求：SIGMA一抗稀释液配方的稀释比一般是多少

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2018-03-30 18:25 标签： 抗体用什么稀释
Sigma的一抗用什么稀释保存？ - 实验交流 - 生物秀
标题: Sigma的一抗用什么稀释保存？
摘要: Sigma的一抗用什么稀释保存？我买了Sigma的微管一抗，0 2mg的，想分装保存，以前没做过，请问用什么稀释液，PBS可以吗？谢谢了 关键词:[一抗 微管 稀释液]……
我买了Sigma的微管一抗，0.2mg的，想分装保存，以前没做过，请问用什么稀释液，PBS可以吗？谢谢了回复:
一般会提供稀释液的,不提供的话,PBS也可以,不过保存时间比较短,反复冻融会导致效价会很快降低,所有现用现配最好!!回复:
那我用PBS＋0.3％Triton-X100＋10％BSA稀释可以吗？做实验的时候我直接加入样品，做完实验就抛弃，是不是有点浪费？刚开始做什么都不懂。以前做预实验，做了四五次都没有看到微管结构，以前用的一抗是别人的，乙酰化的微管抗体，用来看神经细胞的，我的二抗是国产的，到底是一抗的问题（过期或者不对）还是二抗的？是不是二抗效价太低了？回复:
PLease follow the manufacturer"s instruction.You can easily finduseful infoon Sigma website.回复:
一般会提供稀释液的,不提供的话,PBS也可以回复:
进SIGMA公司网站 找到你的一抗的位置 看指导手册 有很详细的说明的 回复:
一般都是用PBS，你试试回复:
试剂手册说明了的回复:
一般会提供稀释液的,不提供的话,PBS也可以
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电话：021-如何摸索WB的一抗二抗的稀释倍数？ - 实验交流 - 生物秀
标题: 如何摸索WB的一抗二抗的稀释倍数？
摘要: [如何摸索WB的一抗二抗的稀释倍数？] sigma的HA抗体，现在做WB杂带不少，背景也很深，请教达人们：如何摸索一抗二抗的稀释倍数呢？ 关键词:[二抗 稀释倍数 一抗 抗体]……
sigma的HA抗体，现在做WB杂带不少，背景也很深，请教达人们：如何摸索一抗二抗的稀释倍数呢？
根据推荐的范围选几个背景深建议延长洗膜时间
可以做个DOT-blot，或者ELISA来做个浓度摸索~
【1】抗体的说明上，都给出了一个范围，可以以这个范围为根据摸索。开始的时候可以把膜剪成几小块，每一块用不同的一抗二抗浓度，这样就可以比较快的摸出适宜的浓度。有些时候也有一定的经验的：我用的是SANTA CRUZ的抗体，一抗建议的稀释比是1：200－1000，我用的是1：400效果挺好的。周围的人用的这个公司的其他一抗也是建议这个稀释比，他们也是稀释成了1：400，效果也挺好的。所以，如果用的是这个公司的一抗，如果建议的稀释比和上面相同的话，建议先用1：400试一下。【2】如果背景深，考虑二抗浓度高了，可以降低二抗浓度。当然没封闭好等很多其他原因也可以引起背景过高。【3】如果杂带较多，可以考虑降低一抗的浓度。如果没有条带，则可以考虑增加一抗的浓度。【4】当然，在摸索抗体浓度的同时，要保证其他步骤的完善、合理性：转膜成功、封闭的要好、上样量是否合理（不要太大了）等。
我个人感觉一抗二抗的稀释倍数取决于以下几个因素:1)显色液的选择上:ECL、ECL-PLUS以及其他系列的显色液他的推荐的一抗/二抗浓度就有说明,我用ECL-PLUS,1:二抗稀释2)目的蛋白丰度:如b-actin一抗稀释倍数可以稀释到上万倍都可以.常规未测试的蛋白我都选择1:1000;
我一般做个elisa来观察，但是不知道可行不可行，从结果来看，还可以。用你的ha抗体稀释到不同的浓度加到板条，37度1hour，洗后加统一浓度的二抗，反应后显色，读数。当然前提是以一个你知道工作浓度的抗体作为阳性对照，看OD的数据比较。
谢谢【1】抗体的说明上，都给出了一个范围，可以以这个范围为根据摸索。开始的时候可以把膜剪成几小块，每一块用不同的一抗二抗浓度，这样就可以比较快的摸出适宜的浓度。有些时候也有一定的经验的：我用的是SANTA CRUZ的抗体，一抗建议的稀释比是1：200－1000，我用的是1：400效果挺好的。周围的人用的这个公司的其他一抗也是建议这个稀释比，他们也是稀释成了1：400，效果也挺好的。所以，如果用的是这个公司的一抗，如果建议的稀释比和上面相同的话，建议先用1：400试一下。【2】如果背景深，考虑二抗浓度高了，可以降低二抗浓度。当然没封闭好等很多其他原因也可以引起背景过高。【3】如果杂带较多，可以考虑降低一抗的浓度。如果没有条带，则可以考虑增加一抗的浓度。【4】当然，在摸索抗体浓度的同时，要保证其他步骤的完善、合理性：转膜成功、封闭的要好、上样量是否合理（不要太大了）等。
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&从SIGMA 买的TUN的thrombin要怎么稀释？
从SIGMA 买的TUN的thrombin要怎么稀释？
求大家帮忙。从SIGMA 买的TUN的thrombin (from human plasma) 要怎么稀释? 用什么Buffer? 用多少Buffer稀释到多大浓度合适? 它的单位怎么由U换算到浓度单位mol/L?
我用的是PBS，稀释到多少浓度看你想测多少浓度，最大浓度的100倍左右就行，小浓度使用的时候逐级稀释。
买的有写活性大于多少U/mg，根据你买的100U，大致得到质量mg，再根据分子量大概在36000左右，得到摩尔量。
引用回帖:: Originally posted by olea at
我用的是PBS，稀释到多少浓度看你想测多少浓度，最大浓度的100倍左右就行，小浓度使用的时候逐级稀释。
买的有写活性大于多少U/mg，根据你买的100U，大致得到质量mg，再根据分子量大概在36000左右，得到摩尔量。 太谢谢您了。还有个地方不太清楚，向您请教哈。我买的药品上写着T UN. lyophilized powder, &2,000 NIH units/mg protein (E%/280,18.3), 133 NIH units/ 2582 NIH units/mg protein. 您说的活性大于多少U/mg是我这里药品上写的&2,000 NIH units/mg protein这个吗？如果我要计算是不是就用(2,000 U/mg X 100 U) / 36000这个式子计算呀？ 这里计算的时候需不需要换算单位？谢谢您了，
sigma有说明的，1 NIH unit = 0.324 ±0.073 μg，一个vial是133 NIH，就是43ug左右，除以分子量36000，差不多一共1.2 nmol，按比例稀释就行。
引用回帖:: Originally posted by olea at
sigma有说明的，1 NIH unit = 0.324 ±0.073 μg，一个vial是133 NIH，就是43ug左右，除以分子量36000，差不多一共1.2 nmol，按比例稀释就行。 好的，真的太谢谢您了！
亲，有个问题问一下133 NIH units/vial这个是在哪里看到的哦
引用回帖:: Originally posted by 雪千寻丶 at
亲，有个问题问一下133 NIH units/vial这个是在哪里看到的哦 我是在买回来的药品瓶子上看到的。
引用回帖:: Originally posted by
我是在买回来的药品瓶子上看到的。... 昨天看TUN的产品说明 那里面写的Molecular mass : 37.4 kDa
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