生地提取物对小鼠不同给药途径的急性毒性研究 第2页-临床医学论文-论文联盟
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生地提取物对小鼠不同给药途径的急性毒性研究
　 　3 结果
　　3.1 灌胃和超声雾化吸入在灌胃给予生地RGOS后，大多数小鼠活动减少，12 h后恢复。喷雾给予生地RGOS时，小鼠在钟罩内毛发略湿，多数小鼠有自主向喷雾口进行呼吸的行为，提示药物气味香甜，较为吸引小鼠，偶见小鼠有跳跃行为，喷雾结束后，小鼠舔毛发行为较为频繁，可能与毛发被气雾沾湿有关。
　　给药后第2天起至14天，灌胃和超声雾化吸入的小鼠毛发、精神、活动、摄食、分泌物、排泄物等均正常，体质量正常增长。在整个观察期(14 d)内无一小鼠死亡。观察期结束后，对小鼠进行大体解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等各主要脏器，未发现有出血点、水肿等异常情况。
　　3.2 尾静脉注射小鼠在给予生地RGOS后，高剂量组小鼠在注射后立即惊厥、抽搐，大部分立即死亡，解剖后发现心脏仍有跳动，存活小鼠在惊厥、抽搐过后逐步恢复正常，死亡率为0%组小鼠在注射后一般反应均较为正常，无惊厥、抽搐现象。给药后第2天起至14天，给药组存活小鼠精神、活动、分泌物、排泄物等均正常，无小鼠死亡。
　　各剂量组小鼠的死亡情况见表1，用综合 计算 法[9]，计算出生地RGOS的LD50为7.88g/kg，其95%平均可信限L95为(7.88±0.61)g/kg。表1 生地RGOS的LD50
　　小鼠体质量的增长情况见表23。给药第2天，生地RGOS雌雄各剂量组存活小鼠体质量不增长甚至减少，与正常对照组相比，有显著或非常显著差异;给药第7天，雌性各组小鼠体质量增长与正常对照组相似，至14天，某些组已略高于正常组;给药第7、14天，各组雄性小鼠体质量增长仍少于正常对照组，但除雄性7.03g/kg组外，其余各组无显著性差异。表明小鼠静脉注射生地RGOS后，其体质量的增长受到明显的抑制，于给药后7天左右基本恢复，雌性小鼠的恢复能力要好于雄性小鼠。表2 静脉注射生地RGOS后对雌性小鼠体质量的影响试验分两批，设2个正常对照组，RGOSⅠ组与正常对照组Ⅰ组为一批，RGOSⅡ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ组与正常对照组Ⅱ组为一批，各组与同批正常对照组比较，*P&0.05，**P&0.01表3 静脉注射生地RGOS后对雄性小鼠体质量的影响与正常对照组比较，*P&0.05，**P&0.01
　　生地RGOS雌雄各组小鼠在给药后第1天，平均耗食量明显少于正常对照组，于给药第2天开始恢复。给药14 d后，处死动物，进行大体解剖，肉眼观察心、肝、脾、肺、肾等各主要脏器，未发现有出血点、水肿等异常情况。
　　4 结论与讨论
　　受试物生地RGOS对小鼠灌胃的最大给药量为49.6 g/kg(相当于119.04 g生药/kg);对小鼠超声雾化吸入的最大给药量为28.8 g/kg(相当于65.38 g生药/kg);对小鼠尾静脉注射的LD50为7.88 g/kg(相当于17.89 g生药/kg)，其95%平均可信限L95为(7.88±0.61) g/kg。
　　生地成人常用口服剂量为915g[1]， RGOS对小鼠灌胃的最大给药量按生药量计算为其476倍(成人体重按60kg计算)，一般认为，1日最大给药量相当于成人临床日用量的100倍以上，是较为安全的[10]。
　　生地注射液(2g生药/10ml)临床 治疗 COPD用量为每次6080 ml，每日静脉滴注1次，连续14 d[24];对大鼠的有效剂量为生地10g/kg每日腹腔注射，连续7或30 d[5]、生地注射液760mg/kg(以固形物量计)静脉注射[6]。生地RGOS的成分较为单纯，其LD50与上述注射剂量对比，还是有一定的安全阈的。雌雄小鼠静脉注射生地RGOS后，其体质量增长及食耗量受到明显的抑制，表明静注RGOS对小鼠的食欲有一定的抑制作用，并影响小鼠的体质量增长。可见，静脉注射在一定的剂量范围内，是较为安全的，但对有效剂量的要求较高，对体质量有一定影响，而超声雾化吸入在最大给药量时亦无明显毒性反应，且给药方便，对于治疗COPD无疑是一个理想的给药途径。
文献 】 & 　[1] 国家药典委员会.
中国 药典,Ⅰ部[S]. 北京: 化学 工业 出版社, 2005: 82.　　[2] 毕小利，张 炜.生地注射液对COPD患者肺功能的影响[J].辽宁中医杂志，)：110.　　[3] 毕小利，张 炜.生地注射液对COPD患者免疫功能的影响[J].辽宁中医杂志，)：561.　　[4] 江淳娟，毕小利，王 跃.生地注射液对慢性阻塞性肺疾病患者血液流变学及肺功能的影响[J].实用中医药杂志，)：7.　　[5] 张 炜，毕小利，马文欢.生地对特发性肺间质纤维化基质重建调控作用的实验研究 [J].中国中医基础杂志，)：34.　　[6] 刘 力,唐 岚,徐德生,等.生地注射液对脂多糖诱导大鼠肺部炎症的影响[J].中国中药杂志,):526.　　[7] 刘 力,唐 岚,徐德生,等.生地对大鼠肺间质成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的作用[J].中成药，)：175.　　[8] 王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法[M].上海：上海 科学 技术出版社，.　　[9] 徐叔云，卞如濂，陈 修.药理实验方,第2版[M].北京：人民卫生出版社,.　　[10] 谢秀琼.中药新制剂开发与,第2版[M].北京：人民卫生出版社,.转贴于论文联盟
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>> 只用雄性小鼠研究疼痛，对吗？
只用雄性小鼠研究疼痛，对吗？
来源：Nature自然科研
Jeffrey S. Mogil
疼痛与镇痛有着真实而显着的性别差异。我在研究生阶段发现了这一点，而这或多或少是个意外：我对那天早些时候所做的一次实验的数据做了因果再分析，发现我和我的同事们正在研究的药物在雄性小鼠身上效果很好，对雌性小鼠却毫不起效。
我当时认为，如此出人意料的显着差异足以引起同事们的兴趣，但我错了。我合作的博士后毫不理会我的发现，并鼓励我继续研究，把注意力放在“真正”的现象上。幸运的是，我没有听从他的建议，在我的职业生涯中，大部分时间都在研究疼痛在两性间的差异。这种现象在人类和小鼠中一样显着，但25年后，许多疼痛研究者仍然没有在研究中使用雌性实验动物。
数据显示，相比于男性，女性对疼痛更敏感，耐受度也更低。然而，比起两性疼痛强度的定量区别，两性处理疼痛时的定性区别远为重要；越来越多的证据正在揭示这一点。举例来说，我和我的同事们发现，雌性和雄性啮齿类动物脊髓中处理疼痛的免疫细胞是完全不同的：雄性是小胶质细胞，而雌性是T细胞。
诸如此类的两性定性区别几乎随处可见：紧张所致的疼痛抑制，基因对疼痛的影响，疼痛的社会调节，以及对疼痛的记忆等等。甚至连实验人员的性别都能影响啮齿类动物对疼痛的敏感度。这些结果为世界各地的机构，包括美国国立卫生研究院（NIH）制定的新政策——在临床研究中必须使用两种性别的实验动物提供了最好的证据支持，
解决方法：对半分
自2014年起，NIH规定在临床研究中“将性别作为一项生物学变量”。但疼痛研究者和其他研究者仍然只在实验中使用雄性啮齿类动物。在《疼痛》期刊2015年发表的使用啮齿类实验动物的71篇论文中，56篇只在实验中使用了雄性，6篇只使用了雌性（其中4项研究是专门针对雌性的），6篇没有披露性别。只有3篇论文（占4.2%）确认使用了两种性别。这一比例与1996年到2005年并没有多少区别。
为什么在疼痛研究中使用雌性小鼠和大鼠遇到了如此之多的阻力呢？在我与许多只使用雄性实验动物的研究者的交流中，我发现了他们的三大担忧。
第一，研究者担心在实验中使用雌性动物会增加实验的变量，因为雌性的性腺激素水平会发生波动，从而需要检验更多实验对象。这种担忧看似有其道理，但在实证上是错误的。雌性小鼠疼痛数据的变量并不比雄性小鼠更高，在生物医学动物研究中，这一结论总的来说是正确的。这似乎是因为雄性动物也有自己的变变量来源：社会等级。雄性啮齿类动物会与同性争夺社会地位，实验动物是处于从属还是支配地位、竞争发生在多久以前都会影响实验。
其次，许多研究人员认为NIH的政策是在强迫他们扩大样本量，而这会大大增加实验成本。这种观点也是错误的：这一政策只要求在所有实验中适当考虑性别因素（参见 /28icfmw），而并不要求产生足够的统计功效，以辨别出所有的定量性别区分——后者的确会提高实验成本。
NIH的政策只要求雌性实验对象的数量足以让研究者观察到重大的性别分野，比如我们的发现（两性使用不同的免疫细胞处理疼痛）。这只要求半数的实验对象是雌性，这个限制条件丝毫不会影响实验成本。虽然这种平分方法无法检测出微小的区别，但却能揭示出重大的性别差异。
比起因为没人研究而对一切性别区分一无所知，发现这些唾手可得的成果显然是更为明智的做法。此外，发现性别区别能让论文变得更加有趣，或许还能把一篇论文变成两篇。我实在很难看到这种做法有什么坏处。
在我看来，研究人员们的第三个忧虑是有据可循的：评议者可能会要求科学家在发情周期的每个阶段重复实验。但我必须指出，要研究性腺激素的影响还有更好的方法，而且，两性在疼痛方面的许多区别实际上来自睾酮。
重要的是，研究者有义务解决对社会有重大影响的问题。疼痛患者大多是女性，如果我们只使用雄性啮齿类动物做实验，得出可能只对男性有效的结果，那么我们就辜负了自己的职责。我想对从事疼痛研究的同僚们说：从今天起，在你的实验中加入雌性小鼠和大鼠。你不会受到损失，但苦于疼痛的男性和女性都会从中大大受益。（ ）
原始出处：Perspective： Equality need not be painful
Nature Outlook： Pain | doi：10.a
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隔山消对药物所致小鼠学习记忆障碍的影响
作者：徐颖， 左科， 甘曼， 鲁宏， 郭莲军【关键词】
摘要：目的探讨隔山消对药物所致小鼠空间学习记忆障碍的作用，并初步探讨其作用机理。方法50只昆明小鼠随机平均分为空白对照组、模型组、阳性对照组(刺五加注射液)、隔山消高、低剂量组，各组动物在作相应的处理之后，于Morris水迷宫实验中测试其潜伏期。各组动物完成行为实验后颈椎脱臼处死。在低温下取其脑组织，用羟胺比色法测定脑组织中Ach含量和Ach-E的活性。结果模型组动物达岸时间(即潜伏期)明显延长，表明空间学习记忆产生障碍；阳性对照组，隔山消高、低剂量组潜伏期均明显低于模型组，且第3天成绩好于空白对照组。论文论文参考网三者相互比较，隔山消高剂量组第3天成绩最好。隔山消高，低剂量组的Ach含量明显高于模型组，而隔山消高低剂量组的AchE活性均略高于模型组，且均低于阳性对照组。结论隔山消对于药物所致的空间学习记忆障碍有一定的作用。
关键词：隔山消；
空间记忆障碍；
Morris水迷宫实验；
The Effects of Cynachum uilfordii (Maxim) Hemsl on the Learning Memory Disorder Caused by Drug in Mouse
Abstract:ObjectiveTo investigate the effects of Cynachum uilfordii (Maxim) Hemsl on the mouse space learning memory disorder caused by drug and to investigate the mechanism of effection.Methods50 mouse were randomly divided into blank matched group,model group,positive control group(manyprickle acanthopanax root injection),Cynachum uilfordii high dosage group(15 g/kg) and low dosage group (7.5 g/kg).Each group was deal with severally,then measured the latent periods in Morris Water Maze test.The mouse of each group were put to death by dislocating their cervical vertebras after the behavior tests.The brain was hydroxylamine colorimetric method.ResultsThe reachingbank time (latent period)of model group prolonged obviously,which showed the space leaThe latent periods of positive control group,Cynachum uilfordii high dosage group and low dosage group prolonged control group,Cynachum uilfordii high dosage group was the best of the three above.The content of Ach of Cynachum uilfordii high dosage group and low dosage group was visibly high dosage group and low dosage group were appreciably higher than that of model group,and both of them were lower than of positive control group.ConclusionThe results indicated the Cynachum uilfordii(Maxim)Hemsl has effect on the space learing memory disorder caused by drug.
Key words:Cynachum uilfordii(Maxim) H
Learning m
Morris Water M
学习记忆属高级神经活动。学习和记忆的基本过程大致可分为三个阶段：获得，巩固和再现。了解学习记忆过程，提高学习记忆能力，无疑是当今社会一个值得关注的课题。根据学习记忆的生理生化基础，目前多选用一些化学药品致记忆损伤。从而复制出学习记忆障碍模型，以研究各种药物对某些药物所致的学习记忆障碍方面的改善作用。近年来，我国传统的中药越来越受到重视，中药在许多疾病的治疗上，显示出的优越性是许多西药所不及的。隔山消Cynachum uilfordii(Maxim)Hemsl又名白首乌，是祖国传统中药，具有养血益肝，固肾益精，乌须黑发和延年益寿的功效。现在研究发现白首乌中含有多种有效成分，具有抗肿瘤，抗衰老等多方面的药理活性，其主要成分为羟基马甾烷酯苷，其中富含磷脂类成分，可以抗肿瘤抗衰老，而且对脑细胞具有保护作用。据此设计本实验，研究隔山消对药物所致小鼠学习记忆障碍的影响，并测定其大脑中Ach含量和Ach-E活性的改变，以初步探讨其可能的作用机理。
材料和方法
动物与药品选用成年健康的昆明种小鼠，雌雄各半，体重20～30 g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。隔山消，中药原材料，购自湖北省中药材公司，由湖北中医学院药学部进行加工粉粹过筛120目，实验时取7 g粉末，加入45 g纯净水，文火加热至沸腾，静置10 min后，过滤两次取其过滤液。4℃保存，灌胃前适当加温。刺五加注射液(有效成分黄酮5 mg/ml，批号ZZ5397黑卫药准字(1990)第200416号)，黑龙江乌苏里江制药有限公司。戊巴比妥钠粉剂，上海试剂分购度试剂厂，批号：860603，用蒸馏水配置成1.5%溶液，供腹腔注射。溴化乙酰胆碱，其他试剂均为市售分析纯或化学纯。
仪器Morris水迷宫系统：水桶直径76 cm，桶高36 cm，水深12.9 cm，安全岛高：11.4 cm，计算机软件系统：泰盟Bio2000实验系统；摄像机；SONY；台式高速冷冻离心机TL16R(上海离心机研究所)；722型分光光度计；上海申化仪表自控公司产品。
动物分组与模型的建立将50只小鼠随机分为5组，每组10只，①空白对照组：不给予任何药物，于每次训练前1 h灌胃(NS，0.5 ml/20 g)②模型组：于实验前3 d开始每天腹腔注射戊巴比妥钠1次(剂量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g体重)。开始实验后，每次训练前30 min戊巴比妥钠腹腔注射(剂量同上)③阳性对照组：于实验前6 d开始每天腹腔注射1次刺五加注射液(剂量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g体重)。开始实验后于训练前1 h腹腔注射剌五加注射液，剂量同上。④隔山消低、高剂量组：实验开始前6 d开始每天灌胃(隔山消，7.5，15 g/kg)实验开始后每天提前1 h灌胃。其中，阳性对照组，隔山消低、高剂量组在实验开始后，于每天训练前30 min腹腔注射戊巴比妥钠1次(剂量：1.5 mg/ml,0.1 ml/10 g体重)。
行为学实验方法用过圆心的两条相互垂直线分水迷宫为A，B，C，D
4个象限，安全岛位于A象限，位置固定。每天将小鼠依次从B，C，D区面朝桶壁放入水迷宫中，记录其自下水到抵达并停留在安全岛(A区)上所用的时间，即潜伏期。以120 s为限，若此时间内动物不能到达安全岛，在将此小鼠安置于安全岛上10 s，让其熟悉环境。
Ach含量和Ach-E活性测定实验结束后，于冰台上以颈椎脱臼法处死，并迅速取出全脑，去其脑干及小脑，用水生理盐漂洗，滤纸吸干后称重，样品以冰生理盐水配制成20%匀浆液，4℃ 4 500 r/min离心5 min，取其上清液，按羟胺比色法进行Ach含量，Ach-E活性测定。论文论文参考网
统计学处理实验数据用±s表示，各组间差异用t检验进行统计学分析。
隔山消对戊巴比妥钠所致小鼠学习记忆障碍的影响连续3 d的水迷宫试验发现，模型组的潜伏期成绩明显延长，说明模型复制成功。阳性对照组第3天的潜伏期明显缩短，与模型组比较(P＜0.05)；隔山消高剂量组第3天的潜伏期与模型组比较(P＜0.01)；隔山消低剂量组第3天的潜伏期与模型组比较(P＜0.05)。结果见表1，图1。
隔山消对戊巴
比妥钠所致小鼠学习记忆障碍的影响(略)
隔山消对戊巴比妥钠所致小鼠学习记忆障碍的影响
隔山消对小鼠脑组织Ach含量，Ach－E活性的影响在低温下取小鼠脑组织匀浆，用羟胺比色法测定各组小鼠脑组织中Ach含量及AchE活性，其结果显示：隔山消高，低剂量组小鼠脑组织中的Ach含量明显高于模型组小鼠脑组织中的Ach含量(P≤0.01)，隔山消高，低剂量组小鼠脑组织中的AchE活性均高于模型组。结果见表2，图2～3。
隔山消对戊巴比妥钠所致学习记忆障碍（略）
隔山消，又名白首乌，是传统补肾良药，具有养血益肝，固肾益精，乌须黑发和延年益寿的功效。经研究发现该中药含有多种有效成分，具有抗肿瘤，抗衰老等多方面的药理活性，其主要成分为羟基马甾烷酯苷，其中富含磷脂类成分，可以抗肿瘤抗衰老，而且对脑细胞具有保护作用。中医认为“肾藏精，精生髓，通于脑”，“脑为髓海”，故脑功能与肾精盛衰密切相关。补肾可益精生髓，健脑促智，中医药临床上运用补肾法延缓衰老，防止脑功能减退有悠久历史。而用隔山消对抗药物引起的空间学习记忆障碍尚未见报道。
隔山消对戊巴比妥钠所致学习记忆障碍小鼠脑组织Ach含量的影响
隔山消对戊巴比妥钠所致学习记忆障碍
小鼠脑组织AchE活性的影响本实验从动物行为学实验和生化测定实验两方面探讨隔山消在对抗药物引起的空间记忆障碍的作用。先用药物造成小鼠空间学习记忆障碍，即制作动物一种记忆障碍的模型，采用水迷宫实验方法，观察药物对动物行为功能的影响，同时用生化测定方法，初步分析药物作用机制。为获得稳定可靠的模型，需注意以下问题：实验环境对实验结果有非常大的影响。本实验宜在隔音或半隔音室内进行，同内温度，湿度光照度应适宜并保持一致。实验室内物品摆放及实验人员在实验中所处的位置保持一致。本实验观察到上午与下午进行的测试会有所差别，可能与上、下午小鼠分泌的激素或神经甾体的量有关。光线的强弱、室内物品的摆放，和实验人员站位对小鼠测试也有较大影响。小鼠在一定的空间、光线下训练，经条件反射形成记忆，改变上述实验条件，会影响条件反射的形成，从而使实验结果有较大差异。通过水迷宫实验发现，阳性对照组(刺五加组)和隔山消组(高、低剂量组)对小鼠寻找平台的潜伏期均明显小于模型组。结果显示，隔山消对药物所致的空间学习记忆障碍，有明显改善作用。Ach是脑内的经典神经递质，与认识、学习、记忆等大脑高级神经功能有关。学习记忆任务的完成伴随着脑内的Ach的变化。AchE是Ach的分解酶，它的活力变化可间接反映脑内Ach含量的关系。本实验采用羟胺比色法测定脑组织乙酰胆碱和胆碱酯酶的含量，结果提示，模型组小鼠脑组织中Ach含量和Ach-E活性均低于正常对照组和给药组鼠，隔山消组小鼠脑组织中Ach含量及AchE活性明显高于模型组。表?隔山消对戊巴比妥钠所致的小鼠学习记忆障碍的改善可能与影响中枢胆碱能系统功能有一定关系。大脑的空间学习记忆能力涉及到多种机制参与，而不是单一的胆碱能系统来发挥作用的，因此有关其他作用机理有待进一步研究。
参考文献：
Melchart D,Linde K.Weklenhammer W,Hager S,et al.Liver enzyme elevations in patients treated with traditional Chinese medicine［J］.JAMA .
杨胜平,任建军,王道周,等.土家族药“隔山消”对乙肝病毒携带者的疗效［J］.中国民族民间医药杂志,):33.
徐叔云,卞如镰,陈
修.药理实验方法学，第2版［M］.北京:人民卫生出版社,.--博才网
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【求助】雌性雄性小鼠
请问一下行为学模型中有时候用雄性小鼠有时雌雄兼用,请问其根据什么啊?假如全用雄性能有什么影响啊?xiexie
&&再个就是养小鼠时要明暗循环各12小时,请问这个必须要遵守吗?条件达不到会怎么样啊?
回答的很全面,但是我看很多的抗焦虑模型还是选的雄性小鼠啊
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