应用间接ELISA检测犬冠状病毒抗体_藏獒疾病 - 藏獒网
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应用间接ELISA检测犬冠状病毒抗体&&
目前检测冠状病毒(CCV)抗体的方法有蚀斑减数中和试验、微量血清中和试验、ELISA、间接荧光抗体技术(IFA)等［1～3］。中和试验以其敏感、特异、稳定等特点为国内外学者所公认，但中和试验所需时间长，操作复杂，不利于大规模样品的检测及基层单位使用。为此进行了本研究。&1　材料与方法&1.1　种毒与细胞　CCV&NL-18参考株与CRFK细胞，引自美国，由本室殷震院士惠赠；犬肾(DK)传代细胞，由加拿大多伦多大学Compell博士惠赠；细胞生长液，为含10%新生犊牛血清的MEM培养液，维持液中不含新生犊牛血清，MEM为Sigma公司产品。&1.2　血清　CCV阳性对照血清，由本室保存，中和抗体效价为1∶500；CCV阴性对照血清，为本室保存的健康犬血清，中和抗体效价低于1∶4；待检犬血清，采自黑龙江、吉林、内蒙等地未注射CCV疫苗的犬。&1.3　包被抗原的制备　将CCV&NL-18株接种于已形成单层的DK细胞，常规培养，待细胞出现病变并脱落后，将病毒培养液以3&000&r/min离心30&min，弃上清。未脱落的细胞用分散液(胰酶-EDTA混合分散液)从培养瓶中消化下来，3&000&r/min离心30&min，弃上清。将上述2&种方法获得的细胞混合物，加入0.05&mol/L碳酸盐缓冲液(NaHCO31.59&g,&Na2CO3&2.93&g/L,pH9.6)，细胞计数后，保存于-20℃冰箱中。阴性抗原采用正常细胞，经消化后按上述同样方法制备。&1.4　固定条件的筛选　取阳性抗原包被酶联反应板，各反应孔中的包被量相同。选择甲醇、乙醇、10%甲醛、10%乙醇+4%冰醋酸作为固定剂分别加入到反应孔中，加入量为0.05&mL/孔。固定时间选择5&、15、30、60、120&min，以未固定的病毒抗原作为对照。同时，以阴性细胞包被反应板，取上述固定剂固定，固定时间选择30&min，以未固定的阴性细胞作为对照。测定阳性对照血清的间接ELISA结果。&1.5　阳性血清的判定标准与OD值界限的筛选　利用阳性、阴性抗原包被酶联反应板，选择中和抗体阳性、阴性血清，测定其不同稀释度的间接ELISA结果。&1.6　间接ELISA术式　将保存的病毒抗原融化，以0.05&mol/L碳酸盐缓冲液稀释，加入到酶联反应板孔内，0.05&mL/孔，吹干，每孔加入0.05&mL的固定液固定。用0.01&mol/L&PBS-Tween冲洗3次，每次3&min，犬血清经PBS稀释后，加入到反应孔中，0.05&mL/孔。将反应板置于37℃恒温箱中1&h，按上述方法洗3次。再加入经PBS稀释的HRP-SPA(上海欣生公司产品，工作浓度为1∶40)，0.05&mL/孔，置37℃感作1&h，冲洗3次。加入底物溶液0.1&mL/孔。底物溶液为含50&mL&0.1&mol/L柠檬酸，50&mL&0.2&mol/L&Na2HPO4，40&mg邻苯二胺(OPD)和0.015&mL&30%H2O2。常温避光显色30&min后，加入2&mol/L&H2SO4，0.05&mL/孔，终止反应。利用酶联反应检测仪(上海产)在492&nm处测量反应孔的光密度(OD)。&1.7　CCV中和试验　采用固定病毒-稀释血清法。将采集的新鲜犬血液常温下放置1&h，血液充分自凝后，5&000&r/min离心30&min，过滤除菌。将血清2倍系列稀释10个稀释度，分别加入等量固定浓度为100&TCID50的病毒悬液，置37℃感作1&h后，接种于已形成良好CRFK细胞单层的培养板，每孔0.1&mL，每个稀释度加4孔，37℃吸附1&h。每孔再加维持液0.9&mL，置37℃、60%～80%湿度、5%CO2条件下继续培养4&d，以试验孔出现多核巨细胞作为未保护标准，按改进的Reed-Muench法计算血清中和效价，以中和效价不低于1∶4作为CCV抗体阳性的判定标准。&2　结果&2.1　包被抗原收获时间　利用不同时间收获的病毒作为抗原分别包被酶反应板，测定标准阳性血清的间接ELISA结果(以OD值表示，见图1)。可以看出，随着收毒时间的延长，测定的OD值逐渐升高。4&d和5&d收获的病毒抗原所测定的OD值最高。本试验在制备包被抗原时将收毒时间确定为4&d。&图1　抗原收获时间对ELISA结果的影响&2.2　抗原包被量　当包被的染毒细胞数从1.2×105/孔下降到3.0×104/孔时，阳性血清的OD值只略有下降，但是当抗原包被量从3.0×104/孔下降到3.75×103/孔时，OD值变化较大，从1.5降至0.5(图2)。故本试验将抗原包被量确定为3.0×104/孔。&图2　包被的染毒细胞数对ELISA结果的影响&2.3　固定剂与固定时间　固定的阴性抗原测得的OD值低于未固定的阴性抗原。阳性抗原经固定后，测定的OD值高于未固定的阳性抗原。甲醇和甲醛的固定效果优于乙醇和10%乙醇+4%冰醋酸。本试验将甲醇作为固定剂。在固定时间选择中可看出，固定30&min、1&h、2&h对结果无明显影响(见表1)。本试验将30&min作为固定时间。&2.4　阳性血清的判定标准与OD值界限　利用阳性抗原板测定中和试验阳性血清，20倍稀释时的OD值高于0.3；利用阴性抗原板测定中和试验阳性血清，2～10倍稀释时OD值在0.5～0.2之间，20倍稀释时OD值低于0.2。中和试验阴性血清无论用阳性和阴性抗原板测定，结果均与阳性血清利用阴性抗原板测定的结果相同。据此，以0.2作为OD值的判定界限，20倍稀释的待检血清，若其ELISA检测结果OD值高于0.2，则判定该血清为ELISA抗体阳性血清，否则为阴性血清。&2.5　间接ELISA与中和试验检测结果的比较　分别利用中和试验和间接ELISA测定35份犬血清的CCV抗体效价(图3)，血清效价以OD值高于0.2时的最高稀释倍数表示。5份中和抗体阴性血清的ELISA效价低于1∶20，30份中和抗体阳性血清的间接ELISA测定结果均为阳性。经统计学处理表明，2种方法的测定结果呈正相关(P＜0.05，r＝0.82)。&表1　不同条件下固定抗原对ELISA结果的影响OD值&图3　35份犬血清间接ELISA与中和试验结果比较&3　讨论&本试验建立了检测CCV抗体的间接ELISA方法，经初步应用证实，该方法敏感、特异、快速，可以替代中和试验进行大量的血清样品的检测。该方法以SPA作为酶标记的第2抗体，证实SPA能够与犬IgG特异结合，而HRP-SPA已经是商品化试剂，从而省略了以犬IgG免疫其他动物提纯IgG、HRP标记等繁琐步骤，有利于该方法的推广使用［4］。在操作过程中发现，包被抗原的制备、固定条件以及阳性血清的判定标准对试验结果有很大影响。&3.1　以DK细胞制备包被抗原　本试验所检测的犬主要为军、警犬和宠物犬。这些犬注射过犬用疫苗。而疫苗在生产过程中，不可避免地含有牛血清蛋白及犬细胞、猫细胞中的蛋白质成分。这些成分作为异种抗原能刺激犬体产生相应的抗体。如果利用猫肾传代细胞制备CCV抗原，则犬体内的抗体与细胞成分会发生特异性的抗原-抗体反应，虽然较病毒与相应抗CCV抗体的反应弱，但却成为间接ELISA反应中的非特异性影响因素。单纯地提纯病毒抗原，可以部分地去除细胞成分，但仍不可避免上述反应的发生。选用有病毒增殖的DK细胞作为包被抗原，可以降低非特异性反应的发生。因为犬体对于犬细胞中的蛋白成分可以产生部分免疫耐受，免疫应答反应弱，犬体产生的抗犬细胞蛋白成分的抗体量很低。在实际应用中，适当地提高阳性血清的判定标准，DK细胞与待检样品中的抗犬细胞成分的抗体虽有反应，但不至于影响最终结果的判定。因此，利用本试验方法可以检出免疫犬的抗体水平。&3.2　收毒时间　CCV接种DK细胞后，病毒增殖并释放，引起细胞病变，部分细胞变圆、脱落。据报道，单层接毒后继续培养24～36&h收获的病毒感染力最强［5］。本试验以不同时间收获的细胞作为包被抗原，对标准阳性血清测定的OD值表明，待细胞完全病变后作为包被抗原效果好。虽然收毒时间延长至4&d，早期成熟并释放的病毒感染力下降，但是其并未丧失与CCV抗体发生特异性反应的能力。收毒时间延长，病变细胞数量增多，与特异抗体的反应能力增强，包被酶联反应板时可以减少抗原的使用量，从而降低反应的非特异性。&3.3　固定条件　包被的病毒抗原经甲醇固定后，一方面可以降低非特异性反应。利用阴性抗原包被酶联反应板测定阳性对照血清的OD值，固定后的抗原所测定的结果显著低于未固定的抗原所测定的结果。甲醇作为有机溶剂，可以溶解部分脂类及蛋白成分，减少此类物质与血清中的IgG发生非特异性吸附。另一方面，可以提高与阳性血清发生特异反应的能力。CCV隶属于冠状病毒科，是单链正股RNA病毒，病毒蛋白质的合成发生于聚核蛋白体上，核衣壳的装配发生在胞浆的病毒工厂(毒浆)内，并在内质网和高尔基体的囊状膜上出芽成熟，且在此时附加囊膜突起。甲醇作为有机溶剂，可以提高细胞膜的通透性，使抗原位点暴露，增强抗原与抗体的结合能力［6］。试验中还发现，常用固定剂乙醇对CCV的固定效果不及甲醇和甲醛，其原因有待进一步探讨。&3.4　阳性血清的判定标准与OD值界限　本试验证实，间接ELISA与中和试验检测CCV抗体效价的结果具有相关性，但在中和抗体效价低的样品利用2种方法测得的结果差别较大。部分中和抗体阳性血清呈现较低的ELISA效价，部分中和抗体阴性血清的ELISA效价偏高。这一方面是非特异性反应的原因，同时也与阳性血清的判定标准有关。本试验在确定阳性标准时，选择的对照血清例数少，经统计学处理后的结果与实际标准的误差增加。另外，本试验是利用HRP标记SPA作为第2抗体参与反应，SPA与犬IgG的Fc片段结合力强，而与IgM的结合力尚未确定，中和试验却可以检测出犬感染CCV后早期IgM的变化。在实际检测时，可以适当提高阳性血清的判定标准，这样虽然可能由于阳性标准的提高而造成漏检，但却可以保证该方法的特异性。此外，如果用抗γ-球蛋白的酶标抗体代替HRP-SPA，就有可能检出低水平的抗体和感染初期的抗体［7］。OD
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胰酶消化细胞的原理 什么叫细胞消化？
相关解答一：人体能消化细胞壁吗 ---构成植物细胞壁的三个主要成分是：①纤维素，占细胞壁干重的25 ％至50％不等；②半纤维素，平均约占细胞壁干重的53％左右；③果胶质，一般占细胞壁的5％。---因为人体缺乏纤维素酶和果胶酶，所以人体无法消化纤维素和果胶，也无法吸收；但纤维素是分易溶于水的纤维素和不溶于水的纤维素，它们合称为膳食纤维，所以其实人体也能吸收一少部分的～！虽然人体不能分解植物纤维素，但纤维素对人体有着重要作用1、稀释大肠中的致癌物质，缩短其通过肠道的时间，预防大肠癌。2、调节血糖，有助于预防糖尿病。3、降低血胆固醇，有助预防高血压心脑血管疾病。4、防止便秘。5、增加饱腹感，有助控制体重。其实无论是吃西红柿还是其他水果都需要细吞慢咽，这个过程就是让你用牙齿破坏植物的细胞壁，使细胞内的营养能够很好的被人体吸收利用相关解答二：人的体液分为细胞内液和细胞外液，消化液属于什么 都不属于 根本不属于内环境相关解答三：呼吸道上皮细胞和消化道上皮细胞有什么区别? 呼吸道上皮细胞属于假复层纤毛柱状上皮，分布于呼吸道的内表面，主要由柱状，杯形，梭形和锥形等不同形状细胞组成。看上去像复层上皮，但实际上所有细胞底部均附于基膜上，属单穿上皮，故称假复层柱状上皮，上皮表面有纤毛，杯状细胞可分泌粘液，包裹着大量细菌，借助纤毛不断摆动将其慢慢移动至出消化道，这就是痰。一般来说消化道大段的上皮属单层柱状上皮，但是消化道的两端即口腔、咽、食管、肛门的上皮属于复层扁平上皮；小肠的上皮表面有微绒毛，增加吸收表面积利于吸收。相关解答四：为什么有的细胞消化以后容易相互聚集，有的细胞则不会呢？ 个人认为是消化程度的问题。如果胰酶处理过度，细胞就会吹不散，形成絮状。原因是胰酶作用于细胞膜蛋白，过度处理引起细胞膜破裂，破裂细胞的DNA粘连在一起。---------最近培养PC12的时候也遇到细胞聚集的问题，我查了一些资料，有些细胞就是这样的，容易聚集成团，消化之后一定要吹匀。消化时用低浓度的胰酶有利于形成单细胞悬液。相关解答五：能分泌多种消化酶的细胞是胰腺的是什么细胞? 能分泌多种消化酶的细胞是胰腺的外分泌腺细胞。胰腺分为外分泌腺和内分泌腺两部分。外分泌腺由腺泡和腺管组成，腺泡分泌胰液，腺管是胰液排出的通道。胰液中含有碳酸氢钠、胰蛋白酶原、脂肪酶、淀粉酶等。胰液通过胰腺管排入十二指肠，有消化蛋白质、脂肪和糖的作用。相关解答六：消化液为什么不是细胞外液 细胞外液分为血浆和组织间液，绝大部分的组织间液能够迅速地与血管内的液体或细胞内液进行交换取得平衡，这在维持机体的水和电解质方面具有重要作用，故又称其为功能性细胞外液。另一部分液体在维持体液平衡方面的作用甚小，但他们具有各自的功能。结缔组织液和所谓透细胞液，例如脑脊液关节液和消化液等，都属于无功能性细胞外液。——外科学第七版在外科学第七版教材里，消化液是属于细胞外液的。但是在细胞外液的定义中：人体内,存在于细胞外的体液叫做细胞外液。主要包括:组织液(组织间隙液的简称)、血浆（血液的液体部分）和淋巴、脑脊液等。组织液具体指细胞生活的溶剂大环境，成分包括有人体需要的有待吸收的各种营养成分以及少量无机盐成分和水等。组织液的功能是细胞游离的大环境以及代谢交换的场所和渠道。胃液、唾液属于带有消化酶的成分载体，由此可知，胃液、唾液不属于组织液。消化液是属于外分泌液，不是钉体内环境里，所以是不属于细胞外液的。在不同的地方定义都不是绝对的，有些教材也是不严谨的，只要你懂得，在你需要的那个领域，各自的定义是如何，这个问题就迎刃而解了。相关解答七：消化酶是蛋白质吗？它是由细胞分泌的吗？ 可以说人体中绝大部门的酶都是蛋白质，只有很少一部分不是，在高中的第三本书中会提到这些！一般消化酶的作用是水解，有的消化酶由消化腺分泌，有的参与细胞内消化。细胞外消化酶中，有以胃蛋白酶原、胰蛋白酶原、羧肽酶原等一些不活化酶原的形式分泌然后再被活化的。消化酶的特点总结消化酶是人体消化器官分泌的消罚液中所含有的物质，是一种蛋白质。消化酶的主要作用是将食物分解为人体能够吸收的小分子物质。所有的酶都是专一的，一种酶只催化另一种或一类化学反应，所以消化酶有很多种。消化酶具有生物活性，其受外部环境影响很大（温度，湿度，酸碱度）等。常见的消化酶药物：慷彼申、多酶片、酵母片等相关解答八：胰酶消化细胞的原理是什么 胰酶是一种蛋白酶。通过在特定位置上降解蛋白，使细胞间结合处蛋白降解，这时细胞由于自身内部细胞骨架的张力作用下成为球形，从而使细胞分开。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2 、Mg2 和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2 、Mg2 的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。相关解答九：细胞消化过度了有什么好的办法补救吗 博凌科为生物科技-为你解答：一般细胞消化到掉下来是没问题的。如果针对你这种细胞来说是消过了的话，那接下来最要紧的是立刻加入培养基终止胰酶对细胞的继续作用，而不是用直接用胰酶吹打。加入培养基的量约为胰酶的1-2倍，然后离心去上清，培养基重悬，这时应该注意将细胞吹散，因为一般胰酶消化过度之后细胞容易聚集成团，不吹散的话会严重影响细胞状态。吹打不宜过猛，20下左右，肉眼完全看不到颗粒状悬浮后再吹几下就行（当然你视力要好^^）。另外，细胞状态不好有的可以恢复，有的不能恢复。如果是可以恢复的你只要好好继续培养就行；而不能恢复的话状态不好的细胞以后会挂，换液除去漂浮的死细胞就行了，一般不用特意去除状态不好的细胞。相关解答十：胰酶消化细胞的原理是什么 胰酶是一种蛋白酶。通过在特定位置上降解蛋白，使细胞间结合处蛋白降解，这时细胞由于自身内部细胞骨架的张力作用下成为球形，从而使细胞分开。不同的组织或者细胞对胰酶的作用反应不一样。胰酶分散细胞的活性还与其浓度、温度和作用时间有关，在pH为8.0、温度为37℃时，胰酶溶液的作用能力最强。使用胰酶时，应把握好浓度、温度和时间，以免消化过度造成细胞损伤。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白质克降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液时应选用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如：D-Hanks液。终止消化时，可用含有血清培养液或者胰酶抑制剂终止胰酶对细胞的作用。胰酶本身就是消化蛋白的，而细胞膜又富含各种膜蛋白，消化过头会对细胞造成损伤的。百度搜索“就爱阅读”,专业资料,生活学习,尽在就爱阅读网,您的在线图书馆
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上海莼试生物技术有限公司专业经营生科研化试剂、分析试剂 ， 代理 许多国际先进水平的高科技产品，包括分子生物学、细胞生物学、免疫学、诊断等多个研究及应用领域。我们努力将欧美专业生产厂家的具有国际先进水平的产品推荐给各类研究人员；另一方面也非常重视自主产品研究和开发，推出了一系列具有竞争力的产品和服务。同时国家对于生物行业的发展给予了极大的重视，更多地侧重于科研的投入。 公司客户遍布大学、研究所、医院、卫生防疫、商品检验检疫、制药公司、生物技术公司和食品工业等单位。公司的服务和业务 在同行获得一致好评。其立足于生命科学领域，全力打造高品质生物科技产品链和技术服务链，也具备丰富的管理经验，同时我们建立了集技术支持、售后服务等多方位的服务体系。我们有激情、有理想，更有责任感，是您科研道路上值得信赖的伙伴。 公司的理念是：以诚信为本，努力打造优质品牌，为您提供全方位的售中、售后服务。
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& && & 请教各位前辈，文献里写如用含EDTA消化液，应先用HANKS液将消化液冲掉，再加培养基。那用含EDTA的胰酶消化全骨髓法培养的间充质干细胞时，具体应该怎样操作？
先加入HANKS液的话，消化下来的干细胞不是就随倒掉液体也一起被倒掉了吗？先加入HANKS液的话，消化下来的干细胞不是就随倒掉液体也一起被倒掉了吗？
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首先，我们用胰酶的目的是让贴壁的间充质干细胞从壁上脱落下来，
其次，加入EDTA的目的是螯合二价离子，提高酶的活性。) g/ f1 _/ i% M7 r0 M* a, W% W
然后，注意事项，消化前要用盐水冲洗两边，目的去掉参与的培养基，提高消化效率；消化完了要加培养基终止消化（原因是培养基中蛋白质多你懂的）。
最后，离心去上清（去掉胰酶什么的），得到细胞* h- u' {( ?9 [/ O7 `
所以不知道你加HANKS干嘛用的！
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Demon_CN 说明的很清楚。HANKS也是一种缓冲液，与PBS的作用是类似的。
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我们不用Hanks液，都用PBS。1 J; V" h) A7 i* h. p6 W
吸掉培养基，PBS洗。加胰酶-EDTA消化后，培养基（含血清）终止消化，用PBS收集细胞到离心管，1000r，5min，细胞可以计数冻存或传代。' d* z1 q1 o# b
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或者加胰酶-EDTA后，快速混匀一下（让所有细胞都接触到胰酶），然后弃掉胰酶，细胞只与少量胰酶接触。轻拍，等细胞消化下来后，直接加培养基，可以继续培养或按比例传代。
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溶液中的Ca2+、Mg2+和血清会降低胰酶活力，普通的HANKS液是含Ca2+、Mg2+的，所以用PBS或盐水冲洗培养基都比HANKS好吧。细胞间形成和维持紧密连接是需要Ca2+、Mg2+的，而EDTA的作用是螯合Ca2+、Mg2+，是用胰酶消化后脱离瓶壁的细胞进一步分散成单个细胞。用HANKS同样会对EDTA的作用造成影响。
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倒掉原来培养基，PBS洗，含有EDTA的胰酶消化，核固缩，细胞部分脱落，含血清培养基中和，离心，去上清，重悬。
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& 细胞培养与病毒培养实验步骤
细胞培养与病毒培养实验步骤
传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养
一、实验目的
了解倒置显微镜的构造与使用，了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特征，掌握细胞的传代培养方法、病毒接种方法及收毒方法。
二、常用细胞的种类
BHK-21：仓鼠肾传代细胞 PK-15：猪肾传代细胞 IBRS-2：猪肾传代细胞 Hela：人的子宫瘤细胞 Vero：非洲绿猴肾细胞 Marc-145：来源于Vero细胞 TK-143：人的胸苷激酶阴性细胞 Sf9：昆虫细胞
1、100ml细胞瓶、吸管、吸球、96孔细胞培养板、加样器、枪头 2、BHK-21（baby hamster kidney）细胞 3、0.25%胰酶
4、生长液：含10%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM
维持液：含2-5%犊牛血清、200U/ml青、链霉素的DMEM
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一二三四五六七 基本原理 细胞培养的基本概念 主要优点 培养实验用品的前期处理 培养细胞的生长方式及类型 细胞培养的实验步骤 病毒的细胞培养 赵健乔 ? ? ? ?...病毒感染细胞实验整体流程及原理_生物学_自然科学_专业资料。病毒感染细胞的一般...2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞 293T 等。 3) 培养 48hrs - 72...掌握细胞的传代方法、病毒接种方法及收毒 方法 ? 掌握半数细胞培养物感染 实验四 传代细胞培养与病毒感染力 (毒力)的滴定 一、实验目的 ? 了解不同细胞的形态...实验二一、实验目的 传代细胞培养与病毒在传代细胞中的培养 了解倒置显微镜的构造与使用, 了解不同传代细胞的形态及接毒后的病变特 征,掌握细胞的传代培养方法...实验二一、目的 鸡胚原代成纤维细胞的制备与培养 1、掌握鸡胚原代成纤维细胞的制备及培养的基本步骤; 2、掌握活细胞的显微镜下观察; 3 熟悉病毒在细胞内增殖的基...慢病毒包装实验的要点: 1:良好的 293FT 细胞状态是转染成功的首要因素,细胞...步骤四:24h 后吸出含病毒的培养基,加入 1ml 完全培养基,培养箱中培养 48h...实验二 传代细胞培养和病毒感染力(TCID50)的滴定 一、实验目的 ? 了解不同传代细胞的形态、传代方法。 ? 了解病毒感染力测定的几种方法。 ? 掌握半数细胞...病毒的细胞培养_生物学_自然科学_专业资料。病毒的细胞培养 病毒严格细胞内寄生,培养病毒必须使用细胞。实验动物、鸡胚都拥有大量活的细胞,可用 于病毒的培养。SPF ...病毒感染细胞实验整体流程及原理目的基因不能直接整合到大多数真核细胞, 常用的...2) 慢病毒载体,包装系统共转染病毒包装细胞 293T 等。 3) 培养 48hrs - 72...第二章 病毒的培养_生物学_自然科学_专业资料。第二章 病毒的培养本动物 实验...缺点:在传代过程中遭到支原体和病毒的污染。 绿荧光蛋白在IBRS-2细胞中的表达 ...