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2010执业药师考试药学专业知识(一)复习要点(12)
来源：　 9:16:55　【】　
　　六、应用
　　(一)鉴别 供试液主峰的保留时间与对照液一致
　　(二)杂质检查 《中国药典》用HPLC杂质检查方法有5种
　　1)内标法加校正因子
　　校正因子( f ) =(As /Cs) / (AR/CR) 含量 (Cx) = f ? Ax / (AS /CS )
　　2)外标法 含量 (Cx) = CR ? (Ax / AR)
　　3)加校正因子的主成分自身对照法：对照溶液为供试品溶液的稀释溶液
　　4)不加校正因子的主成分自身对照法 无杂质对照品
　　5)面积归一化法
　　(三)含量测定 内标法加校正因子法、外标法
　　§4. 气相色谱法 gas chromatography， GC
　　一、基本原理
　　采用气体流动相;不适于难挥发和热稳定性差的物质的分析;各组分按K大小顺序依次被载气带出色谱柱产生分离
　　二、气相色谱仪
　　(一)载气源 FID多用氮气或氦气为载气，氢气为燃气，空气为助燃气。TCD多用氦气或氢气为载气;ECD多用氮气或氩气为载气。
　　(二)进样方式 可分为溶液直接进样、顶空进样
　　(三)色谱柱 填充柱或毛细管柱
　　(四)柱温箱 控温精度在±1℃
　　(五)检测器：
　　1.火焰离子化检测器(FID)
　　氢气为燃气，空气为助燃气。检测器温度应高于柱温，并不低于150℃&¾防水气凝结，(否则倒流)，通常为 250 ℃ - 350 ℃
　　2. 氮磷检测器NPD 适于含氮、磷元素的药物
　　3. 火焰光度检测器FPD 适于含氮、硫元素的药物
　　4. 电子捕获检测器ECD 主要用于含卤素药物
　　5. 质谱检测器MS 能给出相应的结构信息
　　6. 热导检测器 TCD 检测组分的浓度变化
　　浓度型：TCD、电子捕获检测器ECD
　　(六)数据处理系统
　　三、常用固定液与载体
　　1. 常用的固定液：常用的鲨鱼烷是标准非极性固定液
　　硅氧烷类 ：SE-30、SE-54、OV-17、OV-25等
　　醇类：聚乙二醇(PEG)是最常用的固定液之一
　　2. 载体(担体) 作用：承载固定液
　　为化学惰性的多孔性微粒，常用硅藻土型载体：红色载体和白色载体。
　　3. 毛细管色谱柱：开管型毛细管柱和填充型毛细管柱
　　★★四、色谱系统适用性试验
　　在各品种项下规定色谱条件下，除检测器种类、固定液品种及特殊指定的色谱材料不得改变外，其余如色谱柱内径、长度、载体牌号、粒度、固定液涂布浓度、载气流速、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变。
　　(1)色谱柱的理论踏板数(n) n=5.54(tR/ Wh/2)2
　　(2) 分离度 (R) R=2(tR2-tR1)/(W1+W2) R ³ 1.5
　　(3)重复性： RSD ≤2.0%
　　(4)拖尾因子(T)： 0.95 ~ 1.05
　　六、应用
　　(一)鉴别 供试液主峰的保留时间与对照品溶液一致
　　(二)杂质检查： 内标法加校正因子、外标法、面积归一化法和标准溶液加入法
　　(三)在含量测定中的应用： 内标法、外标法和标准溶液加入法
　　§5. 电泳法 (electrophoresis)
　　在电场的作用下，带电颗粒向其所带电荷相反的电极方向移动， 根据各组分淌度的不同而得到分离的方法。
　　(一)基本原理
　　双电层与电渗：电泳所用的支持物(如滤纸)在溶液中带负电，而使接近其表面的缓冲液带正电，且形成双电层。在电场的作用下，带正电的缓冲液整体向负极移动，形成电渗。
　　影响电泳分离的条件：(1)缓冲液的pH值和离子强度 (2)电场强度 (3)样品浓度
　　★★(二)各类电泳法
　　(1) 纸电泳法
　　(2) 醋酸纤维素薄膜电泳法
　　(3) 琼脂糖凝胶电泳法
　　(4) 聚丙烯酰胺凝胶电泳法
　　(5) SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法 测定蛋白质分子量
　　(三)应用 鉴别、分子量测定、纯度测定
　　二、毛细管电泳法(capillary electrophoresis，CE)
　　毛细管电泳的分离模式：
　　1.毛细管区带电泳(CZE)
　　2.毛细管凝胶电泳(CGE)
　　3.毛细管等速电泳(CITP)
　　4.毛细管等电聚焦电泳(CIEF)
　　5.胶束电动毛细管色谱 (MEKC或MECC)
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6种检测方法
&&ppt讲述了高效液相色谱法的6种检测方法。峰面积、内标法、外标法等。
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你可能喜欢hplc法测定盐酸格拉司琼葡萄糖注射液的含量和有关物质　
作者单位：225321 江苏泰州，扬子江药业集团有限公司【摘要】&
目的 建立hplc法测定盐酸格拉司琼葡萄糖注射液的含量和有关物质。方法 采用氰基柱， 0.05mol/l醋酸钠缓冲液[含0.25%(ml/ml)三乙胺，用冰醋酸调节ph值至6.0]-甲醇(50：50)为流动相;检测波长为302流速为1.0ml/柱温为30℃。结果 盐酸格拉司琼在34.63～124.67μg/ml范围内线性关系良好，平均回收率102.0%，rsd%为0.98%。结论 本方法灵敏迅速，准确可靠，可用于盐酸格拉司琼葡萄糖注射液的质量控制。
【关键词】& 盐酸格拉司琼;含量测定;有关物质
　【abstract】 objective to study a new method for determination content and related compounds of granisetron hydrochloride and glucose injection by hplc.method separation was carried out on an cn column using 0.05mol/l sodium acetate buffer [with 0.25% (ml/ml)triethylamine, ph adjusted to 6.0 by glacial acetic acid] - methanol (50:50) at detection wavelength 302 nm. the flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 30℃.result the linear range of gatifloxacin concentration was from 34.63 to 124.67 &g/ml.the average recovery of sample was 102.0% and rsd was 0.98%.conclusion this method is sensitive and accurate with good repeatability and suitable for the quality control of granisetron hydrochloride and glucose injection.
　　【key words】 grani c related compounds
　　盐酸格拉司琼(granisetron hydroehloride)是一种高选择性的5-ht3受体拮抗剂，具有强效止呕作用，对因放疗、化疗及手术引起的恶心和呕吐具有良好的预防和治疗作用[1]。本品选择性高，无锥体外系反应、过度镇静等副作用。本文采用hplc法测定盐酸格拉司琼葡萄糖注射液的含量及有关物质，结果准确可靠，辅料及降解物等不干扰主药测定。
　　1 仪器与试药
　　瑞士梅特勒xs205电子天平;美国安捷伦公司agilent 1200高效液相色谱仪;瑞士梅特勒mp220 ph计;phenomenex luna 5&cn色谱柱(25cm&4.6mm);药物制剂国家工程研究中心bc-50e低温光照仪;上海建恒仪器有限公司sdh-01低温恒温恒湿箱;盐酸格拉司琼对照品(批号：602，含量：99.8%)，购自中国药品生物制品检定所;盐酸格拉司琼葡萄糖注射液[批号：020701，规格：50ml盐酸格拉司琼3mg(以c18h24n4o计)与葡萄糖2.5g]，扬子江药业集团有限公司生产;配制流动相用甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余化试均为分析纯。
　　2 方法与结果
　　2.1 色谱条件与系统适用性试验
　　用氰基硅烷键合硅胶为填充剂;以0.05mol/l醋酸钠缓冲液[含0.25%(ml/ml)三乙胺，用冰醋酸调节ph值至6.0]-甲醇(50：50)为流动相;检测波长为302流速为1.0ml/柱温为30℃;进样量为20&l。理论板数按盐酸格拉司琼峰计算为7647。
　　2.2 含量测定
　　2.2.1 供试品溶液制备
　　取本品作为供试品溶液。
　　2.2.2 对照贮备液制备
　　取盐酸格拉司琼对照品34.70mg，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含盐酸格拉司琼0.6926mg的溶液。
　　2.2.3 阴性对照与空白干扰试验
　　取按处方制法制得缺盐酸格拉司琼的阴性对照适量，按供试品溶液制备法同法制得阴性对照液。取阴性对照液与流动相(空白溶剂)注入液相色谱仪，记录色谱图。由阴性对照色谱图与空白溶剂色谱图可知：在盐酸格拉司琼主峰相对应的位置无色谱峰出现，证明阴性对照与空白溶剂不干扰本品的含量测定。结果见图1。
　　图1 盐酸格拉司琼葡萄糖注射液hplc色谱图a 阴性对照溶液图，b 空白溶剂图，c 样品溶液图 2.2.4 线性关系考察 分别精密量取对照储备液0.5、0.8、1.0、1.2、1.5、1.8ml，分别置10ml量瓶中，分别加流动相稀释至刻度，摇匀，制成浓度为50%、80%、100%、120%、150%、180%的对照溶液。按上述色谱条件分别进样，测定峰面积，以对照浓度x(&g/ml)为横坐标，盐酸格拉司琼峰面积y为纵坐标进行线性回归，得回归方程：y=1.6x+1.20833，r=0.9999，结果表明盐酸格拉司琼在34.63～124.67&g/ml范围内线性关系良好。
　　2.2.5 精密度试验
　　取浓度为100%的对照溶液，按上述色谱条件分别进样20&l，测定峰面积，计算对照品峰面积的rsd为0.06%，表明仪器的进样精密度良好。
　　2.2.6 重复性试验
　　取本品(批号：)，照&2.2.1&项下制备供试品溶液，分别制备6份，按上述色谱条件分析，记录各色谱图，计算测得格拉司琼的平均含量为0.9861&g/ml，rsd为0.21%，表明方法的重复性良好。
　　2.2.7 稳定性试验
　　取上述供试品溶液，在室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12h，按上述色谱条件分析，记录色谱图，峰面积的rsd为0.12% 。说明盐酸格拉司琼样品溶液在12h内稳定。
　　2.2.8 回收率试验
　　精密量取对照贮备液5.0ml，置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成每1ml中含格拉司琼62.02&g的对照溶液;精密量取1ml，置5ml量瓶中;另取已知格拉司琼含量(批号.9861&g/ml)的样品，精密量取1ml ，置上述5ml量瓶中，摇匀;同法制备6份，进样，测定峰面积，计算平均回收率为102.0%，rsd为0.98%，结果表明方法的准确性良好。
　　2.3 有关物质
　　2.3.1 测定方法
　　取本品作为供试品溶液，精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。照上述色谱条件，取对照溶液100&l注入液相色谱仪中，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的20%，再精密量取供试品溶液与对照溶液各100&l分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍(扣除5-羟甲基糠醛相对应位置的峰面积)。
　　2.3.2 专属性试验
　　本品经高温、高湿、酸、碱、光照和氧化破坏试验。结果表明，经高温、高湿、酸、碱、光照和氧化破坏后产生的杂质峰能与主峰基线分离。
　　2.3.3 定量限与检测限
　　取对照品溶液，逐步稀释后进样100&l，待主峰峰高为基线噪音10倍时确定定量限为4.8ng，主峰峰高为基线噪音2倍时确定检测限为0.48ng。
　　2.3.4 溶液的稳定性
　　取供试品溶液，在室温放置，分别于0、2、4、6、8、10、12h，按上述色谱条件分析，记录色谱图，杂质总和的rsd为3.77% 。说明本品的有关物质检查溶液在12h内稳定。
　　2.3.5 重复性试验
　　取本品(批号：)，照&2.3.1&项下制备供试品溶液，分别制备6份，按上述色谱条件分析，记录各色谱图，计算杂质总峰面积和的rsd为0.91%，表明方法的重复性良好。
　　2.4 样品的测定
　　2.4.1 含量测定
　　取对照品溶液、供试品溶液分别进样测定，按外标法以峰面积计算3批样品的含量分别为98.6%、99.2%和99.0%。
　　2.4.2 有关物质测定
　　分别取对照品溶液、供试品溶液进样测定，调节检测器灵敏度，记录色谱图至主峰保留时间的2倍，按主成分自身对照法计算3批样品的有关物质分别为0.47%、0.52%和0.47%。
　　3 讨论
　　3.1 实验条件的确定
　　根据格拉司琼分子的结构特征，因其含氮基团，在c18色谱柱上保留较强，易造成拖尾现象。故本实验采用cn 柱。通过进行分析试验后，选择甲醇与0.05mol/l醋酸钠缓冲液[含0.25%(ml/ml) 三乙氨]为流动相，在流动相中加入的三乙胺以及选择冰醋酸调节ph 6.0，可消除格拉司琼色谱峰拖尾现象，使峰形对称，提高分离选择性的目的。
　　3.2 稳定性的考察
　　经有关物质以及含量测定的稳定性试验结果，可知供试品溶液在12h内基本稳定，无新的杂质峰出现。
　　3.3 方法专属性考察
　　对本品进行高温、高湿、酸、碱、光照和氧化破坏试验，结果可知，供试品经上述破坏试验后的分解产物与主峰均能达到较好的分离,同时对本品的辅料进行测定，结果也表明辅料对主峰不形成干扰，主峰与相邻杂质峰的分离度均符合要求。综上所述，本法能够准确的用来进行含量及有关物质的测定，具有专属性强、无干扰、分析快速准确的特点，且操作简便。
【参考文献】
& 　1 陈新谦.新编药物学,第13版.北京：人民卫生出版社，.
　　2 国家药典委员会.中国药典,二部.北京：化学工业出版社，.
　　(编辑：石 岚)
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【讨论】自身对照法进行有关物质检查的原理
页码直达：
这个帖子发布于3年零351天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
新手！！请问一下各位大侠！！有关物质检查中自身对照法是什么原理？或者说为什么要自身稀释对照？？为什么不直接单用供试品溶液？？多了这一步对照到底有什么好处？？刚跨行到分析，很多基础东西不懂呀！**帮助！
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苏醒醒 新手！！请问一下各位大侠！！有关物质检查中自身对照法是什么原理？或者说为什么要自身稀释对照？？为什么不直接单用供试品溶液？？多了这一步对照到底有什么好处？？刚跨行到分析，很多基础东西不懂呀！**帮助！有关物质的HPLC法大致有这么几种：一、外标法：关键点在于要有已知杂质对照品溶液进样；二、加校正因子的主成分自身对照法：关键点在于首先要配制已知杂质对照品与主成分对照品的混合溶液并进样，计算校正因子后将其代入计算里进行校正；三、不加校正因子的主成分自身对照法，即我们常说的自身对照法：关键点在于采用供试品溶液的稀释溶液作为对照溶液；四、面积归一化法：：关键点在于直接采用供试品溶液的杂质峰面积百分比作为测定结果；注：以上方法准确度依次降低，简便性依次增加。下面说说你关心的关于自身对照法的几个问题：一、无需已知杂质对照品，这也是自身对照品方法设计的初衷，比如有的品种实在提供不了已知杂质，那第一种和第二种方法就排除了；二、那为什么要选择自身对照法而不选择面积归一法呢？主要是因为面积归一法的准确度太差，我们知道在色谱里样品浓度越高其峰形越差甚至过载，但是有关物质检测的目的是使杂质尽可能多的检测出来，所以供试品溶液大多浓度较高，考虑到这一点就采取将供试品溶液进行稀释作为对照品的方式了，这样对照的主峰不会过载准确度也提高了。注：面积归一法目前在正式的标准里几乎完全淘汰了（但可以作为自检的一种粗略的评判方法），自身对照品在目前有关物质方法里还是占有半壁江山，相信随着杂质制备工艺的提高，自身对照品会慢慢被外标法所取代！
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苏醒醒 新手！！请问一下各位大侠！！有关物质检查中自身对照法是什么原理？或者说为什么要自身稀释对照？？为什么不直接单用供试品溶液？？多了这一步对照到底有什么好处？？刚跨行到分析，很多基础东西不懂呀！**帮助！自身对照法就是稀释自身作为对照，控制杂质限度。。其原理是不科学的，是没有办法的办法。。当杂质未知时，要么不控，要么用自身对照法，两害相较取其轻，于是自身对照法诞生了。。它唯一的好处就是，减轻了‘杂质与供试品浓度差距过大带来的误差’，并借此优势淘汰了面积归一法检测杂质。如果单用供试品溶液，那就成了面积归一法，供试品溶液浓度一般较大，而其中含有的杂质却浓度很小，二者峰面积受浓度影响较大，造成较大误差；如果采用自身对照法，1%对照，稀释了100倍，浓度与杂质浓度较为接近，减少了浓度差距带来的误差。
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苏醒醒 新手！！请问一下各位大侠！！有关物质检查中自身对照法是什么原理？或者说为什么要自身稀释对照？？为什么不直接单用供试品溶液？？多了这一步对照到底有什么好处？？刚跨行到分析，很多基础东西不懂呀！**帮助！自身对照法分两种|：一种是加校正因子的，另一种是不加校正因子的。楼主说的应该是不叫校正因子的自身对照法吧。通常不加校正因子包括两种情况，1》已知杂质的相对校正因子为0.8（0.9）~1.2（1.1），默认为1.0
2》未知杂质通常也默认为1.0 如果采用楼主所说的直接采用供试品溶液，那就是面积归一化法了。采用这种方式进行杂质定量的也有，这个要求主成分和杂质的峰面积在很宽的范围内都成线性（正常样品浓度和杂质限度水平浓度），满足这种情况的较少，但也有。例如我看到过《埃索美拉唑镁的进口注册标准对于杂质的控制采用面积归一化法》，有兴趣可以去找找看。这个方法多用于项目初期，没有对照品的情况下以及监控反应的进行程度。当上述情况不满足的情况下，就在很宽的范围内浓度与面积不呈线性。这时就有了自身对照法。这个方法的优点在于可以尽可能的提高样品浓度，提高杂质暴露的水平；稀释样品溶液至一定倍数，是主成分的浓度与样品中杂质的浓度尽可能接近，具体稀释多少视具体情况而定。通常稀释样品溶液100倍作为对照溶液进行杂质检测。也有例外，氢溴酸右美沙芬的稀释倍数是33.3倍。这个方法还有个优点，特别适合于未知杂质--因为不需要杂质对照品。但这个方法的缺点就是：运行时间长了（样品+对照溶液）。还有另外一个缺点就是：对于不太稳定的样品来说，在稳定性期间，随着主成分的降解，杂质的增加，采用这种方式会使杂质的检测结果偏大。等于间接提高了标准。国内有许多企业在进行项目时更多的是采用以主成分为杂质对照品进行未知杂质的控制。最后一种方法就是外标法了。这个你懂得。就不说了。
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自身对照法是不得已的老办法，现在用的比较少了，其原理应该是限度检查，高低浓度...而已，比如制作1%，如果高浓度（有关物质）不超过1%，说明杂质在限度内。大概就是这个意思。
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自身对照现在用的很多呀，EP上有关物质很多都是自身对照法，自身对照一可以防止浓度过载，二可以保证杂质的检出
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一般杂质含量低，与主峰不在同一浓度水平，将其稀释一百倍，杂质与其百分之一比较合适
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111 自身对照法是不得已的老办法，现在用的比较少了，其原理应该是限度检查，高低浓度...而已，比如制作1% ...误导了
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苏醒醒 新手！！请问一下各位大侠！！有关物质检查中自身对照法是什么原理？或者说为什么要自身稀释对照？？为什么不直接单用供试品溶液？？多了这一步对照到底有什么好处？？刚跨行到分析，很多基础东西不懂呀！**帮助！自身对照法分两种|：一种是加校正因子的，另一种是不加校正因子的。楼主说的应该是不叫校正因子的自身对照法吧。通常不加校正因子包括两种情况，1》已知杂质的相对校正因子为0.8（0.9）~1.2（1.1），默认为1.0
2》未知杂质通常也默认为1.0 如果采用楼主所说的直接采用供试品溶液，那就是面积归一化法了。采用这种方式进行杂质定量的也有，这个要求主成分和杂质的峰面积在很宽的范围内都成线性（正常样品浓度和杂质限度水平浓度），满足这种情况的较少，但也有。例如我看到过《埃索美拉唑镁的进口注册标准对于杂质的控制采用面积归一化法》，有兴趣可以去找找看。这个方法多用于项目初期，没有对照品的情况下以及监控反应的进行程度。当上述情况不满足的情况下，就在很宽的范围内浓度与面积不呈线性。这时就有了自身对照法。这个方法的优点在于可以尽可能的提高样品浓度，提高杂质暴露的水平；稀释样品溶液至一定倍数，是主成分的浓度与样品中杂质的浓度尽可能接近，具体稀释多少视具体情况而定。通常稀释样品溶液100倍作为对照溶液进行杂质检测。也有例外，氢溴酸右美沙芬的稀释倍数是33.3倍。这个方法还有个优点，特别适合于未知杂质--因为不需要杂质对照品。但这个方法的缺点就是：运行时间长了（样品+对照溶液）。还有另外一个缺点就是：对于不太稳定的样品来说，在稳定性期间，随着主成分的降解，杂质的增加，采用这种方式会使杂质的检测结果偏大。等于间接提高了标准。国内有许多企业在进行项目时更多的是采用以主成分为杂质对照品进行未知杂质的控制。最后一种方法就是外标法了。这个你懂得。就不说了。
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苏醒醒 新手！！请问一下各位大侠！！有关物质检查中自身对照法是什么原理？或者说为什么要自身稀释对照？？为什么不直接单用供试品溶液？？多了这一步对照到底有什么好处？？刚跨行到分析，很多基础东西不懂呀！**帮助！有关物质的HPLC法大致有这么几种：一、外标法：关键点在于要有已知杂质对照品溶液进样；二、加校正因子的主成分自身对照法：关键点在于首先要配制已知杂质对照品与主成分对照品的混合溶液并进样，计算校正因子后将其代入计算里进行校正；三、不加校正因子的主成分自身对照法，即我们常说的自身对照法：关键点在于采用供试品溶液的稀释溶液作为对照溶液；四、面积归一化法：：关键点在于直接采用供试品溶液的杂质峰面积百分比作为测定结果；注：以上方法准确度依次降低，简便性依次增加。下面说说你关心的关于自身对照法的几个问题：一、无需已知杂质对照品，这也是自身对照品方法设计的初衷，比如有的品种实在提供不了已知杂质，那第一种和第二种方法就排除了；二、那为什么要选择自身对照法而不选择面积归一法呢？主要是因为面积归一法的准确度太差，我们知道在色谱里样品浓度越高其峰形越差甚至过载，但是有关物质检测的目的是使杂质尽可能多的检测出来，所以供试品溶液大多浓度较高，考虑到这一点就采取将供试品溶液进行稀释作为对照品的方式了，这样对照的主峰不会过载准确度也提高了。注：面积归一法目前在正式的标准里几乎完全淘汰了（但可以作为自检的一种粗略的评判方法），自身对照品在目前有关物质方法里还是占有半壁江山，相信随着杂质制备工艺的提高，自身对照品会慢慢被外标法所取代！
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自身对照法一是可以避免面积归一化法时主成分过载而引起的峰面积失真进而引起结果不准确的情况；二是将自身对照法浓度配制为杂质最小限度附近可以检测检测灵敏度是否达到有效检出要求，若有杂质响应因子较小的情况，应将浓度进行校正。
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llb1978 误导了那也是你的个人理解而已
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苏醒醒 新手！！请问一下各位大侠！！有关物质检查中自身对照法是什么原理？或者说为什么要自身稀释对照？？为什么不直接单用供试品溶液？？多了这一步对照到底有什么好处？？刚跨行到分析，很多基础东西不懂呀！**帮助！自身对照法就是稀释自身作为对照，控制杂质限度。。其原理是不科学的，是没有办法的办法。。当杂质未知时，要么不控，要么用自身对照法，两害相较取其轻，于是自身对照法诞生了。。它唯一的好处就是，减轻了‘杂质与供试品浓度差距过大带来的误差’，并借此优势淘汰了面积归一法检测杂质。如果单用供试品溶液，那就成了面积归一法，供试品溶液浓度一般较大，而其中含有的杂质却浓度很小，二者峰面积受浓度影响较大，造成较大误差；如果采用自身对照法，1%对照，稀释了100倍，浓度与杂质浓度较为接近，减少了浓度差距带来的误差。
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home2001 自身对照法就是稀释自身作为对照，控制杂质限度。。其原理是不科学的，是没有办法的办法。。当杂质未知时，要么不控，要么用自身对照法，两害相较取其轻，于是自身对照法诞生了。。它唯一的好处就是，减轻了‘杂质与供试品浓度差距过大带来的误差’，并借此优势淘汰了面积归一法检测杂质。如果单用供试品溶液，那就成了面积归一法，供试品溶液浓度一般较大，而其中含有的杂质却浓度很小，二者峰面积受浓度影响较大，造成较大误差；如果采用自身对照法，1%对照，稀释了100倍，浓度与杂质浓度较为接近，减少了浓度差距带来的误差。谢谢！！！讲的很明了！！新手，望以后多多关照！！
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wen_liu 自身对照法分两种|：一种是加校正因子的，另一种是不加校正因子的。楼主说的应该是不叫校正因子的自身对照法吧。通常不加校正因子包括两种情况，1》已知杂质的相对校正因子为0.8（0.9）~1.2（1.1），默认为1.0
2》未知杂质通常也默认为1.0 如果采用楼主所说的直接采用供试品溶液，那就是面积归一化法了。采用这种方式进行杂质定量的也有，这个要求主成分和杂质的峰面积在很宽的范围内都成线性（正常样品浓度和杂质限度水平浓度），满足这种情况的较少，但也有。例如我看到过《埃索美拉唑镁的进口注册标准对于杂质的控制采用面积归一化法》，有兴趣可以去找找看。这个方法多用于项目初期，没有对照品的情况下以及监控反应的进行程度。当上述情况不满足的情况下，就在很宽的范围内浓度与面积不呈线性。这时就有了自身对照法。这个方法的优点在于可以尽可能的提高样品浓度，提高杂质暴露的水平；稀释样品溶液至一定倍数，是主成分的浓度与样品中杂质的浓度尽可能接近，具体稀释多少视具体情况而定。通常稀释样品溶液100倍作为对照溶液进行杂质检测。也有例外，氢溴酸右美沙芬的稀释倍数是33.3倍。这个方法还有个优点，特别适合于未知杂质--因为不需要杂质对照品。但这个方法的缺点就是：运行时间长了（样品+对照溶液）。还有另外一个缺点就是：对于不太稳定的样品来说，在稳定性期间，随着主成分的降解，杂质的增加，采用这种方式会使杂质的检测结果偏大。等于间接提高了标准。国内有许多企业在进行项目时更多的是采用以主成分为杂质对照品进行未知杂质的控制。最后一种方法就是外标法了。这个你懂得。就不说了。您的回答为了解决了很多困惑，谢谢。请问下，是否可以详细说说“以主成分为杂质对照品进行未知杂质的控制”吗？尤其是当未知杂质含量很低的时候，小于0.003%这种情况的话应该怎么定量呢？谢谢！
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missimmunogen 您的回答为了解决了很多困惑，谢谢。请问下，是否可以详细说说“以主成分为杂质对照品进行未知杂质的控制”吗？尤其是当未知杂质含量很低的时候，小于0.003%这种情况的话应该怎么定量呢？谢谢！可以看一下USP与EP关于液相色谱的积分处理建议，常规的报告限度为0.05%，USP与EP药典建议是0.05%的二分之一可以不积分。所以除非是遗传毒性杂质，否则一律当噪音处理，拉出去砍了。对于你的0.003%未知杂质，你觉得还有必要积分吗？
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wen_liu 可以看一下USP与EP关于液相色谱的积分处理建议，常规的报告限度为0.05%，USP与EP药典建议是0.05%的二分之一可以不积分。所以除非是遗传毒性杂质，否则一律当噪音处理，拉出去砍了。对于你的0.003%未知杂质，你觉得还有必要积分吗？您说的有道理 只不过在美国药典上看到 一个麻醉药物有关物质检查限度如下：我实在不是很理解，而且除了有关物质A、B和丙酮，都是以有关物质B作为参照计算的。我也针对这一情况发布了悬赏贴：
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