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T淋巴细胞亚群
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二、T淋巴细胞亚群
应用CD4和CD8单克隆抗体可将外周淋巴器官或外周血中的T细胞分为CD4+CD8-和CD4-CD8+两个主要的亚群。每个亚群按照某些表面标志和功能又可分为不同的功能亚群。
（一）CD4阳性细胞群
1.Th1和Th2亚群　应用Th细胞克隆培养技术和细胞因子产生的不同，已发现小鼠CD4阳性细胞群是一个不均一的亚群，可分为Th1和Th2，主要区别见表7-6。
Th1细胞能合成IL-2、IFN-γ、，LT、IL-3、TNF-α和GM-CSF，但不能合成IL-4、IIL-5、IL-6、IL-10和IL-13；而Th2能合成TNF-α、IL-3、GM-CSF、IL-4、IL-5、IL-6、IIL-10（细胞因子合成抑制因子，CSIF）和IL-13，不能合成IL-2、IFN-γ和LT。此外Th1和Th2都能分泌三巨噬细胞炎症蛋白和前脑啡肽原。Th1和Th2都能辅助B合成抗体，但辅助的强度和性质不同。体外实验表明，IL-4明显促进B细胞合成和分泌IgE，如使LPS刺激小鼠B细胞合成IgE能力增强10-100倍。少量IFN-γ能完全阴断IL-4对IgE合成的促进作用。Th2分泌IL-4对IgE合成有正调节作用，而Th1分泌IFN-γ则起负调节作用。此外，Th2通过分泌IL-4和IL-5辅助IgA合成，分泌IL-10（CSIF）,抑制Th1细胞合成细胞因子，而Th1对IgG1合成则有抑制作用，但辅助其它几种类型Ig的合成。由于Th1和Th2合成淋巴因子的种类不同，因而介导不同的超敏反应。IL-3和IL-4均能促进肥大细胞增殖，且相互有协同作用，IL-5除辅助B细胞合成IgA外，还能刺激骨髓嗜酸性粒细胞的集落形成，因而Th2与速发型超敏反应关系密切。Th1通过产生IFN-γ阻断IgE合成，对速发型超敏反应有抑制作用。Th1与迟发型超敏反应有关，可能与IL-2、IFN-γ等对巨噬细胞活化和促进CTL分化作用有关，此外LT也有直接杀伤靶细胞作用。两群Th克隆均能诱导抗原提呈细胞（APC）表达MHCⅡ类抗原，Th1通过IFN-γ诱导Mφ表达Ia抗原，而Th2通过IL-4对Mφ和B细胞Ia抗原表达起正调节作用。在人类Th1和Th2细胞亚群尚未得到最后证实。从目前发表资料来看，CD4+CD45RO+前体细胞向Th2效应细胞分化，而IFN-γ则对前体细胞向Th2分化过程起抑制作用，因此IL-4和IFN-γ在决定CD4+CD45RO+前体细胞向Th1或Th2分化过程中起着重要的调节作用。人T细胞经多克隆活化后，在CD4阳性细胞中IL-4mRNA阳性比便不到5%，而60%的CD4+细胞有IFN-γ和IL-2mRNA的转录。
表7-6　小鼠Th1和Th2亚群的比较
　 　 Th1 Th2 合成淋巴因子种类 IL-2 + - IFN-γ + - LT + - IL-3 + + TNF-α + + GM-CSF + + IL-4 - + IL-5 - + IL-6 - + IL-10 - + IL-13 - + 辅助B细胞 　 + ++ 辅助IgE合成 　 - + 促进肥大细胞增殖 　 - + 介导超敏反应类型 　 迟发型 速发型 促进Ia表达细胞 　 Mφ B，Mφ
　　介导迟发型超敏反应（delayed type hypersensitivity,DTH）的T细胞亚群称为T
，表面标志CD3+CD4+CD8-，可能相当于小鼠的Th1亚群。当曾被变应原致敏的T
再次与变应原相遇后，可释放出多种细胞因子，参与迟发型（Ⅳ型）超敏反应的发生。
释放细胞因子参与迟发型超敏反应
作用对象 细　胞　因　子　 生物学活性 巨噬细胞 巨噬细胞趋化因子（MCF） 招引、聚集、活化巨噬细胞， 　 巨噬细胞移动抑制因子（MIF） 增强巨噬细胞吞噬和杀伤功能 　 巨噬细胞活化因子（MAF） 　 　 IFN-γ 　 白细胞 白细胞移动抑制因子（LIF） 招引、聚集白细胞 淋巴细胞 IL-2 淋巴细胞局部浸润、增殖 　 IFN-γ 增强杀伤功能 皮肤血管 皮肤反应因子（SRF） 增加血管通透性 靶细胞 淋巴毒素（LT） 杀伤靶细胞
MCF: macrophage chemotactic factor　
MIF: macrophage migration inhibition factor
MAF: macrophage activating factor
LIF: leukocyte migration inhibitory factor
SRF: skin reactive factor
LT: lymphotoxin
2.抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群　应用CD45RA、CD45RO、CD29和CD31单克隆抗体可将CD4阳性细胞群分为抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群。两个亚群的表面标志和功能比较见表7-8。
（1）CD31：最近发现CD31是一种新的、激活后表达水平不发生明显变化的抑制细胞诱导亚群的表面标记。CD31是一种血小板-内皮细胞胞粘附分子（PECAM,gpⅡa），分子量为140kDa，其结构属于免疫球蛋白超家族成员。从外周血新鲜分离的CD4细胞中，CD31McAb主要与CD45RA亚群反应，对B细胞合成IgG辅助作用不明显，对ConA和自身MHC（自身MLR）反应较为敏感；而CD31-的CD4细胞群中，发现有大量辅助B细胞合成IgG的活性和对某些抗原刺激的回忆反应。CD45RA+的CD4细胞大激活后，尽管细胞表面丢失CD45RA，但表面CD31的表达仍不发生明显变化；而CD45RO+CD45RA-的CD4细胞激活后不能获得CD31表达。由于CD31在CD4细胞激活后仍不变化，对于鉴别抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群是一种有用的标志。
迄今为止，许多粘附分子如 CD11a/CD18(LFA-1),LFA-3,CD2和CD29（VLAβ链）主要表达在CD45RO+T细胞表面。而CD31则表达在CD45RA+CD4细胞表面。抗CD31McAb作用于naive T细胞能触发其VLA-4介导的粘附作用。内皮细胞表面CD31及其配体与T细胞表面CD31及其配体相互作用很可能触发整合素介导的粘附作用。CD31如何参与CD45RA+CD4+T细胞功能以及诱导抑制性T细胞产生还有待进一步研究。
（2）CD45：CD45为异构型分子。CD45细胞膜外部多肽链可由A、B和C三种外显子编码。人幼稚T细胞只表达被抗CD45RA识别的CD45A型；记忆T细胞不表达任何A、B、C外显子产物而被抗CD45RO识别。抗CD45RA和抗CD45RO识别的都是休止型细胞，抗CD45RO所识别的记忆T细胞往往也可低水平表达一系列活化表面标记，如CD25、MHCⅡ类抗原、CD54、CD26等，提示这类细胞可能新近被激活过，由此推论记忆T细胞可能是由于持久性抗原或交叉抗原的低剂量、持续刺激得以维持其长时间存活。体外实验观察到细胞活化后见有从CD45RA向CD45RO的单向性转变，这与幼稚T细胞向记忆T细胞分化相平行。
表7-8　抑制细胞诱导亚群和辅助细胞诱导亚群的比较
抑制细胞诱导亚群 辅助细胞诱导亚群 表　型　CD4 + + CD29 低密度 高密度 CD31 + - CD45 CD45RA CD45RO 粘附分子(LFA、） + +++
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擅长：小儿内科
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T淋巴细胞亚群
专科分类：检查分类：
适用性别：男女均适用是否空腹：空腹
参考价格：50-100元
温馨提示：
禁忌暴饮暴食和剧烈运动,宜平静状态,空腹抽血检查。
免疫荧光法、桥联酶免疫检测法、SPA花环法：
CD3+细胞阳性率71.5%&6.2%；
CD4+细胞阳性率45.7%&5.3%；
CD8+细胞阳性率27.9%&5.0%；
CD4/cD8比值为1.66&0.33。
流式细胞术：
CD3+细胞阳性率61%一85%：
CD4+细胞阳性率28%～58%：
CD8+细胞阳性率19%一48%：
CD4/CD8比值为0.9--2.0。
异常结果：1.CD4淋巴细胞减少见于恶性肿瘤、遗传性免疫缺陷病、艾滋病、应用免疫抑制剂的患者。2.CD8淋巴细胞增多见于自身免疫病，如SLE、慢性活动性肝炎、肿瘤及病毒感染等。3.CD4/CD8比值异常艾滋病患者比值显著降低，多在0.5以下。比值降低的还有SLE肾病、传染性单核细胞增多症、急性巨细胞病毒感染、骨髓移植恢复期等。比值增高见于类风湿性关节炎、I型糖尿病等。此外还可用于监测器官移植的排斥反应，若移植后CD4/CD8较移植前明显增加，则可能发生排异反应。
需要检查的人群有：相关疾病患者和免疫力低下者均可检查。
结果偏低可能疾病：
结果偏高可能疾病：
检查前禁忌：禁忌暴饮暴食和剧烈运动，宜平静状态，空腹抽血检查。
检查时要求：注意血清标本不被污染，及时送去检测。和听从医生的要求。
在前散射(FSC)和侧散射(SSC)的二维Dot-plot图中，划出淋巴细胞区，然后对淋巴细胞作FITC和PE的荧光强度检测，荧光Ⅰ(FL1)为FITC，滤过片为(530&10) nm带通，荧光Ⅱ(FL2)为PE，滤光片为(575&10) nm带通。数据分析时，在确定每次检测阳性细胞百分率之前，根据isotype的非特异性荧光强度设定界限，以确定双阴性、双阳性和单阳性区。
不适宜人群
不合宜人群：无特殊要求。
不良反应与风险
暂无相关并发症和危害。
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黑龙江省哈尔滨
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天津市南开一文读懂T淋巴细胞亚群及其应用
T淋巴细胞亚群的检测是细胞免疫检测的最新指标之一。随着抗T细胞单克隆抗体的问世及各种检测方法的建立。 T淋巴细胞亚群检测已经在基础医学和临床医学研究中得到广泛应用。
一、T淋巴细胞亚群及其功能：
T淋巴细胞及其分类主要应用抗T细胞表面抗原McAb.根据T淋巴细胞表面分化抗原将成熟T细胞分为CD4+、CD8-和CD4-、CD8+两大亚群，T淋巴细胞的功能与表现型之间的对应关系是相对的，其免疫活性可能受激活“微环境”的影响，并受MHC抗原的制约，许多研究证明，CD4+T细胞具有杀伤活性，介导Ι类抗原不相容时的靶细胞溶解。TU等研究表明，CD4+的细胞毒活性存在两种完全不同的机理，并证明TH1和TH2的细胞毒活性不同。前者强，后者弱或无活性。Dennert等发现，克隆化的T淋巴细胞具有辅助，细胞毒活性和迟发型超敏反应作用，这种功能的多样性有赖于所采用的分析方法。CD4+细胞识别Ⅱ类MHC抗原，其效应的发挥也受Ⅱ类抗原的制约；CD8+细胞识别Ι类MHC抗原，发挥免疫效应也受其控制。
二、T细胞亚群的检测方法：
人类T细胞亚群的检测方法种类繁多，但大多都是根据T细胞表面抗原与其McAb的特异性反应设计的。根据检查标本的取材及所采用的方法主要分为两大类：1.体液中的T细胞亚群的分析；2、组织中T细胞亚群的检测。前者包括血液、胸腹腔积液，脑脊液等；后者包括肿瘤浸润细胞，移植物侵润细胞以及炎症浸润细胞等。
(一)、体液中T细胞亚群的检测方法
一般情况下，体液需要Ficoll-Hypaqu分离富含淋巴细胞的单个核细胞（MNC），然后根据条件选择适宜的免疫学方法检测。
1、酶免疫染色技术：常规分离MNC，调整细胞浓度为1×105~106个/ml，取细胞用不同亚群的McAb(一抗)和酶标抗体（二抗）或与酶抗体复合链接物，在相应底物作用下显色，普通光镜计数阳性细胞，计算出各亚群的百分比。
2、流式细胞仪：机体免疫状态是衡量机体是否患病的重要指标，目前多采用流式细胞术检监测机体的免疫状态，其中最重要的指标是检测T、B和NK淋巴细胞的水平。T细胞主要包括T辅助细胞（Th）和T抑制细胞（Ts）细胞亚群。CD3+细胞代表外周血中总的成熟T细胞，理论上应约等CD4+细胞和CD8+细胞的总和，但往往出现CD4+加CD8+细胞之和大于CD3+，这是因为CD4+细胞包括CD3+/CD4+细胞（真正Th细胞）和CD3-CD4+细胞（非Ts细胞），而后者包括CD3-CD8+CD16+CD56+细胞（一部分NK细胞）和CD3-CD8+CD16+CD56-(未知细胞)。由此可见，真正的TH细胞是CD3+CD4细胞，真正Ts细胞是CD3+CD8+细胞。尤其当患者NK细胞明显增加时，会使CD4细胞和CD8细胞的总和大于CD3+细胞，因此，用三色荧光标记才能分析真正的辅助性T细胞和抑制性T细胞。
3、免疫荧光染色法：MNC悬液的浓度调整至1×107个/ml，可用细胞悬液与抗压群McAb在小试管内是反应，也可将细胞悬液涂片，然后同酶免疫染色操作。根据条件可选择直接法和间接法。T细胞表面抗原直接或间接与荧光抗体结合，通过荧光显微镜或流式细胞仪（FCM）计数。
4、补体杀伤试验：将淋巴细胞同其McAb(应是细胞毒抗体)作用，加入兔或豚鼠血清（预先选择对淋巴细胞无毒性）提供补体。抗原抗体结合，在补体参与下,T细胞膜受损，通透性增加，然后用活细胞或死细胞染色法染色，光镜计数死细胞百分比，以确定相应T淋巴细胞亚群比例。
5、花环形成试验：常用的有红细胞花环和细菌花环，通过抗T细胞McAb与T细胞表面抗原结合形成可观察的花环。
1）直接红细胞花环试验：经醛化的红细胞与T细胞McAb连接成指示剂。当淋巴细胞周围结合4个以上红细胞者为阳性细胞。
2)间接红细胞花环试验：以结合了抗鼠IgG的醛化红细胞为指示细胞，淋巴细胞借T细胞McAb同指示细胞结合形成花环，光镜计数，结合3个以上红细胞者为阳性细胞。
3）SPA菌花环试验，以葡萄球菌为指示剂。SPA同抗T细胞McAb或抗鼠IgG结合，然后直接或者间接与淋巴细胞形成花环，染色后油镜下观察。凡周围连接10个以上葡萄球菌的淋巴细胞为阳性细胞。
（二）、组织中T细胞亚群的检测：
由于淋巴细胞表面抗原比较脆弱，组织切片不宜常规制片，而需采用冰冻切片。常用的方法有酶免疫组织化学方法和免疫荧光技术。如需对T细胞进行定位，可选择分离的淋巴细胞进行分析。
三、T细胞亚群检测的临床意义：
体液中T细胞亚群的分析和组织内的定位检测作为判断细胞免疫功能的一项重要指标，对恶性肿瘤，自身免疫性疾病，血液系统疾病，同种组织器官移植，以及各种传染病的诊断，发病机理的研究，指导免疫治疗和判断预后等方面平均具有重要意义。外周血T细胞亚群CD3+、CD4+和CD8+的改变常见的有：
（一）、CD3+细胞数的改变，表示T淋巴细胞总数在外周血MNC中的比例的变化。
1、下降常见于：某些白血病，应用免疫抑制剂，化疗或放疗过程中，长期接受放射性物质，先天性细胞免疫缺陷者，艾滋病，多发性骨髓瘤，传染性单核细胞增多症，某些病毒感染性疾病。
2、增高可见于：重症肌无力，某些自身免疫性疾病，慢性活动性肝炎、系统性红斑狼疮等。
（二）、CD4+/CD8+细胞比值改变：表明机体细胞免疫功能紊乱。不管是CD4+或CD8+细胞数发生变化均影响该比值。
1、下降是由于CD4+细胞减少或CD8+细胞增多。常见于再生障碍性贫血，某些白血病，骨髓移植后，急性乙型肝炎及无症状携带者，传染性单核细胞增多症，免疫缺陷综合症，艾滋病，某些病毒感染，恶性肿瘤，结核病，同种器官移植排斥阶段等。
2、升高常由于CD4+细胞增多或CD8+细胞减少所致。可见于某些自身免疫性疾病，系统性红斑狼疮。
四、评价及发展前景：
根据T细胞表面标志，检测T细胞亚群是目前观察机体细胞免疫水平的重要方法之一。但由于T细胞亚群的复杂性，表面标志和功能之间的相对性，以及检测方法的多样性等，所以只根据外周血CD3+，CD4+和CD8+细胞亚群的水平判断机体细胞免疫功能有一定局限性，需要结合具体疾病和病情程度进行综合分析，近年来新的抗T细胞亚群McAb及新型McAb的问世，为T细胞亚群检测的进一步发展提供了可能。鉴于目前的研究状况和存在的问题，T细胞亚群的检测可从以下几方面改进和发展：1、应用多种McAb做双标记或多标记检测，也可用双特异性McAb染色，对T细胞进一步分群。2、改进检测技术，确定标准的检查方法，建立一定的质量控制措施，提高检测水平；3、结合细胞因子和组织中T细胞亚群的检测，综合判断机体免疫功能；4、建立检测特异性T细胞亚群或克隆的方法。
PBMC取自血液制品，按照标准操作流程分离制备，保证不同批次间细胞质量的稳定性。建立了严格的细胞鉴定流程，所提供的原代细胞均经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学检测，保证细胞纯度＞95%，细胞活性＞90%；每个批次的产品均经过微生物、HIV、HBV、HCV、梅毒等检测。
外周血单个核细胞亚型
在MNC中的百分比
质检报告模板:
外周血单个核细胞（PBMC）质检信息：
表面活性及特异性标记物
细菌&病菌检查
来源：网络
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