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实验方法原理
用稀醋酸液，将血液稀释并破坏红细胞，混匀后充入计数池，在显微镜计数一定体积内的白细胞计数，，经换算求得每升血液中的白细胞数，常用有以下两种方法：l％盐酸；2％醋酸
试剂、试剂盒
仪器、耗材
1. 取小试管二支，加白细胞稀释液0.38ml．2. 用微量吸管准确吸取末梢血20微升或抗凝血20微升．3、擦去管尖外部余血，将吸管插入稀释液底部。轻轻注入，吸取上清液清洗3次，摇匀。4. 将计数板和盖片擦净，盖片盖在计数池上再用微量吸管吸入悬液，充入清洁的计数池与盖玻片间的细缝隙中，静止2-3分钟，待细胞下沉．5、用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数．5. 用低倍镜计数四角的四个大方格内的白细胞数;6. 计算（四个大方格内白细胞数／4）×10×20×106＝白细胞数/升实验报告方式：ΔΔΔ×109/L参考值：成　人：　　　（4－10）×109/L新生儿：　　　（15－20）×109/L6月－2岁　　 （11-12）×109/L
l. 加稀释液应固定用甲级1毫升吸管或标准的0.38mL加样器．2. 白细胞数太低者（＜2×109/L） 可数8个大方格内的白细胞数或重新取40ul计数结果除以2，白细胞太高者可增加稀释倍数重新计数．3. 白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，因此，在病理情况下，外周血出现大量有核红细胞时应于减去WBC／升＝（校正前有核cell／升）×（100／100+分类计数10O个WBC时的有核细胞数）．
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血细胞计数仪白细胞分类和显微镜白细胞分类的对比
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血细胞计数仪白细胞分类和显微镜白细胞分类的对比
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【求助】小鼠白细胞计数方法
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这个帖子发布于13年零57天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我们想手工计数小鼠白细胞及中性粒白细胞，请有经验的高手指教一下：稀释液的配制、染色方法等。先谢了！
不知道邀请谁？试试他们
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我原来做过这个实验，把鼠血置于肝素浸泡过的小指管中，我们是送到积水潭医院做的，计数白细胞和中性粒细胞好像没有稀释，涂片，用Giemsa染色。计数。
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我只做过大鼠的白细胞计数，方法如下：
取鼠血（一次性采血可腹主动脉取血，多次采血可尾静脉取血）100μl，加白细胞稀释液100μl放入AP管，轻轻混匀。用加样器取一滴将白细胞混悬液滴入计数池内，静置2分钟，待白细胞下沉后计数。在低倍镜下，白细胞呈园形，浆透亮，核呈紫黑色，稍有折光，借此特点可与杂质相区别。计数计数池四角的 4 个大方格中所有的白细胞数。细胞数/ml=（4大格细胞总数/4）×104×2个/ml
白细胞稀释液配置：取冰醋酸1.5mL和1%龙胆紫1 mL，混匀，加蒸馏水至100mL。如果还要做白细胞分类将进行以下操作：制作血涂片，瑞氏 (wright) 染色（Giemsa染色也行），显微镜检查。（制作血涂片和显微镜检查可参考诊断书和组胚书）
瑞氏染液配置：瑞氏染料 ( 伊红和美蓝 )0.1 克溶于纯甲醇 60m1 中。
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嘻嘻,小鼠白细胞计数,想当年真是急煞我了,不过,好在已经都解决了,现在讲讲白细胞计数和分类计数时我的想法和一点经验.白细胞计数:1
白细胞稀释液配制
取冰醋酸1.5mL和1%龙胆紫1 mL，混匀，加蒸馏水至100mL。有的文献说是龙胆紫一定的摩尔浓度我忘记了,不过,白细胞稀释夜就是为了用乙酸把红细胞破坏掉,不过在计数时我还是看到很多很多的红细胞岛.配制完毕后可以用滤纸过滤一下2　取血　　于小试管中加入稀释液　０．３８ｍｌ ， 然后用吸管(临床上常用的可以,一端有黑线红线,好像到黑线是10ul,到红线是20ul,很久了我也不怎么记得了,可以自己量量看),取血０．０２ｍｌ，立即吹入稀释液中，并将吸管壁的血洗入稀释液内，轻轻摇匀。3　计数　　用小滴管自上述摇匀的稀释液中吸取少量液体加入血细胞计数池内 ， 静置１～２分钟，白细胞沉到 计数半底部,不然,各个白细胞在不同的层面会影响计数.必须不断调焦距)在显微镜下用低倍镜计数４个大方格的白细胞总数，然后将该数乘以５０，即得每立方毫米的白细胞数。 白细胞分类计数:我需要计算白细胞的中性粒细胞数,一开始我很傻,不会数白细胞分类,就按照人的粒细胞数的百分比计算,结果怎么也得不到想要的结果.后来才知道人和老鼠差那么多,老鼠的淋巴细胞能占到80-90,粒细胞很少.作实验一定要真人踏实不偷懒!!!嘻嘻后来找到三院检验科的人帮忙,竟然找到主任,主任人很好,义务帮忙了好多,感激不尽!!!下面是网页上贴的教程一、白细胞计数： ( 一 ) 原理 取定量血液经稀释并破坏其中红细胞后，置于血细胞计数盘的计数池内，计数一定容积内的白细胞数，再推算出 1 升血中的白细胞数。 ( 二 ) 材料 1 ．血细胞计数盘及盖玻片。 2 ．显微镜。 3 ．一次性定量采血管 (20ul) 。 4 ．刺血针、棉球。 5 ．小试管、刻度吸管。 6 ．白细胞稀释液。 ( 三 ) 操作 1 ．在小试管中加 0.38ml 白细胞稀释液。 2 ．穿刺采血 ( 同红细胞计数 ) ，用吸管准确吸血 20ц1(mm 3 )(0.02ml) ，擦净吸管外沾附的血液。 3 ．迅速将血轻轻放入上述小试管中，并用上清液吸洗吸管 2 － 3 次，摇匀。 4 ．按红细胞计数的充池方法，将白细胞混悬液滴入计数池内，静置 2 － 3 分钟，待白细胞下沉后计数。 5 ．在低倍镜下，白细胞呈园形，浆透亮，核呈紫黑色，稍有折光，借此特点可与杂质相区别。计数计数池四角的 4 个大方格中所有的白细胞数，将总数乘以 50 ，即得每 1 血中白细胞数。参考值 ( 成人 ) ： 4 － 10 × 10 9 /L(4000 － 10000/mm 3 ) 。 计算原理 : 每个大方格面积为 1mm 3 ，计数池深度为 0.1mm ，血稀释 20 倍，故每 1 血中白细胞数为 4 个大方格的白细饱数× 10 × 20 ÷ 4 。又： 1L=10 6 ul 。 ( 四 ) 注意事项 1 ．器材需洁净，干燥。 2 ．取液量，取血量要准确，充池前注意混匀悬液，充池液量应适当，以免人为增加或缩小计数池容积。 3 ．计数后，如各大方格间细胞数相差超过 10 个，示充池不均匀，需重新充池计数。 二、白细胞分类 1 ．血涂片的制作 ( 参见图 2 － 1) 从采血针眼处挤出绿豆大小血滴，用清洁玻片面的一端轻轻接触血滴，使血滴附于玻片面上，注意勿触及皮肤，否则血在玻片上就不能成滴。 另取边缘平滑的玻片作为推片：以推片的一端放在血清的前方，逐渐后移，接触血滴并待血滴沿推片边缘均匀展开，然后将推片与玻片保持 30 － 45 度角，轻轻用力，均匀而迅速地将推片沿玻片表面推至玻片另一端，形成头体尾明显的舌形血膜。立即将玻片摇动，使其快速干燥，忌热力干燥。 注：血膜厚度与血滴大小、推片角度和速度有关，血滴大，角度大，速度快则血膜厚，反之则薄。 向后接触血滴 血滴均匀展开 图 2 － 1 血涂片的制作 2 ．瑞氏 (wright) 染色 瑞氏染液，瑞氏染料 ( 伊红和美蓝 )0.1 克溶于纯甲醇 60m1 中。 缓冲液 (pH6.4 － 6.8) ， 1% 磷酸二氢钾 30ml 加 1% 磷酸氢二钠 20ml ，再加蒸馏水至 1000ml, 取已干燥的血涂片，用蜡笔在血膜两端划线，将血涂片放平 ( 置于染色架上 ) ，用滴管滴染液 3 － 5 滴于片上，并用滴管或吸球将染液驱散，使其布满整个血膜，放置约 30 秒钟。加入等量缓冲液，用吸球轻轻吹动，使染液与缓冲液充分混匀，放置染色约 5 － 10 分钟。然后用细小流水自片端冲去染液，切勿先倾去染液再用水冲。血片自然干燥后即可镜检。 3 ．显微镜检查 先用低倍镜观察全片，了解涂片染色、细胞分布情况， 选择细胞分布均匀的部分 ( 常在血膜体尾交界部 ) ，转油镜按一定顺序检查 ( 见图 2 一 2) 。
图－ 2 镜检时血涂片移动的顺序 附件是一些实验试剂和白细胞计数以及分类计数的教程
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关于丁香园当前位置：北京住院医师医学检验科Ⅰ阶段题库＞
问题：  &#xe6
[单选] 显微镜法计数白细胞的计算公式为（）。
A . 白细胞=（2个大方格内的白细胞数／20）&109／LB . 白细胞=（10个大方格内的白细胞数／20）&109／LC . 白细胞=（5个中方格内的白细胞数／20）&109／LD . 白细胞=（4个大方格内的白细胞数／20）&109／LE . 白细胞=（4个中方格内的白细胞数／20）&109／L
流行性脑脊膜炎的致病菌为（） 乙型脑炎病毒。
葡萄球菌。
脑膜炎双球菌。
大肠杆菌。
结核杆菌。
下列支持ITP诊断的是（） PAC3阴性。
脾切除治疗有效。
肝、脾大。
骨髓中产板型巨核细胞增多。
PAIg阴性。
动机的功能不包括（） 激发。
颈内动脉和椎-基底动脉通过几组吻合支形成丰富的侧支循环，其中最重要的是（） 大脑前动脉。
后交通动脉。
Willis环。
大脑后动脉。
前交通动脉。
食管癌好发部位是（） 食管上段。
食管中段。
食管下段。
食管入口部。
显微镜法计数白细胞的计算公式为（）。
参考答案：D
●&&参考解析您现在的位置：>>> 正文
白细胞稀释液（计数液）
白细胞稀释液(计数液)产品简介： 白细胞(White Blood Cell，WBC)，是血液中的一种常见免疫细胞。白细胞稀释液(WBC dilution)作用原理是血液经白细胞稀释液，成熟红细胞全部被溶解，充入计数池后显微镜下计数一定体积内白细胞数，换算求出每升血液中白细胞的数量。该白细胞稀释液仅用于科研领域，不用于临床诊断。自备材料：1、 新鲜全血2、 微量吸管3、 细胞计数板4、 显微镜&操作步骤(仅供参考)： 1、 取小号试管，加WBC dilution 0.38ml。2、 用洁净干燥微量吸管取末梢血10&l，擦去管外余血后加至WBC dilution 底部，轻轻将血放出，再轻吸上层清液清洗吸管2～3次，立即混匀。3、 待红细胞完全破坏，液体变为棕褐色后，再次混匀后充池，注意产生气泡或外溢，室温静置 2～3min，待白细胞沉淀。4、 置于显微镜低倍镜下依次计数四角和 4个大方格内的白细胞数。压线细胞按&数上不数下，数左不数右&的原则进行计数。&注意事项：1、 采血时不能过于挤压，针刺深度应适当。2、 小试管、计数板均应清洁，以免误认细胞。3、 在参考范围内，大方格间的细胞数不应相差8个以上，两次重复计数相差不应超过10%。4、 白细胞数量过多时，可加大稀释倍数；白细胞数量过少时，可计数 8个大方格的白细胞数或大量取血。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。&
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