
亲电反应是和正离子物种的反应。 例如与H正离子的反应。 在烯烃中很多涉及的是H-X与烯烃的加成， 也称为亲电加成。 亲电取代多涉及的是芳香环上的傅克反应。判断丙烯和2-丁烯的亲电活性哪个大， 主要看哪个的双键上的电子密度高。显然， 2-丁烯有两个甲基给电子， 而丙烯只有一个， 因此前者的亲电活性高。但是， 丙烯的位阻小， 末端双键更容易和H正离子加成。 从反应动力学上讲， 丙烯的反应活性高。
那乙烯，一溴乙烯，一氯乙烯，1.2-二氯乙烯的反应活性又怎么比较？！
取代卤素越多， 活性越低， 溴取代的又低于氯取代的
含有卤素的乙烯有P-π共轭，使结构更稳定，更易反应，这样理解哪错了呢？
虽然你的提问有些 too simple， 我还是愿意把问题说清楚：请搞清楚什么是亲电加成。然后要知道在这里反应活性和结构的稳定性是不可以混为一谈的。亲电反应中决定反应速率步是双键向H正离子的电子转移。亲电加成的反应点上的电子密度越高， 反应活性越高。 链接有卤素后， 因为卤素的吸电子效应， 使反应点上电子密度降低， 因此比不取代时的活性降低！另外需要提醒你的是：提问不要不懂装懂， 接受知识时不要一知半解。
哦哦，谢谢啊
你~脾气貌似不太好哎~
Sorry about it. But I don't like those who take a wrong answer as a right one.What you chose will mislead others too!
额。。。我也很抱歉啦，理解能力是抱歉了点点，体谅一下啦
如果可以，请帮我看一下这个问题
碳正离子是一个接近正四面体的构型，因此两个乙烯基不是处于一个平面上， 各自之间的角度按正四面体计算。乙烯基的H与双键可以共一平面， 但与碳正离子不是一个平面。
即便碳正离子近似正四面体，碳正离子上的氢和碳正离子形成的σ键经过碳正离子和其中一个乙烯基的第一个碳的旋转，总能和π键处于一个平面吧。可以形成σ-π超共轭么？！（如果又没理解你的意思，别骂太狠哈）
可以指点一下么
百度上说的碳正离子是平面结构
在上述结构中，各个基团即便不是处于一个平面上， 也可以形成sigma-pai 共轭。即，碳正离子的空轨道使双键pai电子向其移动， 从而也使C-H键的电子向双键移动。（真不明白， 药学不学有机合成和有机官能团的特性与反应， 学这么多的物理有机有什么用？）对， 碳负离子是正四面体构型。
用气球做模型，三个气球、一支笔芯代表SP2杂化。笔芯代表P轨道，气球代表碳的轨道，氢省略。（我只摆出一个碳正离子和一个乙烯基的构型，应该可以说明问题了）。当旋转碳正离子和乙烯基之间的碳碳单键，碳正离子上的碳氢键（蓝色气球）可以和两个P轨道（红蓝笔芯）平行，却无法与两个P轨道形成的π键共平面，这么理解对么？
第一张图旋转180度
拜托啦，看下
真的有点急
根据超共轭概念，C-Hσ键是要求C为SP3杂化，所以从一开始，概念不清，我就错了。所以~，这题算是决绝了，虽然还是没有弄清楚原理。很谢谢你不厌其烦的解释，
首先，甲苯的溴化是亲电取代反应，即，Br正离子首先与苯环双键作用。也就是说，负电荷密度大的位置越容易反应。 甲基是给电子取代基，其诱导效应使邻对位电荷密度增加。因此邻对位的活性高。因为其给电子效应，因此比苯的活性高。
为什么邻位对位电荷密度增加，间位不增加呢？
为什么邻位对位电荷密度增加，间位不增加呢？
这在有机化学上 称为交替规则。在甲苯的情况下，甲基上的电子云通过共轭向苯环上转移。甲基碳上视在地有小量负电荷， 相邻C则视在地为正，邻位视在为负，间位为正，依次对味为负。这也是通过量子化学计算的结果。故交替规则可以定性地判断很多共轭体系各个C上的电荷密度。
谢谢very much!
有机化学！帮忙看下前面有错没有，然后最后一个怎么写！？
前面三题都对， 最稳定的碳正离子进行取代。最后一题的反应见图， 在酸性条件下， 产物苯乙醇还会发生消除， 生成苯乙烯：
图~在哪呢？
可能这个题目太长了，你重新发一个问题给我。
最后一个的过程
你怎么睡那么晚
还是没图啊
还有这两个题，第一个觉得不太对，第二个没太明白，有2，3-三甲苯吗？
告诉你， 重新提一个问题给我， 我再发给你！！！
上面那个可以吗？！😥
先发第一个
简直是无语了！！， 你看不到图可能因为该答案太长了， 让你重新提问， 将你的问题提过来， 我再给你发图！
最开始那个：苯和CH2-CH2-O（环状，我不知道叫什么）在ALCL3条件下生成什么？然后生成物在水的条件下又会生成什么。如果又理解错了，我再发一次，你别生气哈。生气多了，真的不好。不好意思哈
你要是忙其他事，等你有空再看也行
额。。。不好意思，可能又要打扰你了
第四个，为什么把羧基和氢放在纵向，而不是羧基和乙基？也不是羧基和溴呢？
你最好重新发一个向我求助的问题。光翻页都花不少时间。况且都不知道你的是什么问题。如果是立体化学，与纵向横向没有关系，只与各个取代基的立体位置有关。第四个是S构型。
我能加你么，我不太会用百度知道，有些消息发给你，不知道你收到没有
Yes, u can . But add to what?
QQ，那个比较好发图片
我说的QQ，因为这个信息有时候看不见，就比如说这个，我是现在才看到的
所以，，，方便给你的QQ号吗？我保证，没事不打扰你
我很少用QQ，sorry
小艾了3知道合伙人
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擅长：暂未定制
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我们会通过消息、邮箱等方式尽快将举报结果通知您。3-ARYL-6-ARYL-[1,2,4]TRIAZOLO[4,3-B]PYRIDAZINE AS CELL PROLIFERATION INHIBITING AGENT AND USE THEREOF
WIPO Patent Application WO/
Provided is a novel 3-aryl-6-aryl-[1,2,4]triazolo[4,3-b]pyridazine represented by Formula I, wherein Ar1, Ar2, and R1-R2 are as defined herein. The compound of Formula I is a cell proliferation inhibiting agent. Therefore, the compound of the present invention is useful for treatment of diseases caused by uncontrolled abnormal cell growth and spreading.
Inventors:
CAI, Suixiong (Floor 9, 10 Xinghuo RoadNanjing, Jiangsu 1, 210061, CN)
蔡遂雄 (中国江苏省南京市星火路10号9楼, Jiangsu 1, 210061, CN)
TIAN, Edward, Ye (Floor 9, 10 Xinghuo RoadNanjing, Jiangsu 1, 210061, CN)
田野 (中国江苏省南京市星火路10号9楼, Jiangsu 1, 210061, CN)
DONG, Haijun (No. 261, 1357 Huqingping Road, Shanghai 2, 201702, CN)
董海军 (中国上海市沪青平公路号, Shanghai 2, 201702, CN)
YU, Zenghui (Floor 9, 10 Xinghuo RoadNanjing, Jiangsu 1, 210061, CN)
余增辉 (中国江苏省南京市星火路10号9楼, Jiangsu 1, 210061, CN)
Application Number:
Publication Date:
07/19/2012
Filing Date:
01/06/2012
Export Citation:
IMPACT THERAPEUTICS, INC. (Floor 9, 10 Xinghuo RoadNanjing, Jiangsu 1, 210061, CN)
南京英派药业有限公司 (中国江苏省南京市星火路10号9楼, Jiangsu 1, 210061, CN)
CAI, Suixiong (Floor 9, 10 Xinghuo RoadNanjing, Jiangsu 1, 210061, CN)
蔡遂雄 (中国江苏省南京市星火路10号9楼, Jiangsu 1, 210061, CN)
TIAN, Edward, Ye (Floor 9, 10 Xinghuo RoadNanjing, Jiangsu 1, 210061, CN)
田野 (中国江苏省南京市星火路10号9楼, Jiangsu 1, 210061, CN)
DONG, Haijun (No. 261, 1357 Huqingping Road, Shanghai 2, 201702, CN)
董海军 (中国上海市沪青平公路号, Shanghai 2, 201702, CN)
YU, Zenghui (Floor 9, 10 Xinghuo RoadNanjing, Jiangsu 1, 210061, CN)
International Classes:
C07D487/04; A61K31/5025; A61P35/00; A61P35/02
View Patent Images:
&&&&&&PDF help
Domestic Patent References:
WOA2N/AWOA1N/AWOA1N/A
Attorney, Agent or Firm:
SHANGHAI PATENT & TRADEMARK LAW OFFICE, LLC (435 Guiping Road, Shanghai 3, 200233, CN)
权利要求书
1. 式 π的化合物，
其中： 独立为氢、 卤素、 可取代的氨基、 可取代的垸氧基、 可取代的 烷 基、 卤垸基、 烯基、 炔基、 羟基垸基， 胺基垸基、 羧基垸基、 硝基、 氰基、 酰胺基、 羟 基、 巯基、 酰氧基、 叠氮基、 羧基、 羟基酰胺基或可取代的烷硫；
R3" 7 和 R9-R12独立为氢、 卤素、 氨基、 胺基， 垸氧基、 垸基、 卤垸基、 芳 基、 碳环基、 杂环基、 杂芳基、 链烯基、 炔基、 芳基烷基、 芳基链烯基、 芳基炔基、 杂 芳基垸基、 杂芳基链烯基、 杂芳基炔基、 碳环垸基、 杂环垸基、 羟基垸基、 羟基垸氧 基、 胺基烷基、 胺基烷氧基、 羧基垸基、 羧基垸基、 硝基、 氰基、 酰胺基、 羟基、 巯 基、 酰氧基、 叠氮基、 羧基、 羟基酰胺基、 垸基磺酰基、 胺基磺酰基、 二取代烷基胺基 磺酰基、 垸基亚磺酰基 或是垸硫；
是(^3烷氧基， d-3卤垸氧基， d-3垸基， 氨基或胺基。
2. 权利要求 1的化合物， 其中 和 是氢。
3. 权利要求 1的化合物， 其中 R1()是氢、 卤素、 垸氧基、 d—3垸基、 d—3卤垸基， 硝基或氰基； Rn和 R12是氢。
4. 权利要求 1的化合物， 其中 Ru是氢、 卤素、 CM垸氧基、 d_3垸基、 d_3卤垸基， 硝基或氰基； ， R10和 R12是氢。
5. 权利要求 1 的化合物， 其中 是氨基， 胺基， 烷氧基， d—3垸基或（ 3卤烷 基； 是氢， 氨基， 胺基， 垸基， d-3卤垸基， 卤素， 羟基或硝基； 、 和 R7是氢。
6. 权利要求 1的化合物， 其中 是（ -3烷氧基， （ 3卤烷氧基， 烷基， 氨基或胺 基； 和^。或 Ru是氢、 卤素、 烷氧基、 d_3烷基、 硝基或氰基。
7. 权利要求 1 的化合物， 其中 是氨基， 胺基， d-3垸氧基、 d—3垸基或 CM卤垸 基； 和 是氢、 氨基， 胺基， CM垸基、 CM卤烷基， 卤素、 羟基或硝基。
8. 权利要求 1的化合物， 其中 和 独立为氢、 垸基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基或 卤烷基。
9. 权利要求 1 的化合物， 其中 和 R12独立选自 CM垸氧基和 d—3卤垸氧基； 。选 自氢， 烷氧基、 硝基、 卤素和 垸基； 和 1^独立选自氢， 卤素、 烷氧基和 d—3 院基。
10. 权利要求 1 的化合物， 其中 和 R7为氢； 和 独立为 垸基、 卤素、 羟 基、 氨基和硝基； 为 垸氧基、 d-3卤烷基和 C 3垸基。
11. 权利要求 1的化合物， 其中 和 R12独立选自 烷氧基和 d_3卤垸氧基； R10选自氢， Cw垸氧基、 硝基、 卤素和 垸基； R9和 Ru独立选自氢， 卤素、 垸 氧基和 烷基； 和 R7为氢； R4和 独立为氢， 烷基、 卤素、 羟基、 氨基和硝 基； 和 R5为 d_3烷氧基、 d_3卤垸基和 d_3垸基。
12. 权利要求 1的化合物， 其中所述化合物选自：
3- (2-甲氧基苯基) -6- (3-甲基 -4-甲氧基苯基) -[1， 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (3-氯 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1,2,4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (3-氟 -4-甲基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1,2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (3-氟 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1,2,4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-乙氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-三氟甲基苯基) -[1,2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-乙基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1,2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (3-羟基- 4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) - [ 1， 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-三氟甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪；
3- (2, 4-二甲氧基苯基 )-6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-硝基苯基) -[1， 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
3- (5-氯 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1,2,4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2， 3, 4-三甲氧基苯基) -[1,2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
3- (4-氟 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1,2,4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -5-甲基苯基) -[1， 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
3- (2, 5-二甲氧基苯基 )-6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2, 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-丙氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪；
3- (2, 3-二甲氧基苯基 )-6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2， 3, 4-三甲氧基苯基) -[1,2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
3- (4-氟 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1,2,4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -5-甲基苯基) - [1， 2, 4]三唑 [4， 3-^]哒嗪； 3- (2， 5-二甲氧基苯基 ) -6- (4-甲氧基苯基) - [ 1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-丙氧基苯基) - [ 1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
3- (4-氯 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) - [ 1, 2, 4]三唑 [4， 3-^]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-甲基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪； 6_ (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-甲基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪； 6- (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) - [1, 2, 4]三唑 [4， 3-^]哒嗪； 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (4-氯 -2-甲氧基苯基) - [ 1, 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-甲基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪； 6- (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (4-氯 -2-甲氧基苯基) - [ 1， 2， 4]三唑 [4， 3-0]哒嗪； 3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪；
3- (2-甲氧基 -5-硝基苯基) -6- (4-甲基 -3-硝基苯基) - [ 1， 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲基 -3-硝基苯基) - [ 1， 2， 4]三唑 [4, 3~b]哒嗪；
6- (3-氨基 -4-甲基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) - [ 1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 或其可药用盐或前药。
13.权利要求 1-12中任一项所述的化合物在制备治疗由不受控制的细胞增殖导致的 哺乳动物疾病的药物中的用途。
14.权利要求 13的用途， 其中所述疾病是癌症。
15.权利要求 14的用途， 其中所述癌症是肝癌、 黑素瘤、 霍奇金病、 非霍奇金淋巴 瘤、 急性淋巴白血病、 慢性淋巴白血病、 多发性骨髓瘤、 成神经细胞瘤、 乳腺癌、 卵巢 癌、 肺癌、 维尔姆斯瘤、 子宫颈癌、 睾丸癌、 软组织肉瘤、 原发性巨球蛋白血症、 膀耽 癌、 慢性拉细胞白血病、 原发性脑癌、 恶性黑素瘤、 小细胞肺癌、 胃癌、 结肠癌、 恶性 胰腺胰岛瘤、 恶性类癌性癌症、 绒毛膜癌、 蕈樣肉芽腫、 头或颈癌、 骨原性肉瘤、 胰腺 癌、 急性粒细胞白血病、 毛细胞白血病、 成神经细胞瘤、 横纹肌肉瘤、 卡波西肉瘤、 泌 尿生殖系统肿瘤、 甲状腺癌、 食管癌、 恶性高钙血症、 子宫颈增生症、 肾细胞癌、 子宫 内膜癌、 真性红细胞增多症、 特发性血小板增多症、 肾上腺皮质癌、 皮肤癌或前列腺 癌。
16. 一种药用组合物， 包括权利要求 1-12中任一项所述的化合物与可药用载体。
Description:
说明书 -芳基 -6-芳基 -[1，2，4]三唑并 [4，3-B]哒嗪及其作为细胞增殖抑制剂的应用 技术领域
[0001] 本发明属于药物化学领域。 本发明特别涉及 3-芳基 -6-芳基 - [ 1， 2， 4]三唑 并 [4， 哒嗪， 及其作为治疗上有效的抗癌药物的应用。 背景技术
[0002] 癌病变的最明显特征之一是细胞增殖失控。 因此，研究和开发细胞增殖抑制 剂是发现高效抗癌药物的有效途径。 在过去 50多年来人们基于这个机制已经成功开发了 多个新型抗癌药物， 其中包括紫杉醇和多西紫杉醇， 阿霉素和表阿霉素， 拓扑替康和伊 立替康， 顺铂和卡铂， 以及长春新碱和长春碱等。 目前， 这些抗癌药物已被广泛应用于 白血病和实体肿瘤的治疗。 最近， 随着人们对致癌机制越来越多的了解， 针对特定致癌 机制而研发的抗癌药物也取得了显著的成功。 成功的例子包括针对慢性粒细胞白血病的 BCR-ABL 酪氨酸激酶而研发出来的抑制剂伊马替尼。 但是， 癌症是一种复杂的疾病。 致 癌机制千变万化， 如何找到更有效的抗癌药物仍然是一个巨大的挑战。
[0003] 许多目前常用的抗癌药物是针对细胞分裂周期的特定阶段设计的。 这些药 物抑制快速增殖的癌细胞分裂过程的某个机制从而引起细胞分裂的停滞， 使细胞分裂周 期停留在某个阶段上。 简而言之， 细胞分裂周期是指细胞增殖过程的一系列步骤。 当细 胞处于休息状态时， 它被称作处于细胞分裂周期的 G。阶段。 当细胞开始增殖时， 细胞开 始 DNA的合成和复制， 这时它被称作进入 S阶段。 当 DNA复制完成及相应的准备工作就 绪后， 细胞一分为二进行分裂， 这被称作有丝分裂或 M阶段。 抗癌药如长春新碱， 长春 碱， 紫杉醇等由于其对微管形成及拆卸过程的干扰，使细胞不能进行有效的有丝分裂， 停 留在细胞分裂周期的 M阶段。 癌细胞不能有效地分裂和增殖， 而进入细胞凋亡， 因此达 到抗癌的作用。
[0004] 已知许多抗癌药物可诱导癌细胞凋亡。 细胞凋亡机制包括一系列蛋白水解 酶的激活使细胞进入可逆和不可逆的凋亡状态。 涉及细胞凋亡最主要的一组蛋白水解酶 是 Caspases。 Caspases通常以没有活性的酶原状态存在于细胞内。 Caspases 是半胱氨 酸-天冬氨酸蛋白水解酶。 它们的共同点是特异地水解天冬氨酸残基后的肽键。 其中 caspase-3, _6和 _7是关键的 caspases , 它们能切割多种细胞中的蛋白质底物， 导致细 胞凋亡。 细胞内的 caspase活性可采用荧光标记的底物来测量。
[0005] WO公开以下三唑并哒嗪， 三唑并噻二嗪， 以及相关杂 环作为磷酸二酯酶抑制剂。 其中每个 X独立为 CH， CH2， 或杂原子； 每个 和 独立为 烷基， 卤烷基， 环烷基， 杂环基烷基， 或芳基； 是取代芳基。
W公开了制备有乙酰辅酶 A羧化酶抑制活性的三唑并哒嗪， 其中 X H， 取代或非取代的吡啶， 噻吩， 呋喃基或苯基； Y =吡啶， 噻吩， 取代或非取代的哌
W 公开了制备作为 C-MET抑制剂的杂环化合物。 其中 = H， 烯 基， 烷基， 炔基等； =取代或非取代的芳基或杂芳基； =取代或非取代的芳基或杂芳 基； X = C (=0) , so2, -s-c (=0) -, 或 -o-c (=o) -。 发明内容
[0006] 如结构式 I和 I I所示， 本发明提供了新颖的具有抗细胞增殖活性的 3-芳 基 -6-芳基 - [ 1， 2, 4]三唑并 [4, 3-6]哒嗪类化合物。
[0007] 本发明还提供了包含一个有效量的式 I或 I I化合物的药用组合物， 用来治 疗或改善由不受控制的细胞增殖导致的哺乳动物疾病。
[0008] 在一具体实施例中， 所述药用组合物还可含有一种或多种可药用载体或稀 释剂。 [0009] 在一具体实施例中， 所述药用组合物还可含有至少一种已知的抗癌药物或 所述抗癌药物的可药用盐。
[0010] 在一具体实施例中， 所述已知的抗癌药物可选自下组药物中的一种或多 种： 白消安、 顺铂、 丝裂霉素 c，卡铂， 秋水仙碱、 长春碱、 紫杉醉，多西他赛,喜树碱， 托泊替康， 阿霉素和铭托泊普， 5-氮杂胞普、 5-氟尿啼吮，甲氛蝶吟， 5-氟 -2 ' -去氧尿 苷、 ara-C、 羟基脲， 硫代鸟嘌吟， campath, 赫赛汀， Rituxan, 马法兰， 苯丁酸氮芥， 环磷酰胺， 异环磷酰胺， 长春新碱， mitoguazone, 表阿霉素， 阿克拉霉素， 博莱霉素， 米托蒽醌， el liptinium, 氟达拉滨， 奥曲肽， 视黄酸， 他莫昔芬， 砒霜、 吉西他滨、 来 曲唑、 氟维司群、 苯达莫司汀、 pralatrexate、 培美曲塞 、 nelarabine、 替莫唑胺、 唑 来膦酸、 伊立替康、 伊沙匹隆、 cabazitaxel、 长春瑞滨、 Panitumumab . Ofatumumab Avastin、 imatinib. 吉非替尼、 埃罗替尼、 拉帕替尼、 sorafenib、 舒尼替尼、 尼罗替 尼、 达沙替尼、 帕唑帕尼、 硼替佐米、 伏立诺他、 romic psiiu 特癌适、 依维莫司、 萨 力多胺、 来那度胺和硫鸟嗓吟， 或所述抗癌药物的可药用盐。
[0011] 本发明还涉及应用式 I或 II的化合物来治疗， 预防或改善因细胞增殖失控 导致的哺乳动物疾病， 尤其是肿瘤和癌症的方法。
[0012] 具体而言， 本发明提供一种治疗由不受控制的细胞增殖导致的哺乳动物疾 病的方法， 包括向需要这种治疗的哺乳动物施用有效量的本发明式 I 或 Π 所示的化合 物。
[0013] 在一具体实施例中， 所述癌症是抗药性癌症。
[0014] 在一具体实施例中， 所述癌症是肝癌、 黑素瘤、 霍奇金病、 非霍奇金淋巴 瘤、 急性淋巴白血病、 慢性淋巴白血病、 多发性骨髓瘤、 成神经细胞瘤、 乳腺癌、 卵巢 癌、 肺癌、 维尔姆斯瘤、 子宫颈癌、 睾丸癌、 软组织肉瘤、 原发性巨球蛋白血症、 膀耽 癌、 慢性拉细胞白血病、 原发性脑癌、 恶性黑素瘤、 小细胞肺癌、 胃癌、 结肠癌、 恶性 胰腺胰岛瘤、 恶性类癌性癌症、 绒毛膜癌、 蕈樣肉芽腫、 头或颈癌、 骨原性肉瘤、 胰腺 癌、 急性粒细胞白血病、 毛细胞白血病、 成神经细胞瘤、 横纹肌肉瘤、 卡波西肉瘤、 泌 尿生殖系统肿瘤、 甲状腺癌、 食管癌、 恶性高钙血症、 子宫颈增生症、 肾细胞癌、 子宫 内膜癌、 真性红细胞增多症、 特发性血小板增多症、 肾上腺皮质癌、 皮肤癌或前列腺
[0015] 在一具体实施例中， 所述方法还包括施用至少一种已知的抗癌药物或所述 抗癌药物的可药用盐。 [0016] 在一具体实施例中， 所述己知的抗癌药物选自下组： 白消安、 顺铂、 丝裂 霉素 c，卡铂， 秋水仙碱、 长春碱、 紫杉醉，多西他赛， 喜树碱，托泊替康， 阿霉素和铭托 泊普， 5-氮杂胞普、 5-氟尿啼吮，甲氛蝶吟， 5-氟 -2 ' -去氧尿苷、 ara-C、 羟基脲， 硫 代鸟嘌呤， campath , 赫赛汀， Rituxan , 马法兰， 苯丁酸氮芥， 环磷酰胺， 异环磷酰 胺， 长春新碱， mitoguazone , 表阿霉素， 阿克拉霉素， 博莱霉素， 米托蒽醌， ell iptinium, 氟达拉滨， 奥曲肽， 视黄酸， 他莫昔芬， 砒霜、 吉西他滨、 来曲唑、 氟维 司群、 苯达莫司汀、 pralatrexate、 培美曲塞 、 nelarabine 、 替莫唑胺、 唑来膦酸、 伊立替康、 伊沙匹隆、 cabazitaxeU 长春瑞滨、 Pgmitumumab、 Ofatumumab Avastiru imatinib, 吉非替尼、 埃罗替尼、 拉帕替尼、 sorafenib、 舒尼替尼、 尼罗替尼、 达沙替 尼、 帕唑帕尼、 硼替佐米、 伏立诺他、 romid印 sin、 特癌适、 依维莫司、 萨力多胺、 来 那度胺和硫乌嗓吟，或所述抗癌药物的可药用盐。
[0017] 在一具体实施例中， 所述方法还包括对所述哺乳动物进行放射治疗。
[0018] 在一具体实施例中， 本发明的化合物可在哺乳动物进行癌症手术治疗后施 用。
[0019] 本发明也涉及到结构式 I和 I I的新颖化合物的制备方法。 具体实施方式
[0020] 如式 I和式 II所示， 本发明发现 3 -芳基- 6 -芳基- [1， 2， 4]三唑并 [4 - b]哒嗪可作为细胞增殖抑制剂。 因此， 式 I和式 II化合物可用于治疗因细胞异常增 导致的疾病。
[0021] 具体来说， 可用于本发明的化合物是式 I化合物或其可药用盐或前药：
其中， ΑΓι和 Ar2 独立为可被取代的芳基或可被取代的杂芳基；
1^和 独立为氢、 卤素、 可被取代的氨基、 可被取代的垸氧基、 可被取代的 烷基、
3/4 垸基、 烯基、 炔基、 羟基烷基， 胺基烷基、 羧基烷基、 硝基、 氰基、 酰胺基、 羟基、 巯基、 酰氧基、 叠氮基、 羧基、 羟基酰胺基或可被取代的烷硫。 [0022] 优选的式 I化合物中 A 和 Ar2为可任选地被取代的苯基或吡啶基。 更为 优选的是 A 和 Ar2为苯基。 优选的式 I化合物中 和 都为氢。
[0023] 本发明优选 盐或前药：
其中， 1^和 独立为氢、 卤素、 可被取代的氨基、 可被取代的垸氧基、 可被取 代的 垸基、
3/4 垸基、 烯基、 炔基、 羟基烷基， 胺基垸基、 羧基烷基、 硝基、 氰基、 酰胺基、 羟基、 巯基、 酰氧基、 叠氮基、 羧基、 羟基酰胺基或可被取代的垸硫；
R3-R12独立为氢、 卤素、 氨基、 烷氧基、 （^。垸基、 卤垸基、 芳基、 碳环基、 杂 环基、 杂芳基、 链烯基、 炔基、 芳基垸基、 芳基链烯基、 芳基炔基、 杂芳基烷基、 杂芳 基链烯基、 杂芳基炔基、 碳环烷基、 杂环烷基、 羟基烷基、 羟基垸氧基、 胺基垸基、 胺 基垸氧基、 羧基垸基、 羧基垸基、 硝基、 氰基、 酰胺基、 羟基、 巯基、 酰氧基、 叠氮 基、 羧基、 羟基酰胺基、 烷基磺酰基、 胺基磺酰基、 二取代垸基胺基磺酰基、 垸基亚磺 酰基 或是垸硫。
一组优选的式 II化合物中 和 都为氢。 另一组优选的式 II化合物中， 是 d—3 烷氧基， d—3卤烷氧基， d-3烷基， 氨基或胺基； 和 。或 Ru是氢、 卤素、 CM垸氧基、 d—3 烷基、 硝基或氰基。 另一组优选的式 II化合物中， 是氨基， 胺基， CM烷氧基、 （ -3烷 基或 CM卤垸基； 和 是氢、 氨基， 胺基， d—3垸基、 （ 3卤烷基， 卤素、 羟基或硝基。
一组优选的式 I I化合物中， 和 R6独立为氫、 垸基、 卤素、 羟基、 氨基、 硝 基或 卤烷基。
一组优选的式 I I化合物中， 和 R12独立选自 d—3垸氧基和 d-3卤垸氧基， 。选自 氢， 垸氧基、 硝基、 卤素和 d—3垸基， 和 1^独立选自氢， 卤素、 d—3垸氧基和 d-3烷 基。 一组优选的式 I I化合物中， 和 为氢， 和 独立为 d—3垸基、 卤素、 羟基、 氨 基和硝基， 为 C 3垸氧基、 d—3卤垸基和 d—3烷基。
一组优选的式 I I化合物中， 和 R12独立选自 d—3垸氧基和 d-3卤烷氧基， 。选自 氢， 烷氧基、 硝基、 卤素和 d—3垸基， 和 1^独立选自氢， 卤素、 d—3垸氧基和 d-3垸 基， 和 R7为氢， 和 独立为氢， CM烷基、 卤素、 羟基、 氨基和硝基， 为 垸氧 基、 。 3 | 3/4 院基禾口 C 3院基。
一组优选的式 II 化合物中， 所述化合物不包括下述化合物： 3-(2-甲氧基苯基) - 6 -（3， 4-二甲氧基苯基）-[1， 2， 4]三唑 [4, 3- ]哒嗪； 和 3-(4_氯苯基）_6_(3， 4， 5_三甲氧 基苯基）-[1， 2， 4]三唑 [4, 3-6]哒嗪。
式 I和式 II优选的化合物实施例包括但不限于：
3- (2-甲氧基苯基) -6- (3-甲基 -4-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 6- (3-氯 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3-A]哒嗪；
6- (3-氟 -4-甲基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (3-氟 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-乙氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-三氟甲基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 哒嗪；
6- (4-乙基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3- ]哒嗪；
6- (3-羟基- 4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪； 6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-三氟甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
3- (2， 4-二甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-硝基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3-^]哒嗪； 3- (5-氯 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2, 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2， 3, 4-三甲氧基苯基 )-[1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪；
3- (4-氟 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -5-甲基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 3- (2， 5-二甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-丙氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪；
3- (2， 3-二甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2， 3， 4-三甲氧基苯基 )-[1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪；
3- (4-氟 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -5-甲基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 3- (2， 5-二甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-丙氧基苯基) -[1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪； 3- (4-氯 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-b]哒嗪；
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-甲基苯基) - [ 1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 6- (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-甲基苯基) - [ 1, 2, 4]三唑 [4， 3-^]哒嗪； 6- (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) - [ 1, 2, 4]三唑 [4, 3-b]哒嗪； 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (4-氯 -2-甲氧基苯基) - [1， 2, 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪； 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基 -4-甲基苯基) - [ 1, 2, 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪； 6- (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (4-氯 -2-甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪； 3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲基苯基) - [ 1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪；
3- (2-甲氧基 -5-硝基苯基) -6- (4-甲基 -3-硝基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪； 3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲基 -3-硝基苯基) - [1, 2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪；
6- (3-氨基 -4-甲基苯基) -3- (2-甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪； 或其可药用盐或前药。
[0024] 本文所用 "垸基"是指烷基本身或是直链或支链高达十个碳原子的基团。 有用的垸基包括直链或支链 。垸基， 更优选的是 d—3烷基。 典型的 。垸基包括甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基、 仲丁基、 叔丁基、 3-戊基、 己基和辛基。
[0025] 本文所用 "烯基"是指直链或支链含有 2-10个碳原子、 其中至少是链中的 两个碳原子之间含有一个双键的基团。 典型的链烯基包括乙烯基、 1-丙烯基、 2-甲基 -1- 丙烯基、 1-丁烯基和 2-丁烯基。
[0026] 本文所用 "炔基"是指直链或支链含有 2-10个碳原子， 其中至少是链中的 两个碳原子之间含有一个叁键的基团。 典型的炔基包括乙炔基、 1-丙炔基、 1-甲基 -2-丙 炔基、 2-丙炔基、 1-丁炔基和 2-丁炔基。
[0027] 有用的烷氧基包括被任意上述 烷基取代的氧基。
[0028] 有用的垸硫基包括被任意上述 。垸基取代的硫基， 其垸基可被取代。 同 时还包括这类烷硫基的亚砜和砜。
[0029] 有用的氨基包括 -NH2、 -腿1?15和-服15 6，其中 R15和 R16是 。烷基或（3-( 8环 烷基， 或者 R15和 R16与 N以及与其它基团一起形成环例如哌啶， 或者 R15和 R16与 N以及与 其它基团一起形成环例如哌嗪。 所述烷基可被取代。
[0030] 烷基、 垸氧基、 烷硫基、 烯基、 炔基、 环烷基、 碳环和杂环可被一个或多 个 （例如 1、 2、 3或 4个） 选自以下基团的取代基取代： 卤素、 羟基、 羧基、 氨基、 胺 基， 硝基、 氰基、 酰氨基、 d-6酰氧基、 d-6烷氧基、 芳氧基、 烷硫基、 C6-C1()芳基、 C4_C7环烷基、 C2-C6链烯基、 Cs-Ci。芳基 ( C2-C6)链烯基、 C6- C10芳基 ( C2-C6) 炔基、 饱和 和不饱和的杂环基或杂芳基。 在优选的实施中， 垸氧基可被一个或多个 （例如 1?4个 或 1?3个不等）选自以下基团的取代基取代： 卤素、 吗啉基、 氨包括垸基胺和二垸基胺 以及羧基酯。
[0031] 芳基、 芳基烷基、 芳基链烯基、 芳基炔基、 杂芳基和杂芳基垸基可被一个 或多个 （例如 1、 2、 3或 4个） 选自以下基团的取代基取代： 卤素、 亚甲二氧基、 d-C6 代院基、 C C10芳基、 CrC?环院基、 Cf Ci;链燏基、 C「C6块基、 C6_C10芳基 ( C「C6) 基、 Cs- 。芳基 （C2- C6 ) 链烯基、 Cs-G。芳基 （c2-c6) 炔基、 d-c6羟基烷基、 硝基、 氨 基、 胺基， 脲基、 氰基、 d-c6酰基胺基、 羟基、 巯基、 d-c6酰氧基、 叠氮基、 d-c6烷氧 基、 羧基、 二 （d- )胺基、 垸基磺酰基、 芳基磺酰基、 二垸基胺基磺酰基或垸基亚磺 酰基。
[0032] 本文所用 "芳基"是指芳基本身或是作为其它基团的一部分， 指含有 6 到 14个碳原子的单环、 双环或三环芳族基团。
[0033] 有用的芳基包括 C6—14芳基、 更为优选的是 。芳基。 典型的（6—14芳基包括 苯基、 萘基、 菲基、 蒽基、 茚基、 联苯、 亚联苯基和弗基。
[0034] 这里所指 "碳环"包括环垸基和部分饱和的碳环基团。 有用的环垸基是 C3_8 环垸基。 典型的环垸基包括环丙级、 环丁基、 环戊基、 环己基和环庚基。
[0035] 有用的饱和的或是部分饱和的碳环基团是上面所描述的环垸基和环烯基， 例如环戊烯基、 环庚烯基和环辛烯基。
[0036] 有用的卤素或卤素基团包括氟、 氯、 溴和碘。
[0037] 本文所用 "芳基垸基"包括被任一上述 C6_14芳基取代的 。烷基。 优选的芳基烷基是苄基、 苯乙基或萘甲基。
[0038] 本文所用 "芳基烯基 "包括被任一上述 C6_14芳基取代的 烯基。
[0039] 本文所用 "芳基炔基"包括被任一上述 C6_14芳基取代的 。炔基。
[0040] 本文所用 "芳氧基"包括被任一上述 C6_14芳基取代的氧基， 其芳基 可被取代。 有用的芳氧基包括苯氧基和 4-甲基苯氧基。
[0041] 本文所用 "芳基垸氧基"包括被任一上述芳基取代的 。烷氧基， 其芳基可被取代。 有用的芳基烷氧基包括苄氧基和苯基乙氧基。 [0042] 有用的卤代烷基包括被一个或多个氟、 氯、 溴或碘原子取代的 （^。垸基， 例如氟甲基、 二氟甲基、 三氟甲基、 五氟乙基、 1， 1-二氟乙基、 氯甲基、 氯氟甲基和三 氯甲基。
[0043] 有用的酰基胺基 （酰胺基） 是连接在胺基氮上的任何 酰基 （垸酰 基） ， 例如乙酰胺基、 氯乙酰胺基、 丙酰胺基、 丁酰胺基、 戊酰胺基和已酰胺基， 以及 芳基取代的 d-6酰基胺基， 例如苯甲酰胺基。
[0044] 有用的酰氧基是连接在氧 （-0-) 上的任何 d—6酰基 （垸酰基） ， 例如甲酰 氧基、 乙酰氧基、 丙酰氧基、 丁酰氧基、 戊酰氧基和已酰氧基。
[0045] 本文所用杂环是指饱和或部分饱和的 3-7员单环， 或 7-10员双环体系， 它 是由碳原子和从 0、 N、 S中任选 1-4个杂原子组成的， 其中杂原子氮和硫都可以被任意 氧化， 氮也可以任意季胺化， 并且包括双环体系中定义的任意上述杂环被与苯环融合。 如果产生的化合物是稳定的话， 那么杂环的碳原子或氮原子上可有取代基。
[0046] 有用的饱和或部分饱和杂环基团包括四氢呋喃基、 吡喃基、 哌啶基、 哌嗪 基、 吡咯垸基、 咪唑垸基、 咪唑啉基、 二氢吲哚基、 异二氢吲哚基、 奎宁环基、 吗啉 基、 异色满基、 色满基、 吡唑垸基和吡唑啉基。
[0047] 本文所用 "杂芳环"是指含有 5-14个环原子， 并且有 6个， 10个或 14个 π电子在环体系上共用。 而且所含环原子是碳原子和从氧、 氮、 硫中任选的 1-3 个杂原 子。
[0048] 有用的杂芳基包括噻吩基、 苯并 [ZJ噻吩基、 苯并 [2， 3-6]噻吩基、 噻蒽 基、 呋喃基、 吡喃基、 异苯并吡喃基、 色烯基、 夹氧蒽基、 噻吩恶基 ( phenoxanthi inyl ) 、 吡咯基、 咪唑基、 吡唑基、 吡啶基、 包括但不限制于 2_吡啶 基、 3-吡啶基和 4-吡啶基、 吡嗪基、 嘧啶基、 哒嗪基、 吲哚基、 异吲哚基、 3H-吲哚 基、 吲哚基、 吲唑基、 嘌呤基、 4H-喹嗪基、 异喹啉基、 喹啉基、 酞嗪基、 萘啶基、 吖啶 基、 萘嵌间二氮 （杂） 苯基、 菲咯啉基、 吩嗪基、 异噻唑基、 吩噻嗪基、 异恶唑基、 呋 咱基、 吩恶嗪基、 1， 4-二氢喹喔啉 -2， 3-二酮、 7-氨基异香豆素、 吡啶并 [ l，2-a]嘧啶 -4- 酮、 四氢化五员 [c]吡唑 -3-基、 咪唑 [l，5-a]嘧啶基、 1， 2-苯并异恶唑 -3-基、 苯并咪唑 基、 2-羟吲哚基、 噻重氮基和 2-氧代苯并咪唑基。 当杂芳基在环中含有氮原子时， 这样 的氮原子可以呈 N-氧化物形式， 例如吡啶基 N-氧化物、 吡嗪基 N-氧化物和嘧啶基 N-氧 化物。 [0049] 本文所用 "杂芳氧基"包括被任一上述杂芳基取代的氧基， 其中杂 芳基上可有取代基。 有用的杂芳氧基包括吡啶氧基、 吡嗪氧基、 吡咯氧基、 吡唑氧基、 咪唑氧基和苯硫基氧基。
[0050] 本文所用 "杂芳基垸氧基" 是指被任一上述杂芳基取代的 。烷氧 基， 其中杂芳基上可有取代基。
[0051] 一些本发明化合物可能作为立体异构体， 包括旋光异构体存在。 本发明包 括所有立体异构体和这样的立体异构体的外消旋混合物， 以及可以根据本领域技术人员 众所周知的方法分离出来的单独的对映体。
[0052] 可药用盐的例子包括无机和有机酸盐， 例如盐酸盐、 氢溴酸盐、 硫酸盐、 柠檬酸盐、 乳酸盐、 酒石酸盐、 马来酸盐、 富马酸盐、 扁桃酸盐和草酸盐； 以及与碱例 如钠羟基、 三 （羟基甲基）胺基甲垸 （TRIS，胺丁三醇） 和 N-甲基葡糖胺形成的无机和 有机碱盐。
[0053] 本发明化合物的前药的实施例包括含有羧酸的化合物的简单酯 （例如依据 本领域已知方法通过与 d—4醇缩合而获得的酯） ； 含有羟基的化合物的酯 （例如依据本 领域已知方法通过与 C 4羧酸、 C3—6二酸或其酸酐例如琥珀酸酐和富马酸酐缩合而获得的 酯） ； 含有氨基的化合物的亚胺 （例如依据本领域己知方法通过与 CH醛或酮缩合而获 得的亚胺） ； 含有氨基的化合物的氨基甲酸酯， 例如 Leu 等人 MecL Chen m ) ) 和 Greenwald等人 (J. Med. Chem. 42 :
(1999) ) 描述的那些酯； 含有醇的化合物的醛缩醇或酮缩醇 （例如依据本领域己知方法通过与氯甲基甲基醚或氯 甲基乙基醚缩合而获得的那些缩醇） 。
[0054] 本发明化合物可使用本领域技术人员已知的方法或本发明新方法制得。 具 体来说， 具有式 I或式 Π的本发明化合物可如反应方案 1 中的反应实施例所示制得。 3， 6-双卤代哒嗪例如 3， 6-二氯哒嗪与苯并酰肼例如 2-甲氧基苯并酰肼在正丁醇中反应制 得 6-氯 -3- (2-甲氧基苯基) - [1，2，4]三唑 [4, 3-6]哒嗪。 在钯催化剂例如四三苯基憐钯和 碱例如碳酸铯催化下， 6-氯 -3- (2-甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-b]哒嗪和苯硼酸例如 3-甲基苯硼酸耦合反应制得目标产物 3- (2-甲氧基苯基) -6- (3-甲基苯基) - [1，2，4]三唑 [4, 3-6]哒嗪。
[0055] 本发明化合物可如反应方案 2 中的反应实施例所示制得。 在钯催化剂例如 四三苯基磷钯和碱例如碳酸铯催化下， 3， 6-双卤代哒嗪例如 3， 6-二氯哒嗪与苯硼酸例如 4-甲氧基苯硼酸反应制得 3-氯 -6- (4-甲氧基苯基）哒嗪。 3-氯 -6- (4-甲氧基苯基）哒嗪与 水合肼反应制得 3-酰肼基 -6- (4-甲氧基苯基）哒嗪。 在卡特缩合剂 （B0P， benzotriazole-l-yl-oxy-tris- (dimethylamino) -phosphoniumhexaf luorophosphate ) 和碱例如 N-甲基吗啡啉存在下， 3-酰肼基 -6- (4-甲氧基苯基）哒嗪和取代苯甲酸例如 2- 三氟甲氧基苯甲酸反应得到 N' - (6- (4-甲氧基苯基）哒嗪 -3-位) -2- (三氟甲氧基）苯肼。 Ν' - (6- (4-甲氧基苯基）哒嗪 -3-位） -2- (三氟甲氧基）苯肼在三氯氧磷 （P0C13 ) 中反应制 得目标化合物 6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-三氟甲氧基苯基) - [1, 2, 4]三唑 [4， 3-b哒嗪。
[0056] 本发明的一个重要方面是发现了式 I和式 II的化合物是抗恶性细胞增生 剂。 因此， 这些化合物可用于治疗多种由失控的细胞生长和异常细胞扩散而引起的临床
[0057] 本发明的另一个重要方面是发现式 I和式 II化合物对抗药性癌细胞例如乳 腺癌细胞具有高效的抗细胞增生活性， 能有效杀死这些抗药性的癌细胞。 与之相比， 在 相同条件下， 很多标准抗癌药物不能有效地杀死具有抗药性的癌细胞。 因此， 本发明化 合物可用于治疗抗药性的癌症， 例如哺乳动物的乳腺癌。
[0058] 本发明还包括给动物施用有效量的式 I或式 II化合物或其可药用盐或前药 的治疗方法。 其中所述治疗方法是用于治疗癌症 -由失控的细胞生长或异常细胞扩散而导 致的疾病。 这类疾病包括但不限于肝癌、 黑素瘤、 霍奇金病、 非霍奇金淋巴瘤、 急性淋 巴白血病、 慢性淋巴白血病、 多发性骨髓瘤、 成神经细胞瘤、 乳腺癌、 卵巢癌、 肺癌、 维尔姆斯瘤、 子宫颈癌、 睾丸癌、 软组织肉瘤、 原发性巨球蛋白血症、 膀耽癌、 慢性拉 细胞白血病、 原发性脑癌、 恶性黑素瘤、 小细胞肺癌、 胃癌、 结肠癌、 恶性胰腺胰岛 瘤、 恶性类癌性癌症、 绒毛膜癌、 蕈樣肉芽腫、 头或颈癌、 骨原性肉瘤、 胰腺癌、 急性 粒细胞白血病、 毛细胞白血病、 成神经细胞瘤、 横纹肌肉瘤、 卡波西肉瘤、 泌尿生殖系 统肿瘤病、 甲状腺癌、 食管癌、 恶性高钙血症、 子宫颈增生症、 肾细胞癌、 子宫内膜 癌、 真性红细胞增多症、 特发性血小板增多症、 肾上腺皮质癌、 皮肤癌和前列腺癌。
[0059] 在实施本发明治疗方法时， 给有一种或多种这些症状的病人施用有效量的 药物制剂。 所述药物制剂含有有效治疗浓度的式 I或式 Π化合物， 被配制成用于口服、 静脉注射、 局部或外用给药的形式， 用于治疗癌症和其他疾病。 给药量是有效地改善或 消除一个或多个病症的药量。 对于特定疾病的治疗， 有效量是足以改善或以某些方式减 轻与疾病有关的症状的药量。 这样的药量可作为单一剂量施用， 或者可依据有效的治疗 方案给药。 给药量也许可治愈疾病， 但是给药通常是为了改善疾病的症状。 一般需要反 复给药来实现所需的症状改善。
[0060] 本发明也涉及本发明式 I或 I I化合物在制备用于治疗或预防由失控的细胞 生长和异常细胞扩散而引起的疾病的药物中的用途。 所述失控的细胞生长和异常细胞扩 散而引起的疾病包括癌症。 优选实施例中， 所述疾病选自上文所述疾病。 在更优选的实 施例中， 所述疾病选自肝癌、 黑素瘤、 肺癌和乳腺癌。 在其它优选实施例中， 所述药物 还可含有其它己知的抗癌药， 包括但不限于本文所述的各种已知抗癌药。
[0061] 在另一个实施方案中提供了一种药用组合物， 其中含有抗恶性细胞增生药 物作用的式 I或式 II化合物或其可药用盐与可药用载体。
[0062] 本发明另一个实施方案涉及能有效地治疗癌症的药用组合物， 其中包含抗 恶性细胞增生剂的式 I或式 II化合物， 或其可药用盐或前药， 与至少一种己知的抗癌药 物或抗癌药物的可药用盐联合共用。 可用于抗癌联合治疗的己知抗癌药物包括但不限于 烷化剂例如白消安、 顺铂、 丝裂霉素 c和卡铂； 抗有丝分裂剂例如秋水仙碱、 长春碱、 紫杉醉和多西他赛； 拓扑异构酶 I制剂例如喜树碱和托泊替康； 拓扑异构酶 II抑制剂例 如阿霉素和铭托泊普； RNA/DNA抗代谢物例如 5-氮杂胞普、 5-氟尿啼吮和甲氛蝶吟； DNA 抗代谢物例如 5-氟 -2 ' -去氧尿苷、 ara-C、 羟基脲和硫代鸟嘌呤； 抗体例如 campath, 赫赛汀和 RituXan。 其他可用于抗癌组合治疗的己知抗癌药物包括马法兰， 苯 丁酸氮芥， 环磷酰胺， 异环磷酰胺， 长春新碱， mitoguazone, 表阿霉素， 阿克拉霉素， 博莱霉素， 米托蒽醌， ell iptinium, 氟达拉滨， 奥曲肽， 视黄酸， 他莫昔芬， 砒霜、 吉 西他滨、 来曲唑、 氟维司群、 苯达莫司汀、 pralatrexate、 培美曲塞 、 nelarabine 、 替莫唑胺、 唑来膦酸、 伊立替康、 伊沙匹隆、 cabaz itaxel、 长春瑞滨、 Panitumuma Ofatumumab, Avastin、 imatinib、 吉非替尼、 ±矣罗替尼、 拉帕替尼、 sorafenib、 舒尼 替尼、 尼罗替尼、 达沙替尼、 帕唑帕尼、 硼替佐米、 伏立诺他、 romidepsiru 特癌适、 依维莫司、 萨力多胺、 来那度胺和硫鸟嗓吟。
[0063] 在实施本发明的方法时， 本发明化合物与至少一种己知的抗癌药物可作为 单一的药用组合物一起给药。 另外， 本发明化合物也可与至少一种已知抗癌药分开给 药。 在一个实施方案， 本发明化合物和至少一种己知的抗癌药差不多同时给药， 即所有 的药物同时施用或陆续施用， 只要化合物在血液中同时达到治疗浓度即可。 在另外一个 实施方案， 本发明的化合物和至少一种已知的抗癌药根据各自的剂量方案给药， 只要化 合物在血液中达到治疗浓度即可。
[0064] 本发明的另一个实施方案， 是一种由所述化合物组成的能有效的抑制肿瘤 的生物耦合物。 这个能抑制肿瘤的生物耦合物由所述化合物与一个有医疗作用的抗体， 如赫赛汀或 Rituxan, 或生长素， 如 DGF或 NGF, 或细胞激素， 如白细胞介素 2 或 4， 或任意能与细胞表面结合的分子组成。 该抗体与其他分子能把所述化合物递送到其靶 点， 使之成为有效的抗癌药物。 此生物耦合物也可以提高有医疗作用的抗体， 如赫赛汀 或 Rituxan的抗癌效果。
[0065] 本发明的另一实施例涉及一种能有效的抑制肿瘤的药用组合物， 包含抗细 胞增生的式 I或 I I化合物， 或其可用药盐或前药， 与放射疗法联合治疗。 在此实施例， 本发明化合物与放射治疗可在相同时间或不同时间给药。
[0066] 本发明的另一实施例涉及一种能有效的用于癌症手术后治疗的药用组合 物， 包含抗细胞增生的的式 I或 I I化合物， 或其可用药盐或前药。 本发明还涉及用手术 切除肿瘤， 然后用本发明的药用组合物治疗该哺乳动物的癌症的治疗方法。
[0067] 支架植入术已成为新的标准血管成形术。 然而， 支架内再狭窄仍然是冠状 动脉内支架植入术的主要限制。 已经开发了新的办法用局部给药来进行局部血管生物学 药理调制。 这种办法允许在血管损伤的部位精确地和及时地应用药物。 许多抗细胞增殖 剂目前正在进行临床研究， 包括放线菌素 D， 雷帕霉素或紫杉醇涂层支架 (Regar E.， et al. , Br. Med. Bull. 59 : 227-248 (2001) ),, 因此， 本发明的抗细胞增殖剂也可用于防 止支架内再狭窄。 [0068] 本发明的药用组合物包括所有本发明化合物的含有量能有效地实现其预期 目标的药品制剂。 虽然每个人的需求各不相同， 本领域技术人员可确定药品制剂中每个 部分的最佳剂量。 一般情况下， 所述化合物， 或其可用药盐， 对哺乳动物每天口服給 药， 药量按照约 0. 0025到 50毫克 /公斤体重。 但最好是每公斤口服給药约 0. 01到 10 毫克。 如果也施用一个已知的抗癌药物， 其剂量应可有效地实现其预期的目的。 这些已 知的抗癌药物的最佳剂量是本领域技术人员所熟知的。
[0069] 单位口服剂量可以包括约 0. 01到 50毫克， 最好是约 0. 1到 10毫克的本发 明化合物。 单位剂量可给予一次或多次， 每天为一片或多片， 每片含有约 0. 1 到 50 毫 克， 合宜地约 0. 25到 10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。
[0070] 在外用制剂中， 本发明化合物的浓度可以是每克载体约 0. 01到 100毫克。
[0071] 本发明化合物可作为未加工药品給药。 本发明化合物也可以作为含有可药 用载体 （包括辅料， 助剂） 的一个合适的药物制剂的一部分給药。 这些可药用载体有利 于把化合物加工成可药用的药物制剂。 优选的药物制剂， 特别是那些口服的和优选的給 药方式类型， 如片剂， 锭剂和胶囊， 以及适合于注射或口服的溶液， 包含约 0. 01%到 99%， 最好从约 0. 25%到 75%的活性化合物以及辅料。
[0072] 本发明的范围也包括本发明化合物的无毒性可药用盐。 酸加成盐由混合一 个无毒性可药用酸溶液和本发明的化合物溶液而形成。 所述酸例如盐酸， 富马酸， 马来 酸， 琥珀酸， 乙酸， 柠檬酸， 酒石酸， 碳酸， 磷酸， 草酸等。 碱加成盐由混合一个无毒 性可药用碱溶液和本发明的化合物溶液而形成。 所述碱例如氢氧化钠， 氢氧化钾， 氢胆 碱， 碳酸钠， Tri s， N-甲基-葡萄糖胺等。
[0073] 本发明的药物制剂可以給予任何哺乳动物， 只要他们能获得本发明化合物 的治疗效果。 在这些哺乳动物中最为重要的是人类和兽医动物， 虽然本发明不打算如此 受限。
[0074] 本发明的药物制剂可通过任何途径给药以达到其预期目的。 例如， 可以通 过肠外， 皮下， 静脉， 肌肉， 腹腔内， 透皮， 口腔， 鞘内， 颅内， 鼻腔或外用途径給 药。 作为替代或并行地， 可以通过口服給药。 药的剂量将根据病人的年龄， 健康与体 重， 并行治疗的种类， 治疗的频率， 以及所需治疗效益来决定。
[0075] 本发明的药物制剂可用己知的方式制造。 例如， 由传统的混合， 制粒， 制 锭， 溶解， 或冷冻干燥过程制造。 制造口服制剂时， 可结合固体辅料和活性化合物， 选 择性研磨混合物。 如果需要或必要时加入适量助剂后， 加工颗粒混合物， 获得片剂或锭 剂芯。
[0076] 合适的辅料特别是填料， 例如糖类如乳糖或蔗糖， 甘露醇或山梨醇;纤维素 制剂或钙磷酸盐， 例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘结剂， 例如淀粉糊， 包括玉米淀粉， 小麦淀粉， 大米淀粉， 马铃薯淀粉， 明胶， 黄芪胶， 甲基纤维素， 羟丙基甲基纤维素， 羧甲基纤维素钠， 或聚乙烯吡咯烷酮。 如果需要， 可增加崩解剂， 比如上面提到的淀 粉， 以及羧甲基淀粉， 交联聚乙烯吡咯垸酮， 琼脂， 或褐藻酸或其盐， 如海藻酸钠. 辅 助剂特别是流动调节剂和润滑剂， 例如， 硅石， 滑石， 硬脂酸盐类， 如镁硬脂酸钙， 硬 脂酸或聚乙二醇。 如果需要， 可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。 为此， 可 以应用浓缩糖类溶液。 这个溶液可以含有阿拉伯树胶， 滑石， 聚乙烯吡咯垸酮， 聚乙二 醇和 /或二氧化钛， 漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。 为了制备耐胃液的包衣， 可 使用适当的纤维素溶液， 例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。 可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。 例如， 用于识别或为了表征活性成分剂量 的组合。
[0077] 其他可口服的药物制剂包括明胶制成的压接式胶囊， 以及用明胶和甘油或 山梨醇等增塑剂制成的密封软胶囊。 该压接式胶囊可含有颗粒形式的活性化合物， 与填 料例如乳糖， 粘结剂例如淀粉， 润滑剂例如滑石粉或硬脂酸镁， 以及稳定剂混合而成。 在软胶囊， 活性化合物最好是溶解或悬浮在适当的液体例如油脂或液体石蜡中， 其中可 加入稳定剂。
[0078] 合适于肠外給药的制剂包括活性化合物的水溶液， 如水溶性盐的溶液和碱 性溶液。 此外， 可施用适当的活性化合物的油性注射悬浮液。 合适的亲脂性溶剂或载体 包括油脂例如香油， 合成脂肪酸酯例如油酸乙酯， 甘油三酯或聚乙二醇 400， cremophor, 或环糊精。 水性注射悬浮液可含有增加悬浮液黏度的物质， 例如羧甲基纤维 素钠， 山梨醇， 或葡聚糖。 也可以含有悬浮稳定剂。
[0079] 根据本发明的一个方面， 本发明化合物制成的外用和肠外制剂可应用于治 疗皮肤癌。
[0080] 本发明的外用制剂可通过优选合适的载体来制成油剂， 霜剂， 乳液剂， 药 膏等。 合适的载体包括植物或矿物油， 白矿油 （白软石蜡） ， 支链脂肪或油脂， 动物脂 肪和高分子醇 （大于 c12) 。 优选的载体是活性成分能溶解在其中的那些载体。 也可包括 乳化剂， 稳定剂， 保湿剂和抗氧化剂， 以及如果需要的话， 給予颜色或香味的试剂。 此 外， 这些外用制剂可包含透皮渗透增强剂。 这种增强剂的例子可参见美国专利号 3， 989， 816和 4， 444, 762。
[0081] 霜剂优选用矿物油， 自乳化蜂蜡和水的混合物配制， 与溶解于少量油例如 杏仁油的活性成分混合而成。 一个典型的霜剂例子包括约 40份水， 20份蜂蜡， 40份矿 物油和 1份杏仁油。
[0082] 药膏可以这样配制， 将含有活性成分的植物油例如杏仁油和温热的软石蜡 混合， 然后使该混合物冷却。 一个典型的药膏例子包括约 30 %重量的杏仁油和 70 %重量 的白软石蜡。
[0083] 下列实施例是举例说明， 而不是限制本发明的方法和制剂。 其他对于本领 域技术人员来说是显而易见的， 和在临床治疗中通常会遇到的对各种条件和参数的适当 修改和改进， 都在本发明的精神和范围内。 实施例
一般性说明
所用试剂均是商品品质。 溶剂均按照标准方法干燥纯化。 质谱分析数据用电喷雾 的单四级杆质谱仪测定 （平台 II， 安捷伦 6110 ) 。 氢谱由温度 300°K下的 Brticker AMX 300 兆核磁仪测定。 化学位移记录为以 TMS作为内标 （0. OOppm) 从低场始以 ppm为单 位， 耦合常数 J值以赫兹为单位。 实施例 1
3- (2-甲氧基苯基) -6- (3-甲基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪 a) 6-氯-3- (2-甲氧基苯基） - [1，2，4]三唑[4，3-6]哒嗪。 烧瓶中加入 3， 6_二氯哒 嗪 （1, 48 g, 10 mmol ) ， 2-甲氧基苯基酰肼 （1. 66 g, lOmmol ) 禾卩 50 mL正丁醇。 将此 混合物在 120 X下搅拌 10小时。 待冷却至室温后， 过滤收集滤饼， 将滤饼干燥后得粗 产品。 粗产品以柱层析法提纯 （洗脱剂为石油醚： 乙酸乙酯 = 1： 1 ) 得本标题化合物， 该化合物为黄色固体 1. 01克， 收率为 38. 3%。
匿 (DMS0-i/6)： 8. 51 (d， / = 9. 6 Hz, 1H)， 7. 65 (t， / = 8. 9 Hz, 1H)， 7. 56—7. 51 (m， 2H) , 7. 29 (d， J = 7. 8 Hz, 1H)， 7. 16 (t， / = 9. 0 Hz, 1H)， 3. 78 (s， 3H) .
b) 3- (2-甲氧基苯基） -6- (3-甲基苯基） - [1，2，4]三唑[4，3-0]哒嗪。 向 20 mL甲苯 和 5 mL水中加入 6-氯 -3- (2-甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3_b]哒嗪 (100 mg, 0. 384 mmol) 三甲基苯硼酸（78.2 mg, 0.575 mmol) 四三苯基膦钯（21.9 mg, 0.019 mmol) 和碳酸铯（64.5 mg, 0.767 mmol)。 该混合物在氩气保护下搅拌回流过夜。 将该混合物过 滤， 滤液水洗 （50 mL X 2) 后， 用无水硫酸钠干燥。 溶剂蒸干后的残余物用柱层析法提 纯 （洗脱剂为石油醚： 乙酸乙酯 = 1： 1) 得标题化合物， 该化合物为黄色固体 78.5 mg, 收率为 64.7%。
NM (DMS0— 4)： 8.49 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.96 (d， / = 9.6 Hz, 1H) , 7.82-7.77 (m， 2H) , 7.66-7.61 (m, 2H) , 7.46-7.30 (m, 3H), 7.15 (t， J = 7.5 Hz, 1H), 3.81 (s， 3H) , 2.39 (s， 3H). MS: m/z 317.2 [M+H+]。
以下化合物应用类似于所描述的实施例 lb 的合成方法制得， 起始原料为 6-氯 -3- (2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4, 3-6]哒嗪和所对应的苯硼酸。 实施例 2
3_(2-甲氧基苯基) -6-(3_甲基 -4-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪
NMR (DMS0-d)： 8.43 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.94 (d， J = 9.6 Hz, 1H)， 7.87-7.81 (m， 2H), 7.66—7.59 (m， 2H), 7.31 (d， J = 8.4 Hz, 1H)， 7.17 (t， J = 7.5 Hz, 1H), 7.10 (d， J = 9.7 Hz, 1 H)， 3.85 (s， 3H)， 3.81 (s， 3H)， 2.21 (s， 3H). MS: m/z 347.2 [Μ+Η+]· 实施例 3
6-(3-氯 -4-甲氧基苯基) -3-(2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪
NMR (DMS0-4)： 8.48 (d, / = 9.6 Hz, 1H)， 8.08—7.98 (m， 3H)， 7.67—7.60 (m, 2H)， 7.33 (d， / = 9.0 Hz, 2H)， 7.18 (t， / = 7.5 Hz, 1H)， 3.93 (s， 3H)， 3.81 (s, 3H). MS: m/z 367.1 [M+H+] . 实施例 4
6_(3-氟 -4-甲基苯基) -3-(2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪
醒 R (DMS0- )： 8.51 (d， J = 9.9 Hz, 1H)， 8.01 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.79-7.75 (m， 2H) , 7.67-7.61 (m， 2H) , 7.47 (t， / = 8.4 Hz, 1H)， 7.32 (d， J = 8.1 Hz, 1H)， 7.18 (t, J = 7.5 Hz, 1H)， 3.79 (s, 3H) , 2.30 (s, 3H) . MS: m/z 335.2 [M+H+] . 实施例 5
6_(3-氟 -4-甲氧基苯基) -3-(2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.48 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.99 (d， J = 9.6 Hz, 1H)， 7.88-7.82 (m， 2H) , 7.67-7.60 (m, 2H) , 7.37-7.30 (m, 2H), 7.18 (t， / = 7.5 Hz, 1H)， 3.91 (s， 3H), 3.80 (s， 3H). MS: m/z 351.2 [M+H+] . 实施例 6
6- (4-乙氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.44 (d, / = 9.6 Hz, 1H)， 7.97—7· 94 (m, 3H)， 7.66—7· 58 (m， 2H), 7.31 (d， / = 8.1 Hz, 1H) , 7.17 (t， / = 7.5 Hz, 1H), 7.08 (d， J = 8.7 Hz, 2H), 4.10 (q， / = 6.9 Hz, 2H) , 3.80 (s， 3H) , 1.35 (t， J = 6.9 Hz, 3H). MS: m/z 347.2 [M+H+] . 实施例 7
3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-三氟甲基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3- ]哒嗪
NMR (DMS0— ）： 8.56 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 8.22 (d， J = 8.1 Hz, 2H) , 8.05 (d， J = 9.6 Hz, 1H)， 7.93 (d, / = 8.1 Hz, 2H)， 7.67—7.61 (m, 2H)， 7.31 (d， J = 8.1 Hz, 1H)， 7.18 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 3.80 (s， 3H) . MS: m/z 371.1 [M+H+] . 实施例 8
3_(2-甲氧基苯基) -6-(2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪
NMR (DMS0— ）： 8.09 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.71 (d, J = 9.3 Hz, 1H)， 7.62-7.59 (m, 2H) , 7.54-7.43 (m, 2H) , 7.13—7,01 (m， 4H)， 3.88 (s, 3H) , 3.85 (s， 3H). MS: m/z 332.2 [Μ+Η+]· 实施例 9
3- (2-甲氧基苯基) -6-苯基 - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪
NM (DMS0-cfi)： 8.51 (d J = 9.6 Hz, 1H)， 8.02-7.98 (m, 3H), 7.67-7.60 (m 2H), 7.57-7.55 (m 3H)， 7.31 (d / = 8.1 Hz, 1H)， 7.18 (t / = 7.5 Hz, 1H)， 3.80 (s, 3H). MS: m/z 303.1 [M+H+] . 实施例 10
3-(2_甲氧基苯基) _6-(3-甲氧基苯基） - [1 2 4]三唑 [4 3 ]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.50 (d / = 9.6 Hz, 1H)， 8.00 (d J = 9· 6 Hz, 1H) 7.66-7.30 (m 5H) , 7.18 (d / = 7.5 Hz 1H), 7.15-7.11 (m, 2H), 3.83 (s 3H) 3.81 (s, 3H). MS: m/z 333.2 [M+H+] . 实施例 11
6- (4-乙基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1 2 4]三唑 [4 3-6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.48 (d, / = 9.6 Hz, 1H), 7.98-7.91 (m, 3H)， 7.66-7.59 (m 2H), 7.39 (d J = 8.4 Hz, 2H) , 7.31 (d / = 8.1 Hz, 1H), 7.17 (t J = 7.5 Hz, 1H)， 3.80 (s 3H), 2.71-2.63 (m 2H) , 1.21 (t / = 7.5 Hz, 3H). MS: m/z 331.2 [Μ+Η+]· 实施例 12
6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1,2 4]三唑 [4， 哒嗪
NMR (DMS0— ： 9.44 (s 1H)， 8.41 (d / = 9.6 Hz, 1H) 7.91 (d / = 9,9 Hz, 1H)， 7.66-7.58 (m, 2H) 7.52—7.43 (m, 2H) , 7.32 (d / = 8.4 Hz, 1H) 7.17 (t / = 7.5 Hz, 1H)， 7.06 (d, J = 8.7 Hz, 1H) 3.83 (s, 3H) , 3.81 (s, 3H). MS: m/z 349.1 [Μ+Η+]· 实施例 13
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-三氟甲氧基苯基） - [1 2 4]三唑 [4 3-6]哒嗪 a) 3-氯 -6- (4-甲氧基苯基）哒嗪。 向 300 mL甲苯和 100 mL水中加入 3 6_二氯哒 嗪 （10 g 67 ol 4-甲氧基苯硼酸（12.2 g， 80 ol)、 四三苯基膦钯（1.5 g, 1.34 mmol) 和碳酸铯（43.6 g 134 mmol)。 该混合物在 100 °C氩气保护下搅拌 16小时。 待 反应液冷却后， 加入 200 mL乙酸乙酯和 200 mL水摇匀分层， 水相再用 200 mL乙酸乙酯 萃取。 将合并的有机相用食盐水洗过后浓缩， 所得残余物用柱层析法提纯 （洗脱剂为石 油醚： 乙酸乙酯 = 2： Γ?: 1) 得标题化合物， 该化合物为黄色固体 11.0 g， 收率为 74%,,
b) 2-酰肼基 -5-(4_甲氧基苯基）哒嗪。 3-氯 -6-(4_甲氧基苯基）哒嗪 （6.0 g， 27.2 mmol) 与 50 mL 85%的水合肼混合回流 3小时。 待反应液冷却至室温后， 将其在 4 °C下存放 3小时。 将沉淀过滤并在真空下抽干得到标题化合物。 该化合物为淡黄色固体 4.0 g, 收率为 68%。 MS: m/z 317.1 [M+H+]。
c) Λ^-(6-(4-甲氧基苯基)哒嗪 -3-位) -2- (三氟甲氧基)苯基酰肼。 向 20 mL二氯 甲烷中加入 2-酰肼基 -5- (4-甲氧基苯基）哒嗪 （0.20 g， 0.93 mmol) ， 2_三氟甲氧基 苯甲酸 （0.23 g， 1.10 mmol) ， 卡特缩合剂 （B0P, 0.49 g， 1.1 mmol) 和 N_甲基吗 啡啉 （0.33 g， 3.3 mmol) 。 该混合物在氩气保护下， 室温中搅拌过夜。 向反应混合液 中加入硅胶并旋干浓缩。 将此残余物用柱层析法 （洗脱剂为石油醚： 乙酸乙酯 = 2： Γθ: 1) 提纯后得标题化合物， 该化合物为黄色油状物 0.2 g, 收率为 53%。 MS: m/z 405.1 [M+H+]。
d) 6_(4-甲氧基苯基） _3-(2-三氟甲氧基苯基） _[1，2，4] 三唑 [4， 3- ]哒嗪。 将 -(6- (4-甲氧基苯基）哒嗪 -3-位） -2- (三氟甲氧基）苯基酰肼与 10 mL三氯氧磷混合， 并在 100 X下搅拌过夜。 待反应液冷却至室温后将其在真空下浓缩。 所剩残余物与 20 mL二氯甲垸和 20 mL冰水混合，并用饱和碳酸钠溶液将其 pH值调至大于 10。 待两相分 层后， 水相用二氯甲烷萃取（10 mL X 3)。 合并有机相用饱和食盐水洗涤（15 mL x 3)后 在真空下旋干浓缩。 所得残余物用柱层析法 （洗脱剂为石油醚： 乙酸乙酯 = 2： Γ0: 1) 提纯得到标题化合物， 该化合物为黄色油状物 20.6 mg， 收率为 10.8%。
NM (DMS0-d6)： 8.51 (d， J = 9.9 Hz, 1H)， 8.05—7.99 (m， 4H)， 7.83-7.77 (m, 1H)， 7.70-7.65 (m, 2H) , 7.11 (d, / = 9.0 Hz, 2H) , 3.83 (s， 3H) . MS: m/z 387.1 [M+H+]。
以下化合物应用类似于描述的实施例 13c_d的合成方法制得， 起始原料为 2-酰肼 基 -5- (4-甲氧基苯基)哒嗪和所对应的取代苯甲酸。 实施例 14
3- (2， 4-二甲氧基苯基 )-6- (4-甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4,3- ]哒嗪
NMR (DMSO- ) : 8.41 (d， / = 9.9 Hz, 1H)， 7.99-7.92 (m, 3H), 7.52 (d， / = 9.0 Hz, 1H)， 7. 10 (d, / = 9.0 Hz, 2H) , 6.83 (d， J = 2.4 Hz, 1H)， 6.74 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 3.89 (s， 3H)， 3.83 (s， 3H)， 3.79 (s， 3H). MS: m/z 363.2 [M+H+] . 实施例 15
6_(4-甲氧基苯基) _3-(2-甲氧基 -4-硝基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪
3/4 匪 R (DMS0-c6)： 8.50 (d， / = 9.0 Hz, 1H)， 8.06-7.95 (m, 6H)， 7. 10 (d， J = 8.7 Hz, 2H), 3.96 (s， 3H) , 3.83 (s， 3H). MS: m/z 378.2 [M+H+] . 实施例 16
3_(5-氯 -2-甲氧基苯基) _6-(4-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.47 (d, / = 9.9 Hz, 1H), 8.00-7.97 (m, 3H)， 7.71-7.67 (m， 2H), 7.36-7.33 (m, 1H), 7. 11 (d， / = 9.0 Hz, 2H) , 3.83 (s， 3H), 3.80 (s， 3H). MS: m/z 367. 1 [Μ+Η+]· 实施例 17
3_(2-甲氧基苯基) -6-(4-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.44 (d， J = 9.6 Hz, 1H)， 7.99—7· 94 (m, 3H)， 7.66-7· 59 (m, 2H)， 7.31 (d, / = 8.4 Hz, 1H)， 7.20—7.08 (m, 3H)， 3.83 (s， 3H)， 3.80 (s， 3H). MS: /??/ 333.2 [M+H+]. 实施例 18
3- (2， 3-二甲氧基苯基 )-6- (4-甲氧基苯基) - [1，2，4]三唑[4，3-6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.46 (d, J = 9.9 Hz, 1H)， 8.00—7· 97 (m, 3H)， 7.36-7· 20 (m， 3H), 7. 10 (d， / = 9, 0 Hz, 2H) , 3.92 (s， 3H) , 3.82 (s， 3H) , 3.71 (s， 3H) . MS: m/z 363.2 [M+H+] . 实施例 19
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2， 3， 4-三甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.44 (d， / = 9.9 Hz, 1H)， 8.02-7.95 (m, 3H)， 7.38 (d， /= 8.7 Hz, 1H)， 7.10 (d, / = 9.0 Hz, 2H) , 7.03 (d， J = 8.7 Hz, 1H)， 3.92 (s， 3H)， 3.86 (s, 3H), 3.83 (s， 3H)， 3.75 (s, 3H) . MS: m/z 393.2 [M+H+] . 实施例 20
3-(4-氟 -2-甲氧基苯基) _6-(4-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.45 (d, / = 9.9 Hz, 1H)， 8.00-7· 95 (m, 3H)， 7.68-7.63 (m， 1H)， 7.24 (d， J = 11.4 Hz, 1H)， 7.10 (d， / = 9.0 Hz, 2H) , 7.02 (t， J = 8.4 Hz, 1H), 3.83 (s， 3H) , 3.81 (s， 3H). MS: m/z 351.2 [M+H+] . 实施例 21
6_(4-甲氧基苯基) _3-(2-甲氧基 -5-甲基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.43 (d, / = 9.9 Hz, 1H)， 7.98-7· 93 (m, 3H)， 7.44-7.40 (m， 2H)， 7.19 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 7.10 (d， / = 9.0 Hz, 2H)， 3.83 (s， 3H)， 3.75 (s， 3H), 2.34 (s， 3H). MS: m/z 347.2 [M+H+] . 实施例 22
3- (2, 5-二甲氧基苯基 )-6- (4-甲氧基苯基) - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.45 (d， J= 9.6 Hz, 1H)， 8.00-7.95 (m, 3H) , 7.26-7.18 (m, 3H), 7.11 (d， / = 9.0 Hz, 2H)， 3.83 (s， 3H) , 3.78 (s， 3H)， 3.74 (s， 3H) . MS: m/z 363.2 [Μ+Η+]· 实施例 23
6- (4-甲氧基苯基) -3- (2-丙氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.44 (d， J = 9· 9 Hz, 1H)， 7.99—7· 96 (m, 3H)， 7.59 (d J = 7.5 Hz, 2H)， 7.30-7.08 (m, 4H)， 3.99 (t， / = 6.5 Hz, 2H) , 3.83 (s， 3H) : 1.44-1.37 (m， 2H) , 0.55 (t， / = 7, 4 Hz, 3H) . MS: m/z 361.2 [Μ+Η+]· 实施例 24
3- (4-氯 -2-甲氧基苯基) -6- (4-甲氧基苯基) -[1,2, 4]三唑 [4， 3~b]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.46 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.99 (d， / = 8.4 Hz, 3H) , 7.64 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 7.42 (s， 1H)， 7.25 (d， J = 7.8 Hz, 1H)， 7.10 (d， J = 8.4 Hz, 2H), 3.83 (s， 6H). MS: m/z 367.1 [Μ+Η+]· 实施例 25
6-(4_甲氧基苯基) _3-(2-甲氧基 -4-甲基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪
匪 R (DMS0-c6)： 8.44 (d, / = 9.6 Hz, 1H)， 8.00—7· 95 (m, 3H)， 7.47 (d， / = 7.5 Hz, 1H)， 7.14-7.09 (m, 3H)， 6.99 (d， / = 7.8 Hz, 1H)， 3.83 (s， 3H) , 3.78 (s, 3H)， 2.46 (s, 3H). MS: m/z 347.2 [M+H+] . 实施例 26
6_(3-氨基 -4-甲氧基苯基) _3-(2-甲氧基 -4-甲基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.36 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.81 (d， / = 9.9 Hz, 1H)， 7.46 (d， J = 7.8 Hz, 1H)， 7.22 (m， 2H) , 7.12 (s， 1H)， 6.95 (m, 2H), 5.03 (s， 2H), 3.82 (s， 3H), 3.80 (s， 3H), 2.45 (s， 3H) . MS: m/z 362.2 [Μ+Η+]· 实施例 27
6- (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1,2， 4]三唑 [4， 哒嗪
匪 R (DMS0- )： 8.43 (d， J = 9.6 Hz, 1H)， 7.89 (d， / = 9.9 Hz, 1H) , 7.67-7.59 (m， 2H)， 7.52-7.43 (m， 2H)， 7.31 (d， / = 8.4 Hz, 1H)， 7.17 (t, / = 7,5 Hz, 1H)， 7.07 (d， J = 8, 4 Hz, 1H)， 3.88 (s， 3H)， 3.82 (s, 3H) . MS: m/z 348.2 [M+H+] . 实施例 28
6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (4-氯 -2-甲氧基苯基） - [1，2，4]三唑[4，3-6]哒嗪
NMR (DMSO-oQ： 9.47 (s， 1H)， 8.42 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.93 (d， J : 9.9 Hz, 1H)， 7.64 (d， J = 8· 1 Hz, 1H)， 7.50-7.43 (m， 3H)， 7.25 (d， / = 8.1 Hz, 1H)， 7.06 (t, / = 8.7 Hz, 1H)， 3.84 (s, 3H)， 3.83 (s, 3H) . Ms: m/z 383.1 [M+H+] . 实施例 29
6_(3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3-(2-甲氧基 -4-甲基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪
NMR (DMSO-d)： 9.49 (s， 1H)， 8.38 (d， / = 9.9 Hz, 1H)， 7.89 (d， J = 9.6 Hz, 1H)， 7.51-7.45 (m, 3H)， 7.14 (s， 1H)， 7.05 (d， J = 8.4 Hz, 1H)， 6.98 (d， / = 7.5 Hz, 1H)， 3.82 (s, 3H)， 3.79 (s, 3H)， 2.45 (s， 3H). MS: m/z 363.2 [M+H +] . 实施例 30
6- (3-氨基 -4-甲氧基苯基) -3- (4-氯 -2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪
NMR (DMSO-d)： 8.39 (d， / = 9.9 Hz, 1H)， 7.86 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.63 (d， J = 8.4 Hz, 1H)， 7.39 (s， 1H), 7.26-7.24 (m， 3H) , 6.93 (d， / = 9.0 Hz, 1H), 5.05 (s， 2H), 3.85 (s， 3H), 3.83 (s， 3H).Ms: m/z 382.2 [M+H+] . 实施例 31
3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪 a) 3-氯 -6-(4-甲基苯基）哒嗪。 该标题化合物应用 3， 6-二氯哒嗪和 4_甲基苯基 硼酸为起始原料， 按照所描述实施例 13a 的合成方法制得。 该化合物为黄色固体。 MS: m/z 205.2 [M+H+]。
b) 3-(2-甲氧基苯基) -6-(4-甲基苯基) -[1，2，4] 三唑 [4，3-/J哒嗪。 该标题化合 物应用 3-氯 -6-(4-甲基苯基)哒嗪、 水合肼和 2-甲基苯甲酸为起始原料， 按照类似所描 述实施例 13b-d的合成方法制得。 该化合物为黄色固体。 NMR (丽 S0_d6) : 8.46 (d， J = 9.9 Hz, 1H)， 7.96-7.88 (m, 3H) , 7.65-7.60 (m, 2H)， 7.36-7.29 (m, 3H) , 7.17 (t， J= 7.2 Hz, 1H)， 3.79 (s， 3H) , 2.36 (s， 3H) . MS: m/z 317.2 [M+H+]。 实施例 32
3- (2-甲氧基 -5-硝基苯基) -6- (4-甲基 -3-硝基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3-6]哒嗪 将 3-(2-甲氧基苯基） -6-(4-甲基苯基） -[1，2，4] 三唑 [4， 3-6]哒嗪 （150 mg， 0.475 mmol) 溶于 10 mL浓硫酸。 向反应液中滴加浓硝酸 （26.45 μ?, 379 Mmol ) 并 保证反应液在冰盐浴中一直保持低于 -5 °C。 随后将反应混合物继续保持 -5 °C搅拌 3 小 时。 将反应液倒入冰中， 并用碳酸钠将其 PH值调至等于 8， 然后用乙酸乙酯（50 mL x 2) 萃取。 萃取液真空下旋干得粗品化合物。 粗品化合物用柱层析法 （洗脱剂为石油醚： 乙 酸乙酯 =1: 1) 提纯得到标题化合物， 该化合物为黄色固体 21 mg， 收率为 12.3%。
NMR (DMS0-d6)： 8.62-8.52 (m， 4H), 8.27 (d， / = 8.1 Hz, 1H)， 8.13 (d， / = 9.9 Hz, 1H)， 7.70 (d， / = 8.1 Hz, 1H)， 7.57 (d， / = 9.3 Hz, 1H)， 3.98 (s， 3H) , 2.85 (s, 3H). MS: m/z 362.2 [M+H+],, 实施例 33
3- (2-甲氧基 -5-硝基苯基) -6- (3-甲基 -4-硝基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 哒嗪 标题化合物应用 3_(2-甲氧基苯基） -6-(3_甲基苯基) -[1，2，4] 三唑 [4， 哒嗪 为起始原料， 按照类似所描述的实施例 32 的合成方法制得。 该化合物为白色固体。
NMR (DMS0-d6)： 8.59-8.44 (m, 3H), 8.10 (d， J = 8.1 Hz, 1H)， 7.72-7.60 (m， 3H): 7.46 (d， / = 9.0 Hz 1H), 3.90 (s， 3H) , 2.47 (s， 3H). MS: m/z 407.1 [M+H+]。 实施例 34
3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲基 -3-硝基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪 a) 3-氯 -6-(4-甲基 -3-硝基苯基)哒嗪。 标题化合物应用 3-氯 -6- (4-甲基苯基）哒 嗪为起始原料， 按照类似所描述实施例 32 的合成方法制得。 该化合物为黄色固体。 MS: m/z 249.9 [M+H+]。
b) 3- (2-甲氧基苯基) -6- (4-甲基 -3-硝基苯基) -[1， 2， 4] 三唑 [4， 哒嗪。 标题 化合物应用 3-氯 -6- (4-甲基 -3-硝基苯基)哒嗪、 水合肼和 2-甲氧基苯甲酸为起始原料， 按照类似所描述的实施例 13b-d的合成方法制得。 该化合物为黄色固体。
NMR (DMS0- d6)： 8.59-8.54 (m， 2H)， 8.26 (d， / = 8.1 Hz, 1H)， 8,08 (d， / = 9.6 Hz, 1H)， 7.71-7.62 (m, 3H) , 7.33 (d， / = 8.1 Hz, 1H)， 7.18 (t， / = 7.5 Hz, 1H)， 3.82 (s， 3H)， 2.58 (s， 3H). MS: m/z 362.2 [M+H+]。 实施例 35
6- (3-氨基 -4-甲基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1, 2， 4]三唑 [4， 3_6]哒嗪 向 10 mL 乙醇和 50 mL水中加入 3_(2-甲氧基苯基） _6_ (4-甲基 _3_硝基苯基） - [1, 2, 4] 三唑 [4， 3- ]哒嗪（20 mg， 55 Wnol) , 铁粉 （15 mg， 276.7Wnol) 和氯化铵 (1.48 mg， 27.67Hmol) ， 将该混合物在 70°C下搅拌 3小时。 然后在 50°C真空下旋干 乙醇， 并用乙酸乙酯萃取 (30 mL X 4)。 合并的有机相用无水硫酸钠干燥， 真空下旋干后 得标题化合物。 该化合物为黄色固体 6. 0mg， 收率为 33%
NMR (DMS0-d6) 8. 41 (d / = 9. 0 Hz, 1H 7. 80 (d / = 9. 0 Hz, 1H 7. 40-7. 01 (m 7H) 5. 17 (s 2H) , 3. 81 (s, 3H 2. 11 (s, 3H) . MS : m/z 332. 1 [M+H+] 实施例 36
应用标准的 MTT癌细胞毒性试验确定 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1 2, 4]三唑 [4 3-b]哒嗪与其相似物对细胞增殖的抑制效果 本研究采用了人肺癌细胞 A549、 乳腺癌细胞 T47D、 肝癌细胞 IfepG2 和 SMMC7721 , 以及小鼠黑素瘤细胞 B16F10并使用 MTT染色法来测定化合物对癌细胞生长的 抑制作用。 细胞培育在 37°C， 含 5% C02的培养箱中进行。 培养基釆用美国细胞菌种保存 中心 (ATCC) 建议的相应细胞培养液， 并加入青霉素（100 U/ml) , 链霉素（100 lg/ml)和 10%胎牛血清 （杭州四季青生物工程材料 （中国） 有限公司） 。 细胞在约 80 %汇合时用 胰酶消化收获， 进行细胞计数后离心并重新悬浮于新鲜培养液中传代。 实验前， 将一定 数量 （ pG2 T-47D和 A549细胞 3000个 /孔， SMMC-7721细胞 5000个 /孔， B16F10细 胞 2000个 /孔） 的细胞接种到 96孔细胞培养板上， 每孔 100 μ 1。 细胞在 5% C02 37 °C 培养箱中培养过夜。 次日， 加入 100 μ ?含待测化合物 （浓度从 10 μ Μ到 1 ηΜ)和阳 性化合物的培养液， 空白对照组加入 100 μ 1培养液。 每个浓度设 3个平行孔以保证数据 准确性。 在 5% C02 37°C培养箱中继续培养 48-72小时后， 每孔加入 20 μ 1 含 5mg/ml MTT (3- (4, 5-dimethylthiazole-2-yl) -2, 5-diphenyltetrazoliumbromide, Sigma) 的 PBS o 细胞返回培养箱中继续培养 4小时后， 吸去培养液， 然后每孔加入 100 μ ? DMSO o 培养板在室温下用振荡器轻微避光振荡 10 分钟。 用多功能读数仪 (Varioskan Flash, Thermo Fisher Scientific)， 在参考波长 660 检测波长 550nm条件下测定吸光度值 (0D) 。 相对吸收值为 550 减去 660nm。 以化合物浓度为横坐标， 相对吸收值为纵坐 标绘图， 数据拟合用 lg (IC5。） 公式经 Prism软件 （GraphPad Software, Inc)处理。 图 形曲线拟合公式如下： 相对 0D值=最低 0D值 + (最高 0D值 -最低 0D值) / (1+1(Γ (浓度- LogIC5。)）。 其中， 最低 0D值是阳性化物 100%抑制时的吸光度值， 最高 0D值是空白对照 组的吸光度值。 计算出的 IC5。值是指特定化合物的细胞毒性作用。
化合物抑制癌细胞生长的 IC5。值汇总在表格 I中。
表格 I. 化合物抑制癌细胞生长的 IC5。值 IC5。 （nM) 实施例 A549 HepG2 SMMC7721 T47D 1 〉10000 〉10000 〉10000 〉10000 2 312 217 79 285 3 115 165 39 153 4 389 272 128 301 5 126 67 36 106 6 210 328 75 192 7
〉10000 8 〉10000 〉10000 〉10000 〉10000 9 〉10000 〉10000 〉10000 〉10000 10 〉1 ) 10000 ) 10000 11 200 268 128 412 12 45 62 〉10000 26 13 238 176 41 186 14 55 185 50 132 15 16 41 33 39 16 77 90 44 201 17 154 91 36 170 18 〉 〉10000 〉10000 19
1139 20 68 26 13 40 21 113 77 34 109 22 98 75 46 106 23 135 73 39 80 24 19 13 15 12 25 72 42 22 51 26 33 28 34 24 27 51 34 38 29 28 2. 2 1. 8 〉 29 25 19 〉10000 20 30 4. 7 3. 1 4. 7 3. 2 31 185 276 26 215 32
1381 33 〉10000 〉10000 〉10000 〉10000 34 〉42 3240
35 235 284 147 313 化合物抑制 B16F10细胞生长的 IC5。值汇总在表格 I I中。
表格 I I. 化合物抑制 B16F10细胞生长的 1( 5。值 因此， 经鉴定 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3- 6]哒嗪与其相似物在癌细胞中是有效的细胞增殖抑制剂。 实施例 37
确定 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1， 2， 4]三唑 [4， 3 ]哒嗪与其相似 物在癌细胞中的诱导细胞凋亡效果
人乳腺癌细胞 T47D在 DMEM/F12+10%FBS培养基中生长。 实验前， 将 20000个细胞 / 孔接种于 96孔细胞培养板中并返回 5% C02细胞培养箱在 37 ° C培养 18-24小时。 吸去 原培养液后， 每孔分别加入 180 μ 1新鲜培养液， 然后每孔加入 20 μ 1含 10% DMS0及 10 倍梯度稀释的化合物 （参考化合物物或待测化合物） 的培养液。 振荡混匀后置于 5% C02 培养箱 37° C培养。 24h后， 将培养板于 1000g离心 5 分钟， 甩去上清液， 每孔加入 50 μ 1 细胞裂解缓冲液 ( 10mM Tris, ρΗ7· 5， 0. 1Μ NaCl, 1 Mm EDTA, 0. 01% Triton X-100)在 4° C水平振荡 30 分钟。 随后在 4° C 1000g离心 10 分钟。 然后每孔分别吸 取 20 μ 1上清液并移至相应的 384孔黑板中。 随后每孔加入 20 μ 1 含 20 μ Μ caspase-3 荧光底物（（Ac-DEVD) 2-R110， AnaSpec Cat #60304-5)的 caspase-3 检测缓冲液 （ 20mM PIPES, pH7. 4, 4Mm EDTA and 0. 2% CHAPS) 。 混匀后于 37° C培育 3h。 用 ex: 496nm， em： 520nm 波长检测每个孔的荧光强度 (Varioskan Flash, Thermo Fisher Scientific),, 化合物对 caspase-3 的激活作用以 RFU和化合物浓度为坐标绘图测定。 EC5。值以 S形剂量反应曲线方程拟合测定（GraphPad Software, Inc)。
化合物诱导 T47D细胞凋亡的 EC5。值总结在表格 I I I中。
表格 I I I . 化合物诱导 T47D细胞凋亡的 EC5。值 实施例 EC5。 （nM)
[0084] 因此， 经鉴定 6- (3-羟基 -4-甲氧基苯基) -3- (2-甲氧基苯基） - [1，2，4]三 唑 [4，3-/J哒嗪 （实施例 12 ) 与其相似物在人乳腺细胞 T-47D 中是有效的细胞凋亡诱导 物。
[0085] 虽然已经充分地描述了本发明， 但是本领域技术人员应当理解， 可在不影 响本发明范围或其任何实施方案的情况下， 在广泛且等同的条件、 制剂和其它参数范围 内进行相同实施。 本文所引用的所有专利、 专利申请和出版物都全文引入本文以供参 考。
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