SLC30A8，TCF7L2单核苷酸多态性与南方人2型糖尿病的相关性研究-免费论文
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SLC30A8，TCF7L2单核苷酸多态性与南方人2型糖尿病的相关性研究
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学位论文使用授权书 本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。&&&&本人授权江苏大学可以将本学位论文的全部内容或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。&&&& 保密口，在 年解密后适用本授权书。&&&& 本学位论文属于 不保密彩学位论文作者签名：弓移 指导教师签名：ｔ－ｔＵ 弘ｐ年‖月２．－日 加矽年６月Ｚ曰 ＩＦｌ ｆｌ ｒｌＩ Ｉｆ ｌ ｌ ＩｒＪｌ ｒｌ ｌ ｒｌ ｆｒ ｌ ｌ Ｙ１ ７４８６３７ 独创性声明 本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。&&&&除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。&&&&对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均己在文中以明确方式标明。&&&&本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。&&&& 学位论文作者签名：与习弓 日期：２．ｐ年‘月ｚ，日 硕士学位论文ＳＬＣ３０Ａ８，ＴＣＦ７Ｌ２ 单核苷酸多态性与南方 人２型糖尿病的相关性研究Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ ｏｆ ｒｓｌ３２６６６３４ ａｎｄ ｒｓｌｌｌ９６２１８ ｐｏｌｙｍｏｒ－ －ｐｈｉｓｍｓ ｉｎ ＳＬＣ３０Ａ８（ｓｏｌｕｔｅ ｃａｒｒｉｅｒ ｆａｍｉｌｙ ３０，ｍｅｍｂ－ －ｅｒ ８）ａｎｄ ＴＣＦ７Ｌ２（ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ７ ｌｉｋｅ ２） ｇｅｎｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｉｎ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ Ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ 专 职 ２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）是由多种因子引起的具有异质性的复杂遗传病。&&&&其中胰岛素抵抗导致外周组织对葡萄糖的利用减少和胰岛ｐ细胞功能损害是其主要的病理基础。&&&&本文通过对胰岛素作用相关基因多态性研究，旨在明确它们与糖尿病的相关性。&&&& ＴＣＦ７Ｌ２基因是迄今为止发现的与２型糖尿病关系最密切的一个易感基因，它的遗传学变异是通过影响ＴＣＦ７Ｌ２在胰岛中的表达来增加糖尿病的患病风险。&&&&作为双向转运子（Ｂ．连环蛋白／ＴＣＦ）的一部分，在成年个体中，ＴＣＦ７Ｌ２基因编码的转录因子ＴＣＦ４是Ｗｎｔ信号通路的一个重要组成部分，该通路激活后，可以诱导大量基因的转录。&&&&它不但可以促进胰岛Ｂ细胞的增殖而且还可以使肠内Ｌ细胞 （一种肠道内的内分泌细胞）分泌ＧＬＰ．１（胰高血糖素样肽１）。&&&& ＳＬＣ３０Ａ８基因编码的蛋白锌转运体一８（ＺｎＴ－８）位于胰岛Ｂ细胞中含有胰岛素颗粒的囊泡膜上，是参与胰岛素合成、贮存和分泌的重要成分。&&&&最近，欧美人群的全基因组关联研究发现，ＳＬＣ３０Ａ８基因ｒｓｌ３２６６６３４单核苷酸多态性（ＳＮＰ）与２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）发病风险增加相关。&&&&由于不同种族的遗传背景及其生存环境的差异，在不同种族中印证已报道的疾病相关基因或位点对人类复杂性疾病机制的研究有重要意义。&&&& 本研究旨在了解中国南方地区汉族人ＳＬＣ３０Ａ８和ＴＣＦ７Ｌ２基因ＳＮＰｓ及单体型频率分布，分别探讨这两个ＳＮＰｓ与２型糖尿病的关系，积累这两个基因ＳＮＰｓ在中国汉族人群中的数据，有利于２犁糖尿病的发病机理研究。&&&& 研究目的： 研究ＳＬＣ３０Ａ８（ｒｓｌ３２６６６３４）及ＴＣＦ７Ｌ２（ｒｓｌ ｌ １９６２１８）基因多态性与２型糖尿病以及相关代谢指标的关系。&&&& 研究方法： ２型糖尿病患者（Ｔ２ＤＭ组）２５９例、健康者（ＮＣ组）２００例（受试者均来自上海及其周边地区）。&&&&试剂盒提取外周血基冈组ＤＮＡ，标本基因型的判断用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（ＰＣＲ―ＲＦＬＰ）技术。&&&&Ｈａｒｄｙ―Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡法检验各组基凶频率的群体代表性。&&&&同时进行人体测晕学及代谢指标的检测，并分别 江苏大学硕士学位论文采用稳态模型评估胰岛素抵抗指数（ＨＯＭＡ―ＩＲ）及胰岛ｐ细胞分泌功能指数（ＨＯＭＡ一１３）评估胰岛素抵抗和胰岛ｐ细胞功能。&&&& 研究结果： （１）Ｔ２ＤＭ组中ｒｓｌ３２６６６３４的Ｃ等位基因频率和ＣＣ基因型频率分别为５７．３％和３３．６％，均显著高于ＮＣ组的５３．２％和１７．２％（尸值均＜０．０５）。&&&& （２）Ｃ等位基因携带者患２型糖尿病的风险是Ｔ等位基因的１．５９倍 （ＯＲ＝Ｉ．５９，９５％ＣＩ为１．１９―２．１１）。&&&&与ＴＴ型相比，ＣＣ患２型糖尿病的风险增）３１１２．６３倍（ＯＲ＝２．６３，９５％ＣＩ为１．４２－４．８７Ｚ＝９．６９，Ｐ＝ｏ．００２）。&&&& （３）通过对代谢指标的分析发现Ｃ等位基因可能与Ｂ细胞功能衰竭（胰岛素分泌减少有关）。&&&& （４）２型糖尿病患者与健康受试者ＴＣＦ７Ｌ２（ｒｓｌｌｌ９６２１８）基因型及等位基因频率进行比较，其差异均无统计学意义。&&&& 研究结论： ＳＬＣ３０Ａ８基因ｒｓｌ３２６６６３４多态性位点的Ｃ等位基因可能是中国人２型糖尿病的风险等位基因，而ＴＣＦ７Ｌ２基因ｒｓｌｌｌ９６２１８单核苷酸多态性可能与Ｔ２ＤＭ的遗传易感性无关。&&&& 关键词： 单核苷酸多态性；ＳＬＣ３０Ａ８；ＴＣＦ７Ｌ２；２型糖尿病 江苏大学硕士学位论文 ＡＢＳＴＲＡＣＴ Ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ（Ｔ２ＤＭ）ｉｓ ａ ｃｏｍｐｌｉｃａｔｅｄ ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｏｕｓ ｄｉｓｅａｓｅ．Ｔｈｅｍａｉｎ ｐａｔｈｏｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ ｉｓ ｉｎｓｕｌｉｎ ｉｎ ｐｅｒｉｐｈｅｒｙ ｔｉｓｓｕｅ ｗｈｉｃｈ ｗｏｕｌｄ ｃａｕｓｅ ｄｅｃｒｅａｓｅｄｇｌｕｃｏｓｅ ｕｔｉｌｉｚａｔｉｏｎ ｃｏｍｂｉｎｅｄ ｗｉｔｈ ｄｅｃｌｉｎｉｎｇ １３－ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｉｎ ｔｈｅ ｐｒｅｓｅｎｔ ｓｔｕｄｙ，ｗｅａｉｍｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｌａｔｅｄ ｇｅｎｅ ｗｉｔｈ Ｔ２ＤＭ ｂｙ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｎｇｇｅｎｅｔｉｃ ｐｏｌｙ－ｍｏｒｐｈｉｓｍｓ． Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ ７ ｌｉｋｅ一２（ＴＣＦ７Ｌ２）ｉｓ ｂｙ ｆａｒ ｔｈｅ ｓｔｒｏｎｇｅｓｔ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓｓｕｓｃｅｐｔｉｂｉｌｉｔｙ ｇｅｎｅ ｔｏ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｔｏ ｄａｔｅ．Ｇｅｎｅｔｉｃ ｖａｒｉａｎｔｓ ｉｎ ＴＣＦ７Ｌ２ ｐｏｓｓｉｂｌｙａｌｔｅｒｉｎｇ ｅｘｐｒｅｓｓｉｎｇ ｏｆ ＴＣＦ７Ｌ２ ｉｎ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ ｉｓｌｅｔｓ ｃｏｎｆｅｒ ａ ｓｔｒｏｎｇ ｒｉｓｋ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ａｓ ａ ｃｏｍｐｏｎｅｎｔ ｏｆ ｔｈｅ ｂｉｐａｒｔｉｔｅ ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ ｆａｃｔｏｒ １３－ｃａｔｅｎｉｎ／ＴＣＦ，ＴＣＦ７Ｌ２ｉｓ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｃｏｎｖｅｙｉｎｇ Ｗｎｔ ｓｉｇｎａｌｉｎｇ ｇｅｎｅ ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ ｄｕｒｉｎｇ ａｄｕｌｔｈｏｏｄ．Ｔｈｉｓｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎａｌ ｒｅｇｕｌａｔｏｒ ｈａｓ ｂｅｅｎ ｓｈｏｗｎ ｔｏ ｂｅ ｉｎｖｏｌｖｅｄ ｉｎ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ １３－ｃｅｌｌｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｉｎｃｒｅｔｉｎ ｈｏｒｍｏｎｅｇｌｕｃａｇｏｎ―ｌｉｋｅ ｐｅｐｔｉｄｅ―Ｉ（ＧＬＰ一１）ｉｎ ｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ Ｌ ｃｅｌｌｓ． ＳＬＣ３０Ａ８ ｇｅｎｅ ｅｎｃｏｄｅｓ ａ １３－ｃｅｌｌ ｓｐｅｃｉｆｉｃ ＺｎＴ－８ ｐｒｏｔｅｉｎ，ｉｔ ｍｏｄｕｌａｔｅｓ ｔｈｅｂｉｏｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｏｒａｇｅ ｏｆ ｉｎｓｕｌｉｎ ｔｈｒｏｕｇｈ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｉｎｇ Ｚｎ ｉｎｔｏｓｅｃｒｅｔａｒｙ ｖｅｓｉｃｌｅｓ ｏｆ ｔｈｅ １３ ｃｅｌｌ．Ｒｅｃｅｎｔｌｙ，Ａ ｇｅｎｏｍｅ ｗｉｄｅ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ ｓｔｕｄｙ（ＧＷＡｓ）ｆｒｏｍ ｔｈｅ Ｏｃｃｉｄｅｎｔ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｄｉｃａｔｅｄ ｔｈａｔ：Ｔｈｅ ｒｓ １ ３２６６６３４ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｉｎ ＳＬＣ３０Ａ８ ｃｏｕｌｄ ｒａｉｓｅ ｔｈｅ ｒｉｓｋ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｆｏｒ ｄｉ ｆｆｅｒｅｎｔ ｒａｃｅｓ ｈａｖｅ ｄｉ ｆｆｅｒｅｎｔ ｇｅｎｅｔｉｃ ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ ａｎｄ ｌｉｖｉｎｇ ｅｎｖｉｒｏｍｅｎｔ，ｔｈｅｇｅｎｅｓ ｒｅｐｏｒｔｅｄ ｈａｖｉｎｇ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｄｉｓｅａｓｅ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｒａｃｅｓ ｗｏｕｌｄ ｍａｋｅｃｏｎｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｔｏ ｈｕｍａｎ ｃｏｍｐｌｅｘ ｄｉｓｅａｓｅｓ ｉｎ ｆｕｔｕｒｅ ｓｔｕｄｉｅｓ． Ｔｈｅ ｐｕｒｐｏｓｅ ｏｆ ｔｈｉｓ ｓｔｕｄｙ ｉｓ ｔｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ＳＮＰｓａｎｄ ｈａｐｌｏｔｙｐｅ ｉｎ ＳＬＣ３０Ａ８、ＴＣＦ７Ｌ２ ｇｅｎｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ ｐｅｏｐｌｅ ｌｉｖｉｎｇ ｉｎ ｔｈｅｓｏｕｔｈ．Ｆｒｏｍ ｐｒｏｂｉｎｇ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｒｅｌａｔｉｏｎｓ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｔｗｏ ｇｅｎｅｓ ａｎｄ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ，ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｎｇ ｔｈｅ ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ＳＮＰｓ ｆｏｒ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ ｐｅｏｐｌｅ ｗｈｉｃｈ ｃｏｕｌｄ ｂｅｂｅｎｅｆｉｃｉａｌ ｔｏ ｔｈｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｎ ｔｈｅ ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ ｏｆ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ．Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ： Ｔｏ ｓｔｕｄｙ ｔｈｅ ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ ｒｓ １ ３２６６６３４ ａｎｄｒｓｌ １ １９６２１８（ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ）ｉｎ ＳＬＣ３０Ａ８ ａｎｄ ＴＣＦ７Ｌ２ ｇｅｎｅｓ ａｎｄｔｈｅｉｒ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ，ＳＯ ａｓ ｔｏ ｐｒｏｂｅ ｉｎｔｏ ｔｈｅ ｉｎｖｏｌｖｅｍｅｎｔ ｏｆ 江苏大学硕士学位论文ＳＬＣ３０Ａ８ ａｎｄ ＴＣＦ７Ｌ２ ｉｎ ｔｈｅ ｅｔｉｏｌｏｇｙ ｏｆｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ（Ｔ２ＤＭ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ： Ｔｈｅ ｒｓ １ ３２６６６３４ ａｎｄ ｒｓ ｌ ｌ １ ９６２１ ８ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ ｏｆ ＳＬＣ３０Ａ８ ａｎｄ ＴＣＦ７Ｌ２ｇｅｎｅｓ ｗｅｒｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｄ ｉｎ ４５９ Ｈａｎ ｎａｔｉｏｎａｌｉｔｉｅｓ ｌｉｖｉｎｇ ａｒｏｕｎｄ Ｓｈａｎｇｈａｉ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ ２５９ｐａｔｉｅｎｔｓ ｗｉｔｈ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ（Ｔ２ＤＭ ｇｒｏｕｐ）ａｎｄ ２００ ｎｏｒｍａｌ ｃｏｎｔｒｏｌｓ（ＮＣ ｇｒｏｕｐ），ｂｙｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ ｃｈａｉｎ ｒｅａｃｔｉｏｎ?－ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ ｆｒａｇｍｅｎｔ ｌｅｎｇｔｈ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ（ＰＣＲ－?ＲＦＬＰ）ｍｅｔｈｏｄ．Ｃｈｉ―ｓｑｕａｒｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｔｅｓｔ ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｔｗｏｇｅｎｅｓ ｆｏｌｌｏｗｅｄ ｂｙ Ｈａｒｄｙ―Ｗｅｉｎｂｅｒｇ ｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ．Ｂｏｄｙ ｍａｓｓ ｉｎｄｅｘ（ＢＭＩ），ｐｌａｓｍｇｌｕｃｏｓｅ，ｓｅｒｕｍ ｉｎｓｕｌｉｎ ａｎｄ ｌｉｐｉｄ ｐｒｏｆｉｌｅ，ＨＯＭＡ―ＩＲ ａｎｄ ＨＯＭＡ一８ ｗｅｒｅ ａｎａｌｙｚｅｄ ｔｏｅｓｔｉｍａｔｅ ｔｈｅ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ ａｎｄ Ｂ．ｃｅｌｌ ｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｒｅｓｕｌｔｓ： （Ｄｉｎ Ｔ２ＤＭ ｇｒｏｕｐ，ｔｈｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ Ｃ ａｌｌｅｌｅ（Ｚ２＝９．８３ １，Ｐ＝Ｏ．００２）ａｎｄ ＣＣ ｇｅｎｏｔｙｐｅｏｆ ｒｓ １ ３２６６６３４ ｗｅｒｅ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｈｉｇｈｅｒ Ｔｈａｎ ｔｈｏｓｅ ｉｎ ｔｈｅ ＮＣ ｇｒｏｕｐ（ｆ＝１２．５９８，Ｐ＝０．００２） ＠Ｔｈｅ Ｃ－ａｌｌｅｌｅ ｏｆ ｒｓ １ ３２６６６３４ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｉｎｃｒｅａｓｅｄ Ｔ２ＤＭ ｒｉｓｋ ｗｉｔｈ ａｎ ａｌｌｅｌｉｃ ｏｄｄｒａｔｉｏ（ＯＲ）ｏｆ １．５９（ＯＲ＝Ｉ．５９，９５％ＣＩ为１．１９―２．１１），ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｎｏｎ―ｃａｒｒｉｅｒｓ，ｈｏｍｏｚｙｇｏｕｓ ｃａｒｒｉｅｒｓ ｏｆ Ｃ ａｌｌｅｌｅ ｗｅｒｅ ｌｉａｂｌｅ ｔｏ ｈａｖｅ ｔｙｐｅ ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ ｗｉｔｈＯＲ＝２．６３（ＯＲ＝２．６３，９５％ＣＩ＝１．４２―４．８７，‖＝９．６９，Ｐ＝０．００２）． ③Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅ ｏｆ ＣＣ ｗｅｒｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｄｅｃｒｅａｓｅｄ ｉｎｓｕｌｉｎ ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ ｂｕｔ ｎｏｔｗｉｔｈ ｉｎｓｕｌｉｎ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ． ④Ｔｈｅ ｇｅｎｏｔｙｐｅｓ ａｎｄ ａｌｌｅｌｅ ｆｒｅｑｕｅｎｃｉｅｓ ｏｆ ＴＣＦ７Ｌ２（ｒｓ ｌｌ １ ９６２ ｌ ８）ｉｎ ｔｙｐｅ ２ｄｉａｂｅｔｅｓ ｍｅｌｌｉｔｕｓ ｗｅｒｅ ｎｏｔ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｂｅｔｗｅｅｎ ｃａｓｅｓ ａｎｄ ｃｏｎｔｒｏｌｓ（Ｐ＞０．０５）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：Ｔｈｅｓｅ ｒｅｓｕｌｔｓ ｉｎｄｉｃａｔｅ ｔｈａｔ Ｃ ａｌｌｅｌｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｒｓ １ ３２６６６３４ ｓｉｔｅ ｉｎＳＬＣ３０Ａ８ ｇｅｎｅ ｍｉｇｈｔ ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ Ｔ２ＤＭ．Ｓｕｇｇｅｓｔｉｎｇ ｔｈａｔ ＳＬＣ３０Ａ８ ｍｉｇｈｔ ｂｅ ａｓｕｓｃｅｐｔｉｂｌｅ ｇｅｎｅ ｆｏｒ Ｔ２ＤＭ ｉｎ ｔｈｅ Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｃｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ，ｗｈｉｌｅ ｔｈｅｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｏｆ ｒｓ ｌ ｌ １ ９６２ ｌ ８ ｓｉｔｅ ｉｎ ＴＣＦ７Ｌ２ ｇｅｎｅ ｍａｙ ｎｏｔ ｂｅ ａ ｒｉｓｋ ｆａｃｔｏｒ ｆｏｒ ｏｕｒＣｈｉｎｅｓｅ Ｈａｎ ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ．ＫＥＹ ＷＯＲＤＳ：Ｓｉｎｇｌｅ ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ；ＳＬＣ３０Ａ８ ｇｅｎｅ；ＴＣＦ７Ｌ２ ｇｅｎｅ；Ｔｙｐｅ２ ｄｉａｂｅｔｅｓ． ＩＶ １．６ ＳＬＣ３０Ａ８基因多态性与２型糖尿病的关系……………．．．……………………………６第二章材料与方法………………………………………………………………………………．８ ２．１材料…………………………………………………………………………………………………………………一８ ２．１．１研究对象………………………………………………………………………………．８ ２．１．２药品和试剂………………………………………………………………………８ ２．１．３引物…………………………………………………………………………………………………………９ ２．２研究方法…………………………………………………………………………………９ ２．２．１样本采集…………………………………………………………………………９ ２．２．２操作流程…………………………………………………………………………ｌ ０ ２．２．３基因组ＤＮＡ提取（柱层析法）………………………………………………１０ ２．２．４引物序列……………………………………………………………………１２ ２．２．５基因特定片段的ＰＣＲ扩增……………………………………………………１２ ２．２．６限制性酶切……………………………………………………………………一１ ３ ２．２．７ ４％的琼脂糖凝胶电泳……………………………………………………………１４ ２．２．８统计方法………………………………………………………………………一１ ６第三章结果与分析……………………………………………………………………………一ｌ ７ ３．１临床资料的比较………………………………………………………………………．１７ ３．２各组基因型频率和等位基因频率分析………………………………………………．１８ ３．２．１聃１３２６６６３４………………………………………………………………………………………………１８ Ｖ 江苏大学硕士学位论文 ３．２．２ ｒｓｌｌｌ９６２１８………………………………………………………………………………………………１８ ３：３糖尿病患者不同基因型间的人体测量学、代谢指标的比较………………………．１９ ３．３．２璐１１１９６２１８………………………………………………………………………………………………１９第四章讨论………………………………………………………………………………………２ １ ４．１ ＴＣＦ７Ｌ２基因及ＳＬＣ３０Ａ８基因与Ｔ２ＤＭ的关系……………………………………２ｌ ４．２ ＴＣＦ７Ｌ２基因的研究展望………………………………………………………………２３ ４．２．１ Ｗｎｔ信号传导通路与ＴＣＦ７Ｌ２的功能：……………………………………一２３ ４．２．２转录因子ＴＣＦ７Ｌ２与胰岛Ｂ细胞的关系：…………………………………．２３ ４．２．３ ＴＣＦ７Ｌ２基因型变异导致了前胰岛素加工障碍：……………………………２３ ４．２．４与ＴＣＦ７Ｌ２有关的治疗糖尿病的新方法：…………………………………。&&&&２４ ４．３ ＳＮＰ的检测方法及存在问题……………………………………………………………２５ ４．３．１ ＳＮＰ的检测方法…………………………………………………………………２５ ４．３．２ ＳＮＰ研究中存在……………………………………………………………２５结论………………………………………………………………………………………………………………………………２６致 谢………………………………………………………………．．．………………………………………………．２７参考文献…………………………………………………………………………………２７附 录…………………………………………………………………………………………３４ ①论文词汇中英文对照表………………………………………………………………．．３４ ②人体测量………………………………………………………………………………．．３５硕士研究生期间科研成果………………………………………………………………………３６ ＶＩ 江苏大学硕士学位论文 第一章前 言１．１人类复杂疾病与２型糖尿病 复杂疾病（ｃｏｍｐｌｅｘ ｄｉｓｅａｓｅ）又叫多因子疾病（ｍｕｌｔｉｆａｃｔｏｒｉａｌ ｄｉｓｏｄｅｒｓ）或多基因疾病（ｐｏｌｙｇｅｎｉｃ ｄｉｓｏｄｅｒｓ），它是由多个基因和环境因子共同作用而引起的疾病，其性状变异呈现连续的数量级差的变化，不符合孟德尔遗传所具有的质量性状的变异特点１１１．这些疾病的形成受微效（或寡基因）等位基因的调节，每对基因彼此之间没有显性和隐性之分，而是共显性，多个基因的任何一个基因对于疾病的发生既不是必要条件也不是充分条件，还同时受多种环境因素的影响。&&&&随着国际人类基因组计划、单核苷酸多态性计划和单体型计划的相继实施，机体本身的遗传因素在疾病的发生和发展中的重要作用越来越受到人们的重视，并且已成为后基因组时代基因组学研究的热点领域之一１２１。&&&& ２型糖尿病（Ｔ２ＤＭ）属于复杂性复杂性疾病，一般认为该疾病有以下特点：１）参与发病的遗传因素为多个，每个基因直接或间接对中间性状的影响促进疾病的发生；２）每个基因参与发病的程度不同，大多数基因的作用较小，但也可由一个或几个基因呈主效应；３）每个基因只赋予个体某种程度的易感性，但每个基因的作用不足以致病，也并非致病所需；４）各基因参与发病的机制可能是各自对不同的生物学途径影响所致，疾病的最终发生是各基因在不同途径作用的综合结果；５）各基因致病效应的累积加上环境因素的作用构成了个体的疾病易患性，当易患性超过一定阈值时即可导致疾病发生。&&&&１．２ ２型糖尿病的遗传学研究方法 目前，对于Ｔ２ＤＭ、心脑血管病等复杂疾病易感基因的研究方法主要有两种，候选基因策略的关联分析和全基因组扫描的连锁分析‘３’们。&&&& 候选基因策略的关联分析是指在已知候选基因位置时，选择在糖尿病发病过 江苏大学硕士学位论文程中与（血）糖代谢、脂代谢及信号转导等有关的蛋白或酶的基因作为疾病的候选基因，对于该基因编码序列（外显子）或非编码序列（内含子或启动子附近调控序列）的多态性标记进行基因研究。&&&&即采用病例．对照分析的方法，检测两组人群该多态性位点的基因频率比较差别是否存在显著性，以筛查可能的易感基因。&&&& 全基因组扫描的连锁分析是指在不需要事先了解该基因位置或生物学功能及致病机制的情况下，利用高密度的多态性标志，通过全基因组扫描划定与疾病相关的易感区域，再在此区域内选择适当的多态性标记精细扫描，然后根据连锁不平衡（１ｉｎｋａｇｅ ｄｉｓｅｑｕｉｌｉｂｒｉｕｍ，ＬＤ）的原理，分析评价疾病与标记物的相关性，从而定位与该疾病相关的染色体区域或致病基因。&&&& 候选基因策略的关联分析相对于全基因组扫描的连锁分析，研究对象是病人和正常人，无需家系资料，且更容易找出只有微弱效应的基因：即使显示关联的标记不是造成疾病的变异，但很可能与变异处于连锁不平衡（ＬＤ）ｔ５１，所以更适合于多遗传模式№，刀。&&&&１．３ ２型糖尿病研究中的多态性标记 先后有限制性片段长度多态性（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍｓ，ＲＦＬＰ）、短串联重复（Ｓｈｏｒｔ Ｔａｎｄｅｍ Ｒｅｐｅａｔ，ＳＴＲ）和单核苷酸多态性（Ｓｉｎｇｌｅｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ，ＳＮＰ）三代遗传标记隧１。&&&& ＲＦＬＰ为第一代遗传标记。&&&&是指ＤＮＡ顺序中的某个碱基突变使突变所在部位的ＤＮＡ序列产生（或缺失）某个ＤＮＡ限制性内切酶的酶切识别位点，表现为在不同个体中会出现不同数目及长度的限制性片段类型的一种多态现象。&&&&ＳＴＲ系第二代遗传标记，它是由２－６ｂｐ重复单位构成的ＤＮＡ序列，ＪＩ“泛分布于人类基因组，因其在人类基因组中出现的数目和重复次数不同表现高度多态性。&&&&ＳＮＰ即第三代遗传标记，ＳＮＰ是指群体中正常个体的基因组ＤＮＡ内的特定核苷酸位置上存在两种不同的碱基（等位基因），其中最少一种在群体中的频率不少于１％。&&&&ＳＮＰ是人类基因组中在常见的变异形式，月每千个ｂｐ就有一个以上的ＳＮＰ，分布密度及数最均远远多于其他类型的遗传标记物多态性。&&&&ＳＮＰ虽然分布于整个人 ２ 江苏大学硕士学位论文类基因组，但在单个基因或整个基因组中的分布不均匀，根据分布情况可将其分为三种形式：一是基因编码区ＳＮＰ（Ｃｏｄｉｎｇ－ｒｅｇｉｏｎ ＳＮＰ’ｃＳＮＰ），二是基因周边区ＳＮＰ（Ｐｅｒｉｇｅｎｉｃ ＳＮＰ，ｐＳＮＰ。&&&&包括５’和３’调控区），三是其它非编码区ＳＮＰ（包括内含子和基因之间链接区，ｉＳＮＰ），其中编码区ＳＮＰ少于非编码区ＳＮＰ。&&&&由于功能区ＳＮＰ对Ｔ２ＤＭ易感基因定位的意义可能大于非功能区ＳＮＰ，因此候选基因ＳＮＰ的筛选策略经常是：功能ＳＮＰ＞ｔ｝翻译区（启动子附近调控序列）ＳＮＰ＞内含子ＳＮＰ。&&&&ＳＮＰｓ通常是二等位基因（ｂｉａｌｌｅｌｌｉｃ）或二肽的遗传变异。&&&&尽管单位点ＳＮＰ提供的信息相对较少，但分布的高密度以及３―４个相邻的ＳＮＰｓ位点构成的单体型可达８．１６种，均弥补了信息量的不足；由于ＳＮＰ的二态性，非此即彼，在基因组筛选ＳＮＰ往往只需＋／－的分析进行基因分型而不用分析片段的长度，利于发展自动筛选ＳＮＰ技术；此外低的突变率使其遗传稳定性高于ＳＴＲ；部分位于基因内部的ＳＮＰ中包括的错义突变可能影响蛋白质的结构或基因水平的表达，直接与人类复杂遗传特征存在相关性，他它们本身可能就是疾病遗传机制的候选位点。&&&&由于ＳＮＰ上述“量大、高密度、稳定性好、具代表性，易于自动化检测”的这些优点，ＳＮＰ逐渐成为继ＲＦＬＰ、ＳＴＲ之后目前最常使用的第三代遗传标记物１９１０在不同人群中，ＳＮＰ的分布频率可能有差异，这些差异可能代表某一种族或人群间的遗传变异，对它们的研究有助于解释个体的表型差异、不同群体和个体对疾病、尤其是复杂疾病的易感性以及对各种药物的耐受性和对环境因素的反应。&&&&１．４ Ｔ２ＤＭ易感基因的研究进展 Ｔ２ＤＭ致病凶素复杂，由于遗传异质性，不同人群的致病基因不同，不同亚型的Ｔ２ＤＭ也可由不同的基因来解释，标记和致病基因ｌ’口Ｊ的连锁不平衡亦随人群而变化。&&&&这些因素均使Ｔ２ＤＭ易感基因研究面临挑战。&&&&迄今，Ｔ２ＤＭ的全基因扫描已在２０多个不同的群体中进行。&&&&包括欧洲人、美国白人、墨西哥裔美国人、美国本地印度人、非洲裔美国人和亚洲人，其中包括４个中国人群。&&&&全基因组扫描的结果表明，与Ｔ２ＤＭ显著连锁的基因组区域有ｌｑ２５、２ｑ３７、３ｑ２８、３ｐ２４、 江苏大学硕士学位论文６ｑ２２、８ｐ２３、１０ｑ２６、１２ｑ２４、１８ｐ１１和２０ｑ１３，只有１ｑ２５、２ｑ３７、６ｑ２２、１８ｐ１１和２０ｑ１３在中国人群的全基因组扫描中得到了证实。&&&& 已研究过的关于Ｔ２ＤＭ极其并发症的候选基因有上百个，主要涉及与胰岛Ｂ细胞胰岛素合成、分泌调节、周围胰岛素作用、糖代谢、脂代谢，肾素．血管紧张素系统及凝溶稳定等有关的激素、受体、载体及酶基因。&&&&如过氧化物酶增值激活受体吖（ＰＰＡＲＧ）、肝细胞核因子４ａ（ＨＮＦ．４ａ）、钙蛋白酶１０（ＣＡＰＮｌ０）、Ｂ细胞腺苷三磷酸敏感性钾通道（ＪＣＮＪｌｌ），磺酰脲受体一ｌ（ＳＵＲｌ）、胰岛素（ＩＮＳ）、胰岛素受体（ＩＮＳＲ）、脂连素（ＡＰＭｌ）等等。&&&&钙蛋白酶１０（ｃａｌｐａｉｎｌ０，ＣＡＰＮＩＯ）基因是第一个被定位克隆的Ｔ２ＤＭ易感基因〔１０１９定位于２ｑ，编码细胞质蛋白酶家族成员。&&&&Ｈｏｒｉｋａｗａ等报道了此区域内的ＣＡＰＮＩＯ基因与墨西哥裔美国人Ｔ２ＤＭ共联‘１¨。&&&&随后在其它人群的研究中表明，该基因的几个多态性影响个体对Ｔ２ＤＭ的易感性。&&&&在墨西哥裔美国人中４０％的家族聚集性Ｔ２ＤＭ是由该基因引起的，但在英国人群中影响较弱。&&&& 目前得到重复较好的候选基因有氧化物酶增值激活受体．（ＰＰＡＲ）丫基因、ＫＣＮＪｌ １基因、ＴＣＦ７Ｌ２基因等。&&&&在芬兰人中（ＰＰＡＲ）１，基因Ｐｒ０１２Ａｌａ变异降低ＰＰＡＲ受体活性，改善胰岛素敏感性，说明Ａｌａｌ２可降低芬兰人患Ｔ２ＤＭ的风险。&&&&Ａｌｔｓｈｕｌｅｒ等综合分析１６个与Ｔ２ＤＭ关联的多态性位点，只确定了Ｐｒｏｌ２Ａｌａ与Ｔ２ＤＭ的关联关系。&&&&其它候选基因与Ｔ２ＤＭ的相关性还有待于今后在不同的人群和种族中进一步复查和验证ｔ１２１。&&&& ２００７年大约有５个研究小组报道了谈们采用全基因组关联扫描（Ｇｅｎｏｍｅｗｉｄｅ ｓｃａｎｓ ｆｏｒ ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ＧＷＳＡ）的方法寻找Ｔ２ＤＭ易感性基因的研究成果１１３１，其中有三个比较重要的小组分别是美国密歇根大学的Ｍｉｃｈａｅｌ Ｂｏｅｈｎｋｅ教授领导的Ｎａｔｒｅｃｏｒ注射随访研究（ＦＵＳＩＯＮ），牛津大学的Ｍａｒｋ ＭｃＣａｎｈｙ教授领导的英国威康信托基金会病例控制协会研究（ＷＴＣＣＣ／ＵＫＴ２Ｄ）和哈弗大学的ＤａｖｉｄＡｌｔｓｈｕｌｅｒ教授领导的“糖尿病病学遗传计划”研究（ＤＧＩ）。&&&&此三项研究共对３２５４４例Ｔ２ＤＭ患者和健康对照个体进行了ＧＷＳＡ，发现了三个全新的遗传学变异区，从而认为这些区域与Ｔ２ＤＭ密切相关，包括（１）位于９号染色体上，接近周期蛋白依赖性激酶（ＣＤＫ）抑制凶子２Ａ和２Ｂ；（２）位于６号染色体上的ＣＤＫ５调节亚组相关蛋白（ＣＤＫＡＬｌ １）；位于３号染色体上的胰岛素样生长因子２结合 ４ 江苏大学硕士学位论文蛋白（ＩＧＦ２ＢＰ２）。&&&&而且此３项研究还验证了已知的与Ｔ２ＤＭ相关的易感基因，如ＨＨＥＸ、ＰＰＡＲＴ、ＫＣＮＪｌｌ、ＳＬＣ３０Ａ８和ＴＣＦ７Ｌ２。&&&&ＦＵＳＩＯＮ研究还发现位于１６号染色体的ＦＴＯ基因突变增加Ｔ２ＤＭ易感性，但是在ＷＴＣＣＣ／ＵＫＴ２Ｄ研究中这种关联用体质指数调整后就不存在，故ＭｃＣａｒｔｈｙ教授认为ＦＴＯ基因本质上应属于肥胖易感基因。&&&&而且，ＤＧＩ研究还发现葡萄糖激酶调节蛋白（ＧＣＫＲ）的ｒｓ７８００９４ＳＮＰ位点与血浆甘油三脂水平和血糖稳态密切相关。&&&& Ｔ２ＤＭ是一种多基因遗传异质性疾病，其遗传背景十分复杂，且不同的个体有不同的基因参与其发病，同一个体又可能有诺干个致病基因，单一基因只是以不同的概率参与疾病的发生，且受到环境因素及多种行为危险因素的共同作用，所以阐明Ｔ２ＤＭ易感基因极其与环境因素及行为危险因素相互作用的发病机制并非易事，通过筛查Ｔ２ＤＭ某些易感基因，及早发现高危.
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