哪些荧光染料可以把细胞质和细胞核分开染色
全部答案（共1个回答）
。对细胞膜染色如下：DiO(细胞膜绿色荧光探针)，呈现绿色荧光，荧光素双醋酸酯（FDA），绿色荧光
1、酸性染料，多适用于蛋白质纤维与尼龙纤维及真丝等。其特征是色泽鲜艳，但水洗牢度较差，干洗牢度优异，在天然死染色中使用比较广泛。
2、阳离子染料（碱性燃...
那不叫食用染料，叫食用色素。到大型副食品店里找找看。化工店里的是不能用于食品的。
核糖核酸（RNA）
　　脱氧核糖核酸（DNA）
　　RNA与DNA最重要的区别一是RNA只有一条链，二是它的碱基组成与DNA的不同，RNA没有碱基T（胸腺嘧啶）...
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（求助）关于细胞免疫荧光染色的问题
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这个帖子发布于12年零273天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
我用培养的小鼠胎肝细胞做白蛋白的免疫荧光实验，发现细胞都没有荧光，各位大侠帮忙分析一下！我的实验步骤是：1. PBS轻轻漂洗，冷丙酮固定2min，风干，PBS洗三次，每次5min2. 以5％小牛血清In PBS 封闭30min，PBS洗三次，每次5min3. 以稀释的sheep anti mouse albumin第一抗体孵育1 hour，PBS洗三次，每次5min4. 以稀释的bovine anti sheep-FITC 的二抗 孵育45min，PBS洗三次，每次5min5. 缓冲甘油封片，观察！我用的封闭液是由四季青的胎牛血清配置的，不知是不是这里的问题？谢谢各位
不知道邀请谁？试试他们
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谢谢野原主任，胎肝细胞是需要打孔的，我用的是0.1％triton in PBS。我明天再用BSA封闭试试看，谢谢！
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今天采取这样几个变化做了一下实验！1. 甲醇－10度固定，未封闭！2. 多聚甲醛室温固定30min，未封闭3. 多聚甲醛室温固定30min，用3％BSA封闭！结果第1、2组均有荧光（不过荧光好像很弱，不知怎么回事？明天贴张图片，大家帮忙看看）；第3组没有荧光发现！这样的话能不能说明胎牛血清或BSA将抗原全部封闭的缘故？另外想问个问题。我用DAPI复染了一下，在425nm的滤光片下是蓝色，但在515nm下好像是与FITC一样的颜色? 不知大家有没有注意这个问题？
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甲醇－10度固定，未封闭
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PFA固定，未封闭
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多聚甲醛室温固定30min，用3％BSA封闭，DAPI复染，515nM 滤光片观察
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多聚甲醛室温固定30min，用3％BSA封闭，DAPI复染，420nM 滤光片观察
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从最后两张图片来看，发荧光的是细胞核，我在显微镜下仔细看过，能不能说明在 BSA 封闭的情况下没有特异性荧光出现？（我买的一抗是单克隆抗体）另外，上面两张图片的荧光好像很弱的，是不是因为打孔的缘故？（我在PBS洗三次的时候，只有最后一次用的是加triton的）谢谢
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谢谢coffejumps，1. 上次做的时候做过封闭过的（新生牛血清），未加一抗的对照，结果是没有荧光。所以这次就没有做这个，那我下次再做一次。2. 胎肝细胞的白蛋白表达量应该还好，我的一抗是单抗呀！他试剂说明上说是与牛血清白蛋白不交叉反应的，不明白为什么还能用这个全部封闭？我也不清楚为什么整个片子都发绿，为什么最后一张是黑色背景？3. DAPI不是发蓝色荧光的吗？在515nm的滤光片下也是黄绿色的吗？
第三张是400倍的照片，第四张是200倍的照片！谢谢
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谢谢还有几个问题没有明白（有点菜，呵呵）1. “用BSA封闭没有荧光结果，至少说明了单抗还是不和BSA交叉反应的，不然会整张片均有非特异性荧光”。为什么是这样的呀，如果单抗不与BSA反应的话，我应该可以拿BSA做封闭剂用的吧？2. 第三张图片应该是细胞核，我在显微镜下面仔细看过，和 DAPI 在420nM的图像完全一样（上传的照片倍数不太一样），如果 DAPI 在515nM 没有荧光的话，那是不是我的荧光结果是非特异性的（不过为什么只在细胞核中出现呢？）3. 盖波片到挺干净的，我都没有凉干就用甘油封片了，观察结果也差不多。
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谢谢1. 这个一抗是做免疫扩散等实验的，ICC等实验试剂说明上没说做过，不过他们说也可以。所以我想在这个实验中， BSA （或胎牛血清）的封闭可能影响到了一抗和抗原的结合，所以造成无荧光的现象？2. DAPI是我顺便看一下它的效果怎么样的。倒没想证明什么！不用DAPI衬染的就是上面那两张，颗粒好像没这么明显呀！
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谢谢主任。那是胎肝细胞白蛋白的表达量不够了？不知胎肝细胞分泌出细胞的白蛋白对此有没有影响？还是我的一抗问题呢？打孔是用0.3％trition 中5min，时间应该够了。
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谢谢两位的热心帮助。我贴上来的前两张图片应该是FITC的荧光吧，是不是这样可以说我的二抗没问题？我想后天做这样几组实验：两种对照：一种用成纤维细胞，肯定不表达白蛋白一种是去除一抗的空白对照看看与胎肝细胞的对比如何？这样的目的性是不是更好一些？
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关于丁香园一枝一叶－会昌中学生物工作室
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细胞死活的鉴定方法
上传: 廖玉生 &&&&更新时间： 17:06:51
&&&&&& 细胞死活的鉴定方法有多种，高中常用的方法有：植物细胞质壁分离法，染色法。由于在直接通过形态观察来鉴别细胞死活过程中，实验结果易受观察者主观因素的影响，因此，实际操作中也常采用一些仪器来进行精确的批量检测。另外还有&EMA-LAMP&方法等。尽管方法原理不同，但本质都是利用了死活细胞在生理机能和性质上的差异。而建立在细胞死活鉴定基础之上的种子生命力的鉴定方法有：直接观察法、染料（如红墨水等）染色法、氯化三苯基四氮唑法（TIC法）、溴麝香草酚蓝法（BrIB法）等。
　　1、细胞死活的鉴定
　　1.1 质壁分离法
　　成熟的植物细胞一般具有中央大液泡，液泡中的细胞液具有一定的溶质势（或称渗透势），而活的原生质层（包括细胞膜，液泡膜及两层膜之间的细胞质）具有半透性。当细胞与外界溶液接触时，若外界溶液的水势低于细胞液的溶质势（外界溶液浓度大于细胞液浓度），则水分外渗，发生质壁分离，质壁分离的细胞与水或水势较高的溶液接触时，可重新吸水而出现质壁分离复原现象。当植物细胞受到严重伤害或已经死亡时，不能发生质壁分离，因此常用质壁分离法来鉴定细胞的死活。
　　1.2 染色法
　　染色法分化学染色法和荧光染色法，根据染色机理的不同，有的染料使死细胞着色，有的使活细胞着色。死活细胞在生理机能和性质上的差异主要包括以下几点：
　　（1）死活细胞细胞膜通透性的差异：活细胞的细胞膜是一种选择透过性膜，对细胞起保护和屏障作用；死细胞的细胞膜受损，通透性增加。常用台盼蓝（锥蓝）染液（质量分数为0.4%）、红墨水（酸性大红G）或伊红Y等染色剂鉴别细胞死活的方法就是利用了这一性质。它们能使死细胞着色，而活细胞不被着色。
　　（2）死活细胞在代谢上的差异：①美蓝（又称亚甲基蓝，品蓝）是一种无毒染料，氧化型为蓝色，还原型为无色。由于活细胞能进行新陈代谢，使细胞内具有较强的还原性，能使美蓝（常用质量浓度为0.1 mg/mL）从蓝色的氧化型变为无色的还原型。因此，经美蓝染色后活的酵母菌细胞无色，死细胞或代谢缓慢的老细胞，被染成蓝色或淡蓝色。
　　②荧光素双醋酸酯（FDA）染色，其染色机理也利用了死活细胞在代谢上的差异。FDA本身不产生荧光，无极性，能自由穿过完整的细胞膜。当FDA进入活细胞后，被细胞内的脂酶分解，生成有极性的、能产生荧光的物质&&荧光素，因该物质不能自由透过细胞膜而积累在细胞膜内，结果导致活细胞产生绿色荧光；死细胞因不能使FDA分解，而无法产生荧光。
　　（3）对细胞器染色：中性红（3-氨基-7-甲氨基-2-甲基吩嗪盐酸盐）是一种弱碱性pH指示剂。在中性或微碱性环境中，植物的活细胞能大量吸收中性红（常用质量浓度为0.03%）并向液泡中分泌，由于细胞液在一般情况下呈酸性，进入液泡的中性红便解离出大量阳离子而呈现樱桃红色，原生质和细胞壁一般不着色。死细胞由于原生质变性凝固，细胞液外渗，因此，死的植物细胞不产生液泡着色现象，并且中性红的阳离子，能与带有一定负电荷的原生质及细胞核结合，而使原生质与细胞核染色。
　　1.3 仪器分析法
　　可采用微电极技术（利用死活细胞膜两侧电位的差异）、全自动分析细胞记数仪和流式细胞仪等，对细胞的死活进行精确的批量检测。
　　1.4 EMA-LAMP方法
　　叠氮溴乙锭（EMA）是一种只能进入死细胞并与DNA分子结合的物质。死细胞暴露于EMA仅仅1 min的时间，EMA便可以渗透细胞壁或细胞膜与其中的DNA结合，使其不能发生扩增反应（图1）。目前，EMA与PCR、Real-time PCR等技术结合，已经被应用于多种病原菌的检测，以提高检测的准确性。
　　2、种子生命力的鉴定
　　2.1 直接观察法
　　植物种子中常含有黄酮类、香豆素类、酚类物质等，能够在紫外光照射下产生荧光。在种子衰老或死亡过程中，荧光的颜色也相应地有所改变。由于生命力衰退或已经死亡细胞的透性增加，当浸泡种子时，容易引起细胞内的荧光物质外渗。因此，可以通过直接观察种胚荧光或观察荧光物质渗出的多少来鉴定种子的生命力。
　　2.2 染料（如红墨水等）染色法（方法同1.2）
　　2.3 氯化三苯基四氮唑法（TTC法）
　　ITC法的其原理是应用Trc的水溶液浸泡种子，使之渗入到种胚的细胞内，有活力的细胞能够进行呼吸代谢，在呼吸代谢途中TTC作为氢受体被脱氢辅酶（NADH2或NADPH2）上的氢还原，可以将无色、质量分数为0.1%的2，3，5-三苯基氯化四唑还原为红色、不溶性的三苯甲腙，而且细胞的生活力越强，代谢活动越旺盛，染色后红色的程度越深。死亡的种子由于没有呼吸作用，因而不会将TTC还原为红色。种胚生活力衰退或部分丧失生活力，染色则会较浅或局部被染色。因此，可以根据种胚染色的部位以及染色的深浅程度来判定种子的生活力的有无与大小。
　　2.4 溴麝香草酚蓝法（BTB法）
　　凡活细胞必有呼吸作用，吸收空气中的O2，放出CO2。CO2溶于水成为H2CO3，H2CO3解离成H+和HCO3-，使得胚周围环境的酸度增加，可用酸碱指示剂溴麝香草酚蓝（BTB）来测定酸度的改变。BTB的变色范围为pH 6.0～7.6，酸性呈黄色，碱性呈蓝色，中间经过绿色（变色点为pH7.1）。颜色变化越明显则表明种子活力越强。死细胞没有呼吸作用，也就没有BTB的颜色变化。
　　3、启示
　　细胞死活鉴定实验是高中生物常考内容，近年来多次对此知识点的考查正在从识记与理解型向应用与实践型转变，因此要求生物教师要善于把相关知识点进行梳理、总结，化理论为实践，让生物课堂能出现成串的知识点，切实提高课堂教学的效果！
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