扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
下载作业帮安装包
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
显微镜的物镜上有 40/0.65 160/0.17
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
物镜通常都标有表示物镜光学性能和使用条件的一些数字和符号.如"40/0.65"和"160/0.17".此处的40表示它的放大倍数（有的写成40×或40：1）；0.65表示它的"数值孔径"（有的写成N.A.1.65或A.0.65）；160表示使用该物镜时,显微镜的机械筒长应为160mm（所谓机械筒长是指取下物镜和目镜以后,所剩下的镜筒长度.显微镜的机械筒长现已统一规定为160mm）；0.17表示使用该物镜时,盖玻片的厚度应为0.17mm.有些低倍物镜,在有、无盖玻片的情况下都可以使用,所以不标0.17而代之以横线"-".有些油镜上标有"油（oil）"字.
为您推荐：
其他类似问题
160机械筒长，40倍，数值孔径0.65的生物物镜。
物镜放大倍数40倍 镜口率0.65
160倍 镜口率0.17 镜口率 反应镜口分辨率的大小，其数字越大 标明分辨率越高。160机械筒长，40倍，数值孔径0.65的生物物镜。
物镜放大倍数40倍 镜口率0.65
160倍 镜口率0.17 镜口率 反应镜口分辨率的大小，其数字越大 标明分辨率越高。
扫描下载二维码& 显微镜的基本构造和使用方法知识点 & “你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下...”习题详情
108位同学学习过此题，做题成功率66.6%
你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下列问题吗？（1）一台显微镜有5×、10×、15×三个目镜，有10×、45×两个物镜，这台显微镜的最低放大倍数和最高放大偌数分别是C&．A.50倍、225倍&&&B.100倍、450倍&&C.50倍、675倍&&D.150倍、675倍（2）当显微镜的目镜为10×、物镜为10×时，在视野范围内看到一行相连的8个细胞．若目镜不变，物镜换成40×时，则在视野中可看到这行细胞中的A&．A.2个&&B.4个&&&C.16个&&D.32个（3）在光线明亮的实验室里，观察透明的口腔上皮细胞后再观察颜色较深的黑藻叶片细胞，为便于观察，此时应A&．A．改用凹面反光镜、放大光圈&&&&B．改用凹面反光镜、缩小光圈C．改用平面反光镜、放大光圈&&&&D．改用平面反光镜、缩小光圈（4）某学生在实验时，先用一块洁净纱布擦拭镜头，再在一干净载玻片中央滴一滴清水，放入一小块组织切片，小心展平后，放在显微镜载物台正中央，用压片夹夹住．然后在双眼侧视下，将物镜降至距玻片标本约1～2cm处停止．用左眼朝目镜里观察，同时转动粗准焦螺旋，缓缓上升镜筒．你能指出该学生操作中不正确的地方吗？①我们在擦拭显微镜的镜头时要用专门的擦镜纸，其柔软结实，不会损伤镜头，也不会有纸屑等杂质落在镜头上，如果用纱布去擦的话，纱布太硬有粗糙，易损伤镜头，还会有线毛落在镜头上，影响观察．②观察之前要先盖上盖玻片，因为不盖盖玻片载玻片上的液体会污染显微镜的镜头．③转动粗准焦螺旋是镜筒下降的时，眼睛注视物镜，直到接近玻片标本为止，然后在镜筒上升的过程中找物象，如果物镜降至距玻片标本1～2厘米处停止，那么在这1～2厘米的位置中就可能有物象，那么在2厘米以上就找不到像了．④我们要在镜筒上升的过程中找物象，一般用左眼观察目镜中像的情况，使镜筒缓缓上升直到看清物像为止．&（5）某海关缴获了一批走私物品，在清点时发现有一包生物样品，但从外形上分辨不出该样品是取自动物体还是取自植物体，你能借助显微镜并运用所学的知识将它鉴定出来吗？说说你的做法和根据好吗？①可取少量生物样品制成玻片标本放在显微镜下观察，根据动、植物细胞结构的区别加以鉴定．②细胞中如果有细胞壁、液泡、叶绿体或其中之一即为植物，反之则为动物．&．
本题难度：一般
题型：填空题&|&来源：网络
分析与解答
习题“你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下列问题吗？（1）一台显微镜有5×、10×、15×三个目镜，有10×、45×两个物镜，这台显微镜的最低放大倍数和最高放大偌数分别是____．A.50倍、225倍B.100倍...”的分析与解答如下所示：
（1）显微镜的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的乘积．（2）显微镜的放大倍数越大，视野就越小，看到的细胞就越大，但看到的数目较少；显微镜的放大倍数越小，视野就越大，看到的细胞就越小，但看到的数目细胞数目就越多．（3）调节光线强弱的结构有反光镜和光圈．（4）动物和植物细胞都有细胞膜、细胞质、细胞核和线粒体；动物细胞没有而植物细胞具有的结构是细胞壁、叶绿体和液泡．据此解答．
（1）通过分析题意可知：在用显微镜观察物像时，要想观察到最大的物像，应选择放大倍数最大的目镜和物镜，再将它们的放大倍数相乘；要想观察到最小的物像，应选择放大倍数最小的目镜和物镜，再将它们的放大倍数相乘．在所有的目镜中，放大倍数最大的是15×，放大倍数最小的是5×．在所有的物镜中，放大倍数最大的是45×，放大倍数最小的是10×．所以此显微镜最低放大倍数为：5×10═50倍；最高放大倍数为：15×45═675倍．（2）显微镜的放大倍数的计算是目镜的放大倍数乘以物镜的放大倍数．当显微镜的目镜为10×、物镜为10×时，显微镜的放大倍数是100×，在视野直径范围内看到一行相连的8个细胞．若目镜不变，物镜换成40×时，显微镜的放大倍数是，400×，是原来4倍，因此看到的细胞数目是原来的14×8=2个．（3）在显微镜的结构中，遮光器上有大小光圈，当外界光线较强时用小光圈，当外界光线较弱时用大光圈；反光镜有两个面，平面镜和凹面镜，当外界光线较强时用平面镜，当外界光线较弱时用凹面镜．由于需要观察的黑藻叶片细胞颜色较深，需要光线进入的多，才能看清它的结构，所以需要选用的是凹面镜和大光圈．（4）①我们在擦拭显微镜的镜头时要用专门的擦镜纸，其柔软结实，不会损伤镜头，也不会有纸屑等杂质落在镜头上，如果用纱布去擦的话，纱布太硬有粗糙，易损伤镜头，还会有线毛落在镜头上，影响观察．②观察之前要先盖上盖玻片，因为不盖盖玻片载玻片上的液体会污染显微镜的镜头．③转动粗准焦螺旋是镜筒下降的时，眼睛注视物镜，直到接近玻片标本为止，然后在镜筒上升的过程中找物象，如果物镜降至距玻片标本1～2厘米处停止，那么在这1～2厘米的位置中就可能有物象，那么在2厘米以上就找不到像了．④我们要在镜筒上升的过程中找物象，一般用左眼观察目镜中像的情况，使镜筒缓缓上升直到看清物像为止．（5）动物和植物细胞都有细胞膜、细胞质、细胞核和线粒体；动物细胞没有而植物细胞具有的结构是细胞壁、叶绿体和液泡．判断一个细胞是植物细胞还是动物细胞关键是看它是否具有细胞壁、液泡和叶绿体，只要有其中之一就是植物细胞，如果任何一个都没有就是动物细胞．故答案为：（1）C；（2）A；（3）A；（4）①我们在擦拭显微镜的镜头时要用专门的擦镜纸，其柔软结实，不会损伤镜头，也不会有纸屑等杂质落在镜头上，如果用纱布去擦的话，纱布太硬有粗糙，易损伤镜头，还会有线毛落在镜头上，影响观察．②观察之前要先盖上盖玻片，因为不盖盖玻片载玻片上的液体会污染显微镜的镜头．③转动粗准焦螺旋是镜筒下降的时，眼睛注视物镜，直到接近玻片标本为止，然后在镜筒上升的过程中找物象，如果物镜降至距玻片标本1～2厘米处停止，那么在这1～2厘米的位置中就可能有物象，那么在2厘米以上就找不到像了．④我们要在镜筒上升的过程中找物象，一般用左眼观察目镜中像的情况，使镜筒缓缓上升直到看清物像为止（5）①可取少量生物样品制成玻片标本放在显微镜下观察，根据动、植物细胞结构的区别加以鉴定．②细胞中如果有细胞壁、液泡、叶绿体或其中之一即为植物，反之则为动物．
显微镜的使用是考查的重点，可结合着显微镜的使用步骤理解掌握．
找到答案了，赞一个
如发现试题中存在任何错误，请及时纠错告诉我们，谢谢你的支持！
你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下列问题吗？（1）一台显微镜有5×、10×、15×三个目镜，有10×、45×两个物镜，这台显微镜的最低放大倍数和最高放大偌数分别是____．A.50倍、225倍B...
错误类型：
习题内容残缺不全
习题有文字标点错误
习题内容结构混乱
习题对应知识点不正确
分析解答残缺不全
分析解答有文字标点错误
分析解答结构混乱
习题类型错误
错误详情：
我的名号（最多30个字）：
看完解答，记得给个难度评级哦！
经过分析，习题“你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下列问题吗？（1）一台显微镜有5×、10×、15×三个目镜，有10×、45×两个物镜，这台显微镜的最低放大倍数和最高放大偌数分别是____．A.50倍、225倍B.100倍...”主要考察你对“显微镜的基本构造和使用方法”
等考点的理解。
因为篇幅有限，只列出部分考点，详细请访问。
显微镜的基本构造和使用方法
【知识点的认识】一、显微镜的构造 显微镜的种类很多，我们常用的为普遍光学显微镜．显微镜可分为两个部分：机械部分和光学部分． （一）机械部分 1、镜座：为显微镜最下面的马蹄形铁座．其作用是支持显微镜的全部重量．使其稳立于工作台上．2、镜柱：镜座上的直立短柱叫做镜柱．3、镜臂：镜柱上方的弯曲的弓形部分叫做镜臂，是握镜的地方．镜臂和镜柱之间有一个能活动的倾斜关节，可使显微镜向后倾斜，便于观察．4、镜筒：安装在镜臂上端的圆筒叫做镜筒．上端安装目镜，下端连接转换器．5、转换器：镜筒下端的一个能转动的圆盘叫做转换器．其上可以安装几个接物镜，观察时便于调换不同倍数的镜头．6、载物台：镜臂下端安装的一个向前伸出的平面台叫做载物台．用于放置观察用的玻片标本，载物台中央有一圆孔，叫通光孔．通光孔左右两旁一般装有一对弹簧夹，为固实玻片之用，有的装有移片器，可使玻片前后左右移动．7、准焦螺旋：镜臂上装有两种可以转动的螺旋，能使镜筒上升或下降，称为准焦螺旋．大的螺旋转动一圈．镜筒升降10毫米，用于调节低倍镜，叫做粗准焦螺旋．小的螺旋围动一圈，镜筒升降0.1毫米．主要用于调节高倍镜，叫做细准焦螺旋．（二）光学部分1、反光镜：一个可以转动的圆镜，叫做反光镜．反光镜具两面，一面为平面镜，一面为凹面镜．其用途是收集光线．平面镜使光线分布较均匀．凹面镜有聚光作用，反射的光线较强，一般在光线较弱时使用．2、物镜：安装在转换器上，能将观察的物体进行第一次放大，是显微镜性能高低的关键性部件．每台显微镜上常备有几个不同倍数的物镜，物镜上所刻8×、10×、40×等就是放大倍数．从形态上看，物镜越长，放大倍数越高．3、目镜：由二、三片透镜组成，安装在镜筒上端，其作用是把物镜放大的物体实像进一步放大．在目镜上方刻有5×、10×、20×等为放大倍数．从外表上看，镜头越长放大倍数越低．显微镜的放大倍数，粗略计算方法为接目镜放大倍数与接物镜放大倍数的乘积．如观察时所用物镜为40×、目镜为10×，则物体放大倍数为40×10=400倍． 显微镜看到的是一个倒立而放大的虚像． 显微镜的构造图二、显微镜的使用1、取镜与安放 安放显微镜要选择临窗或光线充足的地方．桌面要清洁、平稳，使用时先从镜箱中取出显微镜．右手握镜臂，左手托镜座，轻放桌上，镜筒向前，镜臂向后，然后安放目镜和物镜．用纱布拭擦镜身机械部分．用擦镜纸擦拭光学部分，不可随意用手指试擦镜头，以免影响观察效果．2、对光 扭转转换器，使低倍镜正对通光也，打开聚光器上的光圈，然后左眼对准接目镜注视，右眼睁开，用手翻转反光镜，对向光源，光强时用平面镜，光较弱时用凹面镜．这时从目镜中可以看到一个明亮的圆形视野，只要视野中光亮程度适中，光就对好了．3、观察 将要观察的玻片标本，放在载物台上，用弹簧夹或移光器将玻片固定．将玻片中的标本对准通光孔的中心．调焦时，旋转粗焦螺旋，为了防止物镜与玻片标本相撞．先慢慢降低镜筒，降低时，必须从侧面仔细观察，直到物镜与玻片标本相距5mm以上，切勿使物镜与玻片标本接触，然后一面用左眼自目镜中观察，一面用右手旋转粗准焦螺旋（切勿弄错旋转方向），直到看清标本物像为止．对光、调焦都是用的低倍物镜．观察时，还是先用低倍物镜，焦距调准后，移动玻片标本，全面的观察材料，如果需要重点观察的部分，将其调至视野的正中央，再转换高倍镜进行观察．转换高倍镜后，只有轻轻扭转细准螺旋，就能看到清晰的物像，注意使用高倍镜时，切勿使用粗准焦螺旋，否则容易压碎盖玻片并损伤镜头的透镜．一般凡是用低倍物镜能够观察清楚的标本，就不一定要换用高倍镜．【命题的方向】对显微镜构造的认识，和练习使用显微镜，是初中阶段必须掌握的一项基本技能，也是中考的重要命题点．考查的形式多样，各种题型都有，而且考查的内容覆盖面较广．【解题思路点拔】解答关于显微镜的构造及使用题目时，除了识记以上【知识点的认识】内容外，在显微镜实际操作过程遇到的问题是考查的难点，也是重点．如：显微镜的放大倍数的改变与视野的明暗关系，放大倍数越大，视野越暗．判断显微镜视野中污点的位置：先转动目镜如果污点动说明在目镜上，如果污点不动，说明不在目镜上；然后移动玻片标本，污点动说明在玻片标本上，如果不动说明污点在物镜上．显微镜看到的是上下左右均颠倒的物像，给一个字母或者文字，在显微镜上看到是什么样子，也是常见的题型，解决此类问题，最好把这个字母或者文字写到纸上，旋转180度，也就是倒过来看，就可以了．在观察物像时，物像移动的方向与标本移动的方向是相反的，所以把视野中偏左上方的物像移动正中央的话，玻片标本应往左上方移动．难度较大的题目就是结合目镜、物镜的长短与放大倍数的关系，绘制目镜与物镜的图示，选择相关组合，判断视野中细胞大小、数目的关系．在前面【知识点的认识】中有关于目镜、物镜的长短与放大倍数的关系的知识，要记清楚，不要混淆．另外显微镜放大倍数越大，观察到的细胞数目就越少．如下表：
与“你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下列问题吗？（1）一台显微镜有5×、10×、15×三个目镜，有10×、45×两个物镜，这台显微镜的最低放大倍数和最高放大偌数分别是____．A.50倍、225倍B.100倍...”相似的题目：
显微镜的正确使用步骤是&&&&①对光②观察③整理和存放④安放装片⑤取镜和安放．①②③④⑤④③②①⑤⑤①④②③④①②③⑤
要把显微镜视野右上方的物像移到视野的中央，玻片移动的方向应该是&&&&左下方左上方右下方右上方
当你发现显微镜镜头不清洁时，除去污物的正确方法是&&&&用纱布擦用手擦用纸巾擦用擦镜纸擦
“你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下...”的最新评论
该知识点好题
1在显微镜的使用中，下列操作与其结果不相符的是&&&&
2我市某校七年级学生小强制作了人的口腔上皮细胞、洋葱鳞片叶表皮细胞临时装片，在显微镜下看到的情况如图所示，据图回答：（1）小强所观察到的人的口腔上皮细胞与洋葱表皮细胞具有细胞膜、细胞核、细胞质等共同结构．但也观察到人的口腔上皮细胞不具有&&&&、液泡和叶绿体等结构．（2）制作人的口腔上皮细胞临时装片的主要步骤是：擦拭载玻片和盖玻片；滴生理盐水；牙签刮口腔内侧壁；涂抹；盖盖玻片；染色等六个步骤．A图中出现气泡，是由于制作临时装片步骤的“&&&&”操作不规范引起的．（3）已知小强观察B图使用的目镜是5×，物镜是10×，则该物像被放大了50倍．若想在视野中观察到更多的细胞，小强应选择物镜放大倍数为&&&&（填“8×”、“10×”或“15×”）的镜头，转动C图显微镜中标号&&&&所示结构进行观察即可．（4）细胞中的遗传信息存在于&&&&．
3遮光器上光圈的作用是&&&&
该知识点易错题
1若用一台显微镜观察同一标本四次，每次仅调整目镜、物镜和细准焦螺旋，结果得到下面各图．试问其中视野最暗的是&&&&
2如图是光学显微镜结构示意图．（1）使看到的物像更清晰，应轻微调节的结构是&&&&．A．结构11&&　B．结构10&&C．结构9&&D．结构3（2）物镜是指图中的&&&&．A．结构1&&B．结构4&&&&C．结构9&&&&D．结构7（3）取显微镜时，手握显微镜的部位应是&&&&．A．结构12&&B．结构13&&C．结构2&&&D．结构3（4）用低倍镜观察洋葱表皮细胞时，所使用的目镜是“8X”，物镜是“15×”，则物像的放大倍数是&&&&．A．15倍&&&&&B．23倍&&&&C．100倍&&&&D．120倍（5）如果目镜上标有10X或5X，物镜上标有40X或4X，则想看到的细胞数目最多应选择的镜头为目镜&&&&物镜&&&&．（6）如果你在显微镜的视野中看到一个“P“字母，那么在玻片上写的字母是&&&&．（7）若视野中要观察的物象位于右下角，应将玻片向&&&&方向移动，使物象移到视野中央．（8）当你发现视野中有一污点，如果移动玻片和目镜，污点均不动，那么你认为污点可能可能在&&&&上．（9）某同学将制作的洋葱表皮细胞装片放在低倍镜下镜检，结果什么也没有看到．请你帮助找出可能的原因（写出一点）&&&&．
3认识显微镜的主要结构，写出显微镜主要部分的名称．（1）用来调节光线强弱的结构是[&&&&]&&&&和[7]&&&&．（2）转动时，镜筒的升降范围很小的结构是[&&&&]&&&&（3）接近玻片标本的镜头是[&&&&]&&&&．（4）取显微镜时，握镜的部位是[&&&&]&&&&．（5）把玻片标本放上[&&&&]&&&&后，要用压片夹压住，标本要正对[&&&&]&&&&的中央．
欢迎来到乐乐题库，查看习题“你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下列问题吗？（1）一台显微镜有5×、10×、15×三个目镜，有10×、45×两个物镜，这台显微镜的最低放大倍数和最高放大偌数分别是____．A.50倍、225倍B.100倍、450倍C.50倍、675倍D.150倍、675倍（2）当显微镜的目镜为10×、物镜为10×时，在视野范围内看到一行相连的8个细胞．若目镜不变，物镜换成40×时，则在视野中可看到这行细胞中的____．A.2个B.4个C.16个D.32个（3）在光线明亮的实验室里，观察透明的口腔上皮细胞后再观察颜色较深的黑藻叶片细胞，为便于观察，此时应____．A．改用凹面反光镜、放大光圈B．改用凹面反光镜、缩小光圈C．改用平面反光镜、放大光圈D．改用平面反光镜、缩小光圈（4）某学生在实验时，先用一块洁净纱布擦拭镜头，再在一干净载玻片中央滴一滴清水，放入一小块组织切片，小心展平后，放在显微镜载物台正中央，用压片夹夹住．然后在双眼侧视下，将物镜降至距玻片标本约1～2cm处停止．用左眼朝目镜里观察，同时转动粗准焦螺旋，缓缓上升镜筒．你能指出该学生操作中不正确的地方吗？____（5）某海关缴获了一批走私物品，在清点时发现有一包生物样品，但从外形上分辨不出该样品是取自动物体还是取自植物体，你能借助显微镜并运用所学的知识将它鉴定出来吗？说说你的做法和根据好吗？____．”的答案、考点梳理，并查找与习题“你能运用所学光学显微镜的有关知识来解决下列问题吗？（1）一台显微镜有5×、10×、15×三个目镜，有10×、45×两个物镜，这台显微镜的最低放大倍数和最高放大偌数分别是____．A.50倍、225倍B.100倍、450倍C.50倍、675倍D.150倍、675倍（2）当显微镜的目镜为10×、物镜为10×时，在视野范围内看到一行相连的8个细胞．若目镜不变，物镜换成40×时，则在视野中可看到这行细胞中的____．A.2个B.4个C.16个D.32个（3）在光线明亮的实验室里，观察透明的口腔上皮细胞后再观察颜色较深的黑藻叶片细胞，为便于观察，此时应____．A．改用凹面反光镜、放大光圈B．改用凹面反光镜、缩小光圈C．改用平面反光镜、放大光圈D．改用平面反光镜、缩小光圈（4）某学生在实验时，先用一块洁净纱布擦拭镜头，再在一干净载玻片中央滴一滴清水，放入一小块组织切片，小心展平后，放在显微镜载物台正中央，用压片夹夹住．然后在双眼侧视下，将物镜降至距玻片标本约1～2cm处停止．用左眼朝目镜里观察，同时转动粗准焦螺旋，缓缓上升镜筒．你能指出该学生操作中不正确的地方吗？____（5）某海关缴获了一批走私物品，在清点时发现有一包生物样品，但从外形上分辨不出该样品是取自动物体还是取自植物体，你能借助显微镜并运用所学的知识将它鉴定出来吗？说说你的做法和根据好吗？____．”相似的习题。体视的目镜能用在普通生物显微镜上么。
全部答案（共1个回答）
体视显微镜的结构原理、特点和应用范围体视显微镜又可称为：实体显微镜或称操作和解剖显微镜。是一种具有正像立体感的目视仪器。其光学结构原理是由一个共用的初级物镜，对...
恐龙灭绝的说法很多：如气候变异；行星撞击地球；恐龙患传染性绝症；甚至还有说是恐龙消化后释放体外的某种气体所致等等。比较可信的是行星的撞击地球这一说法。但是，达尔...
目镜是插在镜筒顶部的镜头，由一组透镜组成的。它可以使物镜放大了的实像进一步放大，相当于一个放大镜。 物镜安装在转换器的孔上，由一组透镜组成的，能够把物体清晰地放...
区别大了，放大镜只是单单的一个凸面镜，只能放大很小的倍数，而显微镜则有光学显微镜和电子显微镜等，能放大上百倍
答: 别圈的宝妈为什么都这么奇葩！看到简直笑疯了…
答: 2008年4月在苏州举办第十八届中国园艺与盆景艺术培训一、培训班由中国盆景艺术家协会、中国花卉盆景杂志社主办，苏州市盆景协会和苏州市虎丘山风景名胜区管理处承办，...
答: 生物多样性对人类生存和发展的价值是巨大的。它提供人类所有的食物和许多诸如木材、纤维、油料、橡胶等重要的工业产品。中医药绝大部分来自生物，它是维持人们健康的重要组...
答: 剑桥国际教育（中国）机构宋长浩老师是剑桥英语通用五级高级别考试的培训专家，被家长誉为“中国最好的FCE培训老师”，在家长和学生中有很高的威望。宋老师在介绍FCE...
大家还关注
确定举报此问题
举报原因(必选)：
广告或垃圾信息
激进时政或意识形态话题
不雅词句或人身攻击
侵犯他人隐私
其它违法和不良信息
报告，这不是个问题
报告原因(必选)：
这不是个问题
这个问题分类似乎错了
这个不是我熟悉的地区奥林巴斯显微镜全内反射的基本结构
&&发布者：admin&
光学结构的宽光谱划归审议过程中仪器开发的检查（TIRFM）的早期阶段。从这一努力出现一个数字，满足在不同折射率的两种材料之间的接合处产生的薄渐逝场的要求设计的。
在倒置显微镜下为这些设计的大部分，主要是由于添加TIRFM光学上的方便，而不是下面，笨重的显微镜台。
立式显微镜的结构也可以利用，尤其是当这是唯一可行的选择，实验条件或调查员的预算。
与生长的细胞在单层培养在塑料培养皿底细胞基质接触的观察是一种直立显微镜很好的候选人，尤其是当与浸渍的锥体采用水浸的物镜。
更有效时，检查细胞或膜组件连接到一个密封的标本室上部或当物镜是用来照亮和检索从试样的二次荧光发射。
无论基本的显微镜的设计，大多数目前使用的TIRFM结构依赖增加棱镜激光直接光照往何处发生全内反射界面，这是样品中的共聚焦平面的显微镜。
也可以用显微镜物镜的同时直接照射到接口和实现第二荧光发射的激发荧光基团产生。
本文讨论了许多的TIRFM基本的显微镜的结构，并假定例标本是在组织培养中的一个或多个荧光染料标记，在单层附着在玻璃盖玻片在全内反射界面生长的细胞。
图1中给出的是一个典型的TIRFM仪器结构涉及一个倒置的组织培养显微镜，梯形棱镜块，外加激光照明，和一个光电倍增管/ CCD探测器系统的组合。
发出的激光经过先扩束后成一个分束器将显微镜入口端口和梁主任镜之间的淡蓝色的光。
在导演的镜面反射，光的一部分被聚焦透镜到梯形棱镜放置在显微镜载物台上方的标本室和物镜集中。
棱镜把光照在一个角度，略大于内部全反射的临界角的TIRF接口，创建一个渐逝场激发荧光的样品。
光的分束器通过另一部分进入显微镜的港口，在那里它可以被引导通过光培养宽视场落射荧光激发试样。
二次荧光的样品发射的物镜是收集并传递到目镜的CCD摄像系统，光电倍增管（PMT），或。
由于梯形棱镜的顶是平的，从钨卤素光源照明可以用来观察样品在透射模式使用一系列的对比增强技术，包括微分干涉相衬，相对比，暗视野，和霍夫曼调制对比度。
当设计TIRFM实验，在构型的主题考虑的最重要的因素是照明的临界角。
普通的玻璃盖玻片上，在组织培养细胞通常生长，有约1.52的折射率的介质时，周围的细胞和细胞内成分的折射率的范围从1.33到1.38。
因此，在细胞膜和盖玻片之间的接口获得全内反射（
N（2）／n（1）
＝1.52／1.38），入射角必须大于65度的临界角。
如果细胞是不完整的和已透，溶血，超声处理，或固定，然后低折射率的水性缓冲液（
= 1.33）而不是细胞质，和临界入射角度减少到61度。
在原则上，可以采用传统的卤钨或汞/氙弧灯进行技术试验，但大多数的文献报道的调查是在激光照射下进行。
激光器是如此广泛的首选的最主要的原因是，激光是相干光，偏振，和准直，这样就可以很容易地引导到物镜或棱镜扩束镜，使用标准，和聚焦透镜。
当激光源是正确对齐，全内反射界面被定义的几何形状，可以很容易地调整，以适应变化的区域试验。
高强度的激光源，也为实验要求的照明相当重要，如荧光漂白后恢复（FRAP）的调查和荧光比率测定。
为tirmf实验最流行的激光源是1至3瓦的空气和水冷却的连续波氩离子系统，在488和514纳米，具有很强的发射线，提供广泛的普通荧光激发的能力。
在较长的波长具有线激光器，如氦、氖、氪离子气体激光器，可用于激发荧光团的吸收在540纳米和较高的地区。
然而，几乎所有的激光在0.5瓦的总可见输出或更大的范围应该足够了。
激光源是一般可取为TIRFM弧灯，因为在强度严重降低电弧灯发出的光准直的结果。
然而，激光照射有不可避免的干扰边缘上的试样，可以通过精心清洗光学表面有所降低。
临界实验，研究者应该探索快速抖动的激光束，或至少计算一个正常的使用由一个均匀的荧光团的浓度控制的数字图像样本的数字图像。
倒置显微镜的结构
为了实现在倒置显微镜下培养室全内反射的激光直接照射在玻璃立方体放置在腔室顶部的最简单的方法，如图2所示。
在一般情况下，一个固定的显微镜（物镜转盘/物镜组合是翻译在聚焦）比移动台显微镜更方便。
这种结构使试件将聚焦的过程中保持静止，只需要对激光束的初始对准。
然而，移动台显微镜是更常见的，两种类型可用于这些实验。
在倒置显微镜的结构被认为是在这里，缓冲区填充的样品室由一个较低的赤裸的盖玻片，60微米厚的聚四氟乙烯垫片环，和细胞粘附盖玻片倒使细胞的脸朝向物镜。
这种设计的优点是细胞没有绑定到基板，松散的细胞碎片，和污染蛋白倾向于沉积物作为一个集合到室底无遮蔽或添加外源荧光全内反射界面。
单层细胞的盖玻片组合的上表面被放置在与玻璃块光接触（或棱镜）由一层薄薄的浸油或甘油的方法。
玻璃块的侧面应固定，但样品必须能够接受的翻译在x和y方向的同时仍然保持光学接触。
下盖可以过大和聚四氟乙烯垫片通常是有差距，缓冲溶液浸泡的细胞可通过毛细管作用具有入口和出口端口（图2和图3）。
一些制造商提供的组织培养室是专为这个物镜。
如图2所示，激光光束首先进入一个聚焦透镜倾斜放置在显微镜载物台。
镜头的物镜是将激光照射在几乎相同的方式，作为一个物镜在EPI照明，但镜头也更容易对准的窄波束宽度。
透镜的焦距是不重要的，50和100毫米之间的范围，但应允许研究者很容易改变照明面积的大小在一个狭窄的范围内。
在照明系统其他组件，聚焦透镜应安装在一个轴与入射激光束方向对准X-Y-Z翻译。
译者可以安装在实验室的工作台上或显微镜的阶段，但会更容易使当它被安装在舞台上。
三个主要的光学元件和直接控制激光束的大小和途径进入聚焦透镜之前（见图1）。
这些包括扩束器拓宽激光光束在退出腔，一个分束器（可选）或反射镜，和一个光束导演将光束聚焦到聚焦透镜。
激光光束扩展器的广泛可用一些经销商，并用于在聚焦透镜的光束宽度控制。
作为一个结果，然后通过聚焦透镜确定收敛到样品与焦斑宽度角。
激光光折射在一系列的光束角遇到的立方体的垂直面时。
由此产生的几何畸变的界面处产生一个椭圆的照射区域，这是拉长时相比，一个高斯分布的平行光束的预期模式。
梁是更大的当他们进入聚焦透镜产生具有较薄的尺寸反射点。
在最佳条件下，梁的半宽度接近下限可以达到2.5&m。
分束器是一面镜子，把水平激光束在垂直方向（90度角）来提升它的过去的高度的显微镜载物台和玻璃棱镜或块。
一个可调节的光学安装应该用来房子分束器可移除以允许激光直接进入一个快速和可逆转换为辅助外延照明显微镜端口。
利用部分镀银镜或甚至一个普通的载玻片作为分束器，两个落射照明和全内反射可以同时查看。
梁主任镜采用角的激光束从垂直方向斜向聚焦透镜（见图1）。
镜子高度在全内反射面确定入射角。
除了线性调节高度，导演镜子应该装在一个双轴旋转安装允许的未聚焦的激光束方向进入棱镜。
如果镜像安装连接到移动台显微镜阶段（而不是实验室），的反射区的位置可以被聚焦时，试样的变化不敏感。
正确对齐时，准直和聚焦的激光束进入玻璃立方体，而导演折射罢工的全内反射界面（在立方体的下表面）与入射角超过临界最小。
无论是规模还是的立方体形状是至关重要的，和棱镜或长方形的玻璃块可以很容易地取代。
等边45-45-90-degree棱镜是标准的商业项目，可以从各种来源购买。
一个平顶棱镜（图2和图4），如立方体上面或截断的三角形，使卤钨灯和聚光系统在棱镜安置。
在这种结构中，传统照明技术如明场，暗场，相衬，和微分干涉对比可以耦合TIRFM调查协助确定的荧光源于界面的空间位置。
安装的棱镜或玻璃块，将一滴纯甘油或浸油的文化室的上表面和棱镜慢慢降低到油面，从而传播的液滴成薄薄的一层。
接触媒体（甘油或油）有两个物镜：保证棱镜和样品室之间的光学接触，和机械润滑区的两个玻璃表面之间。
随着标本室侧翻译在扫描过程中，棱镜或玻璃块是固定的。
入射的激光束传播通过棱镜的斜下方，然后通过甘油或油层，最后通过试样，完全反映在基板的底面直接在显微镜的光轴。
基板的厚度是不重要的，除了厚的基板（那些接近一个毫米甚至更多）可能会限制激光束从会议的底面直接在显微镜的光学轴。
浸泡接触的介质（油或甘油）应谨慎使用，因为任何多余的可能积聚在棱镜的下边缘和干扰入射激光照明时，首先进入玻璃。
棱镜的大小并不重要，但是大棱镜可以抑制试样的横向运动，虽然会增加浸泡介质珠和入射光束之间的间隙。
一般来说，一个棱镜或玻璃块与约一平方厘米面积是理想的。
棱镜采用几个令人兴奋的激光系统不需要在折射率精确匹配的幻灯片或盖玻片中发生全内反射。
他们可能与甘油，环己醇的光耦合，或显微镜浸油，其他光不同的液体。
浸没油具有较高的折射率，这有助于避免在棱镜/耦合在低入射角的媒体接口可能全内反射。
然而，许多品牌的浸油表明自体荧光显着量。
另外重要的一点是，截断棱镜表面不需要特殊的抛光处理，但与一个标准的商业显微镜载玻片平滑充分履行。
几个样品室的设计，利用由玻璃和/或盖玻片窗口如图3所示。
左侧（图3（a））是一个
室内设计提供一种薄的轮廓，使组织培养的细胞是通过一层薄的缓冲溶液中观察到的，它允许高数值孔径的物镜有很短的焦距的使用。
一个单层的细胞上生长，盖玻片（或显微镜），是从一个具有厚度小于100微米的薄垫片下盖玻片分离。
接入孔，使细胞与各种各样的溶液进行滴定灌流，平衡结合实验，或在细胞表面相互作用的动力学分析。
一个类似的装置，该
德沃夏克史托勒
控制的环境中培养室，是说明了在图4（b）。
该室还利用盖玻片两个顶部和底部的窗口，但不能访问孔或任何机制来允许添加化学品或缓冲溶液的变化。
如图3所示，标本室包含必要的维持培养细胞的水性缓冲液。
这个解决方案是夹在衬底表面和盖玻片之间，相隔一氯丁橡胶或聚四氟乙烯垫片。
聚四氟乙烯环是市售的，具有的厚度范围从50微米以上。
缓冲溶液的深度必须相当薄，如果高放大倍率的物镜具有大的数值孔径和短的工作距离是被雇用。
在许多情况下，该玻璃棱镜在基板上的向下的压力可能是适当的密封样品室无附加卡，但许多室内设计（图3）包括安全机制的基板和玻璃盖玻片。
在情况下，一个棱镜法（而不是一块玻璃）实现全内反射（见图4（a）），最大入射角是通过引入激光束从水平方向上得到的。
标准玻璃（有1.52个折射率），最大入射角为73度的直角棱镜和79度的等边棱镜。
由于三角棱镜上表面不平坦的相位对比度和其他的透射光技术不采用这种结构兼容。
然而，自定义截断和棱镜的顶抛光（显示如图4一个选项（A））产生的表面，可以很容易地通过入射的光从上面通过倒置显微镜聚光系统。
安装在显微镜聚光镜单元时，一个60度的梯形棱镜（图4（b））是最方便和可重复配置开发的TIRFM以上倒仪器阶段。
入射的激光束是垂直的，所以全内反射面积变化的横向一个很小的程度时，棱镜提高和relowered在试样的变化。
此外，传统的透射光技术（相对比，明暗，等）与本实验设计兼容。
由于入射角固定为60度（1.52，普通光学玻璃的折射率）是不能够支持全内反射，并具有高折射率棱镜是必需的。
用燧石玻璃制成的棱镜（折射率为1.64）将符合这些要求，与市售。
光束将折射远离正常的从通过棱镜到盖玻片的69度的角度，从而超过临界角在盖玻片/缓冲或盖玻片/细胞界面。
与墙为45和60度之间的梯形是理想的，但这些单位是不容易的，必须生产出定制规格。
不幸的是，45或60度的梯形也没有市售，但他们可以通过截断和抛光的市售的三角棱镜的顶点的廉价生产。
图5给出了四分之一的结构利用一个抛物面反射镜和半球形棱镜进行倒置显微镜实验。
在本设计中，反射镜和棱镜的位置使激光束穿过一个半径的棱镜对全内反射靶区在凹面镜的焦点。
因为光线进入棱镜几乎正常在所有的入射角在脸上，光束轮廓的像差相比，与一个立方体或矩形棱柱块所观察到的减少。
在垂直入射激光束的横向偏移能总是把焦点放在同一个地方，使大量的、方便的改变光线入射角。
此外，在渐逝场的干涉条纹，可以通过将输入光束分成两个组件创建的，每个反射在抛物线一个单独的方位角位置，但重组在抛物面焦点。
条纹间距可以通过调整两个入射光束的相对方位角位置的变化，和非常高的空间频率可以达到。
干涉条纹，可以作为一种辅助聚焦的接口上创建一个平行线的干涉条纹图案。
这一模式可以在细胞/衬底接触的区域观察到的，这证实了激励源的倏逝场（而不是通过细胞场随机散射光）。
干扰模式也是有用的在表面的扩散速率的研究来衡量的接触区域的膜元件的横向流动。
尽管这个设计的通用性（图5），定位是非常困难的，该系统是更敏感的振动。
倒置显微镜结构审查这里都有一些优点和缺点。
主要的优点是能够利用而廉价的光学显微镜工作台上有足够的空间位置的试样和玻璃块/棱镜和支撑光学元件。
此外，棱镜可以安装在聚光镜支架（安置在现代倒置显微镜阶段）在升降自如，并与传统的光学技术辅助观察。
最后，这些光学安排享受简单设计和最容易对准的全内反射系统。
倒置显微镜的结构主要缺点之一是事实，标本不易从上面和常规照明由棱镜先端阻碍访问。
同时，最短的工作距离的物镜不可能达到聚焦在缓冲层，并具有高数值孔径的物镜图像质量的降低由于球面像差时，观察样品在较厚的缓冲层。
棱镜或玻璃块对齐的倒置显微镜涉及到对全内反射区直接在物镜而试样在焦点。
第一步是将样品室和棱镜组合，然后将试件在使用明场照明的重点（甚至在棱镜的顶点是存在的）。
接下来，用激光聚焦透镜的光束直接删除，以便它经过的物镜前透镜中心的全内反射。
这可以通过直接观察（不通过显微镜目镜）用于散射入射光在棱镜，浸层，和基板。
重新插入聚焦透镜后聚焦的激光束，使进入棱镜侧面大约一毫米的底部边缘以上调整其位置。
直接观看梁应在棱镜底部显示的散射光三共线性点：两个在外面，光束通过浸渍层，和一个中央地方的光束经过在试样内部全反射。
聚焦透镜应调整中间点是可见的细长圆柱面。
和全内反射区域大小的位置可以用聚焦透镜的翻译和移动透镜的纵向优化照明区域的尺寸调整。
的全内反射区的形状依赖的棱镜或玻璃块侧表面的取向，在激光束进入。
如果一边是垂直的（如在一块或矩形），该地区将长到一定程度，是一个电子束会聚功能。
正如前面所讨论的，延伸率是由于像差的大折射角度首先介绍了棱镜表面或玻璃块。
另一方面，如果侧面倾斜使准直的激光束进入一个角度接近垂直，然后反射区会像一个小的细长的圆锥形部分，预计从切片的圆柱形束在一个角。
在所有上述的光学结构，照亮的区域将保持平稳的视场中心作为试样在横向尺寸扫描。
然而，当显微镜阶段期间移动焦点，照亮的区域可以横向移动作为样本集中，取决于是否聚焦透镜和光束的导演都安装在实验室的工作台上或显微镜阶段。
全内反射点的重点应不大于视场宽度。
如果现场太大，假散射和离焦荧光从棱镜和盖玻片之间的浸油层会增加其他荧光背景低，可能与全内反射荧光显微镜。
另一个工件时的入射角非常接近临界最小，表现为沿界面的表面细胞明显的阴影。
这可以通过一定的入射角超过临界角数度，避免。
当入射角接近临界值，有时很难确定是否已经实现了全内反射。
在这种情况下，通过显微镜目镜观察荧光强度常可帮助研究者确定仪器的正确结构。
从TIRF界面荧光发射是从由入射光束在亚临界&略读&的角度通过缓冲水传播的激发截然不同。
因为倏逝波（不像光束传播）是远小于的重点物镜深度，荧光似乎来源于由全内反射的激发单平面。
相反，落射照明（从亚临界梁）激发荧光团在标本室和二次荧光大部分是在很宽的范围内的焦平面的观察。
局部定性强度测量在总的内部反射的实验，这可能是可取的限制区，从收集的发射光。
经常被照射区域是不可能很小，但确定的表面积可以通过一个可调光阑放置在发射光通路的图像平面上获得。
另外几个TIRFM结构涉及倒置显微镜已被聘用的人员。
该系统如图6所示提供了另一个系统，固定棱镜相对于试样代替激光束。
雷射光从右边进入通过一个入口的棱镜，并折射到基板上传播朝向显微镜光轴通过多次内部反射。
一路上，多重反射光束遇到标本（组织培养细胞粘附在玻璃盖玻片）说明了发色团在玻璃/缓冲界面区。
通过试件和基板后，反射光束进入射棱镜，它将光从实验。
在这种结构中，光照反射区将试样时，翻译。
一个更有用的结构，是兼容的同时注射或膜片钳实验，如图7所示。
为了提供从上面一个组织文化沐浴在缓冲容易和连续访问，棱镜是部署下阶段接触玻璃基板。
这种结构，不可用于所有倒置显微镜，受到严密的几何因为物镜也居住在邻近地区。
如系统如图6所示，台下的棱镜启动多个总的内部反射在盖玻片，这将激励光波导的远轴的视场的中心。
在最简单的形式中，一个小三角棱镜（商用）放置，通过浸泡油或甘油，与含有细胞和缓冲液盖底光接触。
样品可以翻译而棱镜保持横向固定，虽然涂抹油可以在盖玻片可以摧毁第一反射下侧左（实验）。
一个可行的方法是使用一个额外的干预盖玻片与光学透明胶固定到棱镜。
滑动运动发生的干预和细胞的盖玻片盖玻片之间，这是光学接触，由一层薄薄的润滑油或甘油浸泡。
这种结构的一个主要缺点是，油或甘油浸渍物镜无法使用，因为浸泡介质可能会破坏内部反射照明斑的形成之前。
然而，空气（干）或水浸的物镜很好地工作在这种情况下。
直立显微镜结构
梯形棱镜，类似于图4所示（B），可以安装在聚光镜支架在直立显微镜在位于阶段标本全内反射界面观察现象（图8）。
扩展的激光束被引入到显微镜基地使用用于发射光源相同的端口（这应该被删除）。
一个长的焦距（约250毫米）会聚透镜放在门口附近的港口和安装在X-Y翻译用于聚焦入射激光束和允许的横向位置微调。
激光准直照明可以利用显微镜内置的光学列车直梁通过底座和垂直向上进入棱镜。
一个额外的镜头位置略高于显微镜基础往往是翻译和焦点的全内反射点有用的。
这种结构不调整入射角提供了很大的灵活性，但有限的范围内的值可以通过使用具有不同的角的几何形状和折射率达到几个梯形。
图像是通过冷却科学在图5所示的收集，但一个光电倍增管或雪崩光电二极管可以很容易地取代。
棱镜玻璃折射率的选择是有限的要求，用火石玻璃（折射率为1.62）是优选的配方。
一个60度的入射角，棱镜的折射率必须至少1.53为全内反射发生在玻璃/水界面（无论基板材料）。
这就是为什么火石玻璃，而不是普通的光（皇冠）玻璃或石英，是这些实验的理想的棱镜材料。
照明光被反射到棱镜的显微镜镜下，并透过玻璃折射棱镜的角边。
因为梯形棱镜将自定义尺寸没有市售，菱形截面是由截断和抛光触手可及的等边三角形的棱镜上制作。
聚焦透镜后的激光轨迹定位，这是调整的倾斜侧和朝向的上表面在60度的入射角进入棱镜中心在全内反射的底部。
当聚焦透镜插入光路，光束遵循相同的过程，但更薄、更强烈的。
标本室，这可能是一个塑料培养皿或培养皿，置于显微镜下观察期。
一小滴浸介质（甘油或油）放置在棱镜上，并由聚光器齿条机构提高带来的文化室的下表面的光学接触。
然后是激光束的聚焦透镜位置译者调整内部全反射在燃烧室的上表面（或基片）和遵循一个对称的过程返回在棱镜对面镜座。
此设置适用于许多类型的基板，但特别适合观察细胞在塑料培养皿底部生长。
然后，细胞可以被视为在该室最初被播种后没有重新安装步骤。
在一个直立显微镜观察试样使研究者同时探测细胞微量移液器，片夹，和注射器，提供物镜有足够的工作距离。
二次荧光发射可以通过干燥，收油，或水浸物镜（调迁后的大部分缓冲）通过盖玻片，悬浮的细胞单层表面上方间隔。
另外，一个倾斜的锥水浸物镜可以直接放置到缓冲溶液浸泡的细胞。
直立显微镜结构是非常方便的，因为样品可以互换，因为他们很容易与标准照明系统。
的TIRF照明区域的位置也通过固定和不受影响的，即使在移动台显微镜，占绝大多数的现代正立显微镜设计。
主要的缺点是没有切换到另一个棱镜具有不同的倾斜角度的入射光角度不可调。
一个直立的系统提供了高质量的图像水浸时的物镜是潜到直接通过发现培养皿或培养室的缓冲溶液中图像的细胞，但结构是否存在几个缺点。
许多用于培养容器结构的聚合物制剂有一定程度的荧光，这可能会降低弱荧光样品的对比。
这种效应可以复合如果浸耦合介质不慎重选择。
浸泡油的几个商业品牌也显示荧光在不同层次，调查员警告检查浸入油和塑料培养器皿潜在的荧光效应在使用它们之前的TIRFM实验。
不同品牌的组织培养塑料在显示在激发自体荧光的量有显着的变化。
棱镜，滑动窗口和盖玻片，室，可以在大多数应用普通火石光学玻璃制成的，除非短穿透深度从高折射率产生所需的。
光学玻璃不透光的低于约310纳米，也有一个较长的衰减时间，昏暗的光反射，可以在一些漂白实验问题。
高质量的自发光的熔融二氧化硅（石英）要低得多。
更奇特的高折射率的材料，如蓝宝石，二氧化钛，钛酸锶，不会受到高水平的荧光产量渐逝场的穿透深度超过比光波长低一个数量级。
不同的共聚焦和多光子显微镜，许多TIRFM图像可以被记录在电影中的方式类似的显微镜，在很大程度上依赖摄影经典形式（明场，暗场，微分干涉相衬，，等）。
在某些情况下，尤其是当只有几个荧光标本中存在的，最好是使用更敏感的成像设备，如强度增强的冷却CCD摄像机，科学，雪崩光电二极管，或光电倍增管。
时间推移cinemicrography也有可能在TIRFM实验，和图像帧序列可以与任何上述设备拍摄，其中选择将取决于二次荧光强度和暴露时间获取图像。
丰富的荧光样品可以记录在胶片上（或单独一帧序列），但图像采集与视频或CCD摄像机是目前硬件现成的调查人员更方便。
通用性大量时提供的图像获取与光电倍增管或雪崩光电二极管。
光电倍增管通常采用空间悬而未决但快速检测和荧光强度的定量分析。
可变孔和/或图像平面膜片（以上）使研究者可以选择性地捕获的完全可用字段的部分。
这是有用的当长的采样间隔在低光照水平是必要的，或只有部分的视场的兴趣。
光电倍增管的光谱特性，应当选择一个图像采集装置的考虑，这些应该被检查的荧光团的发射特性一致。
在一般情况下，全内反射更难在显微镜由于激光束的焦点调整需要调整到显微镜的焦平面与光轴移动阶段已经实现。
当选择一个显微镜技术研究，注重机械稳定性和乐器的结构基序。
倒置或直立显微镜在隔离表一个沉重的框架将使研究者建立脆弱的渐逝场的相对振动自由的环境。
聚焦激光照射源保持在几微米的范围内长时间是困难的（最好的），但可以通过当显微镜，激光光源，并支持光学元件固定在适当的安装和牢固地固定在工作台或显微镜阶段。
广泛的显微镜物镜的设计与实验兼容技术。
唯一的绝对的要求是，物镜有足够长的工作距离观察接口在缓冲溶液的垫片厚度薄差距的定义。
聚四氟乙烯和氯丁橡胶垫片可以比任何标准的物镜工作距离较薄，同时仍然比渐逝场的穿透深度大得多。
这减少了无法专注于接口的可能性，但并不能弥补潜在的畸变，在样品/缓冲区的折射率变化引起的。
在大多数高放大倍率的物镜的球面像差校正的关键取决于试样被立即在盖玻片的远侧，而不是在一个额外的薄水层。
结果可以是一个图像对比度不足，产生朦胧的形象甚至当锐聚焦。物镜
规范没有一般的规则可以提供，但水浸的物镜（或浸渍或那些需要盖玻片）可能是最好的（也是最贵）的选择。
另一方面，TIRFM实验已经成功地进行了与几乎所有市售的数值孔径和放大的物镜。
在许多研究，它是理想的快速开关的照明之间的界面的全内反射和更深入地渗透到试样的体积由经典的落射荧光照明。
作为一个例子，一个短暂的过程中可能涉及的同时，但有些不同，在膜和细胞质的变化，两者都必须被记录。
专门设计的光电系统，利用声光调制器由若干研究已经描述了。
这些结构是由电脑控制的，通常包含多个调制器的行为同步振荡TIRF和落射荧光宽视野之间的亮度，同时采集数据与光电倍增管和快速响应的光电二极管装置。
玻璃表面支持细胞的粘附性往往是涂有特定的基板技术研究。
的二氧化硅的表面化学衍生物可以产生独特的物理和化学吸收特性，在调节模型膜和类似结构的形成是有用的。
此外，某些特定的化学共价结合在细胞生物学和生物物理学是特别有用的。
细胞粘附可通过附件的多聚赖氨酸对玻璃表面增强，和疏水性的表面可以长链碳氢化合物的脂质单层吸收了。
其他有用的分子，可用于治疗表面选择性特异性包括抗体，抗原，平面的磷脂，和外源凝集素。
层铝薄（20纳米的区域），它可以淬灭荧光，也可以应用于标准的真空蒸发玻璃表面。
沉积厚度可以通过完全蒸发前测铝量的精确控制。
沉积后，铝膜的上表面自然氧化物在大气中产生一层薄薄的铝氧化物。
氧化物涂层膜具有相似的二氧化硅的化学性质，可以衍生的在一个类似于玻璃的方法。
一种金属膜几乎完全淬火的荧光团的荧光在约10纳米的能力允许从标记的蛋白质的非特异性吸附到衬底的信号抑制。
这发生在允许从更遥远的标记的蛋白质吸附到附着膜荧光。
不同的的光学部分，产生排斥的焦点发出的光与一组的图像平面针孔光阑，TIRFM是有限的地区在几百纳米的玻璃/缓冲界面的全内反射的发生。
激光共聚焦显微镜具有通用性明显的优势，因为光学切片的作品在任何平面的试样并不仅限于不同的折射率之间的接口。
然而，TIRFM确实有几个优点包括一个非常薄的光学部分（约100纳米和600纳米的共焦），相邻的界面附近区域选择性的照明，并有能力（相对便宜的）适应现有的显微镜利用技术。