做Akt的best westernn blot为什么要做P-Akt和总Akt

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-04-17 02:27 标签： p akt抗体
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【求助】做Akt的Western blot为什么要做P－Akt和总Akt？
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这个帖子发布于9年零324天前，其中的信息可能已发生改变或有所发展。
向各位达人求教，做Akt的Western blot为什么要做P－Akt和总Akt？说明什么？
不知道邀请谁？试试他们
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Akt的持续活化是其发挥促细胞生存、抑制细胞凋亡功能的重要前提, 而Ser473和，或Thr308位点的磷酸化是Akt激活的必要条件。所以一般检测的时候是要检测P-Akt和总Akt的，这个基本是要看你做出来的结果来分析，比如说P-Akt不断减弱，但是总Akt有可能变化很小，也有可能不断减弱，这样处理对结果的解释就会不一样，所以两个都要做。
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谢谢baiy的指导，我正要做些这方面的工作～～～
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Akt有三个isoform,不知道你是做哪一个?Aktα (T308, S473), Aktβ(T309, S474), Aktβ(T305, S472).单单T位磷酸化的话活性只有10%,只有T和S都磷酸化的话,其活性才出来.
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对阿，zebrafishtom说的很对，现在我也有些迷糊，看文献知道Akt有三个，但是文献上大家做的Aktα (T308, S473)多一些，而且抗体是S473的多，没有T和S都做吧
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我也要做AKT，刚看到你的帖子，我想请教您几个问题：
1、 在cell signal公司的产品中，总AKT及P-AKT（308或473）都有好几种，除了看它们的用途（是免疫印迹、免疫组化－－）还有什么不同？怎么进行选择。
P-AKT，我要检测有活性的AKT，是用308好还是483比较科学，我看了好多文章，都没有涉及到这个问题。
速给我回贴，不胜感激！！
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同问，我也在做akt，怎么选择磷酸位点呢
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关于丁香园塞来昔布作用于人结肠癌细胞GRP78与P-Akt相互作用的实验研究
目的：研究塞来昔布（celecoxib）作用人结肠癌细胞SW480与DLD-1时GRP78与P-Akt的相互作用。　　方法：以人结肠癌细胞系SW480、DLD-1为研究对象，塞来昔布依不同浓度（0μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,60μmol/L,80μmol/L,100μmol/L）作用一定时间（24h）或以一定浓度的塞来昔布（100μmol/L）作用不同时间（0h,1h,3h,6h,12h,24h,48h）,采用MTT法测定塞来昔布对SW480、DLD-1生长的抑制作用。接着，塞来昔布（100μmol/L）作用一定时间（0h,1h,3h,6h,12h,24h）利用Real-time PCR、Western blot检测SW480、DLD-1细胞PI3K/Akt通路中P-Akt与UPR标志分子GRP78表达量的变...展开
目的：研究塞来昔布（celecoxib）作用人结肠癌细胞SW480与DLD-1时GRP78与P-Akt的相互作用。　　方法：以人结肠癌细胞系SW480、DLD-1为研究对象，塞来昔布依不同浓度（0μmol/L,10μmol/L,20μmol/L,40μmol/L,60μmol/L,80μmol/L,100μmol/L）作用一定时间（24h）或以一定浓度的塞来昔布（100μmol/L）作用不同时间（0h,1h,3h,6h,12h,24h,48h）,采用MTT法测定塞来昔布对SW480、DLD-1生长的抑制作用。接着，塞来昔布（100μmol/L）作用一定时间（0h,1h,3h,6h,12h,24h）利用Real-time PCR、Western blot检测SW480、DLD-1细胞PI3K/Akt通路中P-Akt与UPR标志分子GRP78表达量的变化情况。然后，分别通过PI3K抑制剂LY294002抑制P-Akt；通过RNA干扰技术设计GRP78 siRNA分别转染SW480、DLD-1细胞以抑制GRP78表达。利用Real-timePCR、Western blot检测各细胞P-Akt与UPR相关指标（GRP78、CHOP）、线粒体凋亡通路（Bcl-2、Bax）表达量的变化。细胞凋亡的检测由流式细胞仪完成。　　结果：　　1.MTT法结果显示塞来昔布对结肠癌细胞的生长抑制率随作用时间与作用浓度的增加而显著加强，*P<0.05（差异有统计学意义）;　　2.塞来昔布作用下诱导结肠癌细胞发生 UPR，其标志性分子 GRP78表达升高(*P<0.05)，而P-Akt初期先逐渐升高（6小时达最高），后逐渐降低(*P<0.05)。3.抑制结肠癌细胞P-Akt，GRP78表达量明显增加,差异有统计学意义(*P<0.05)；　　4.抑制初期（6小时）反应性升高的P-Akt，利用流式检测发现细胞凋亡率显著增加（*P<0.05）。　　5.下调 GRP78的表达量，与对照组相比，初期（6小时） P-Akt表达下降(*P<0.05)；后期（24小时） P-Akt表达增加(*P<0.05)。　　6.下调GRP78的表达量，细胞的凋亡比率增加（*P<0.05）；CHOP表达明显增加(*P<0.05)；线粒体凋亡相关蛋白（Bcl-2降低、Bax升高）发生促凋亡的相应改变(*P<0.05)。　　结论：塞来昔布作用于结肠癌细胞可诱发UPR，此过程中GRP78通过对P-Akt与CHOP的调节对结肠癌细胞产生保护作用，同时P-Akt能负反馈的抑制GRP78表达。收起
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