503 Service Temporarily Unavailable
503 Service Temporarily Unavailable
nginx/1.4.1扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
下载作业帮安装包
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
10%十二烷基硫酸钠,如何配制!进行动物实验需要10%十二烷基硫酸钠进行涂抹,现有粉剂十二烷基硫酸钠,如何配制成10%的十二烷基硫酸钠,其溶剂是什么?蒸馏水?双蒸水?PBS?
扫二维码下载作业帮
拍照搜题，秒出答案，一键查看所有搜题记录
用普通的蒸馏水或者去离子水都可以的.称量10g十二烷基硫酸钠,加入90g水中,玻璃棒慢慢搅拌,搅拌速度不当会起很多泡沫.然后慢慢加热,水温在25度以上就会完全溶解.注意最好不要加到热水中溶解,否则会临时结成小凝胶块影响溶解速度.
为您推荐：
其他类似问题
10%十二烷基硫酸钠（SDS）溶液【配制方法】在900ml水中溶解100g电泳级SDS，加热至68℃助溶，加入几滴浓盐酸调节溶液的pH值至7.2，加水定容至1L，分装备用。【注意】SDS的微细晶粒易扩散，因此称量时要戴面罩，称量完毕后要清除残留在称量工作区和天平上的SDS，10%SDS溶液无须灭菌。...
扫描下载二维码君，已阅读到文档的结尾了呢~~
扫扫二维码，随身浏览文档
手机或平板扫扫即可继续访问
SDS-PAGE凝胶配方表.doc
举报该文档为侵权文档。
举报该文档含有违规或不良信息。
反馈该文档无法正常浏览。
举报该文档为重复文档。
推荐理由：
将文档分享至：
分享完整地址
文档地址：
粘贴到BBS或博客
flash地址：
支持嵌入FLASH地址的网站使用
html代码：
&embed src='/DocinViewer-4.swf' width='100%' height='600' type=application/x-shockwave-flash ALLOWFULLSCREEN='true' ALLOWSCRIPTACCESS='always'&&/embed&
450px*300px480px*400px650px*490px
支持嵌入HTML代码的网站使用
您的内容已经提交成功
您所提交的内容需要审核后才能发布，请您等待！
3秒自动关闭窗口实验一哺乳动物基因组DNA的提取；制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究以及基因；7-9性，为后续的实验打下基础；冻存的组织细胞中提取，以前常是采用在EDTA以及；实验目的；了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤；实验原理；在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化；实验仪器和材料；1．DNA提取试剂盒（BBI）：内含TE水，细胞；2．预冷的无水乙醇
实验一哺乳动物基因组DNA的提取
制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究以及基因诊断的重要步骤，通常要求得到的片段长度不小于100～200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整
7-9性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有10bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温
冻存的组织细胞中提取，以前常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的，现在已开发出专门用于提取基因组DNA的试剂盒。通过这一方法获得的DNA不仅酶切后可用于Southern分析，还可用于PCR的模板、文库构建等实验。
了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤。
在EDTA和SDS等去污剂存在下，用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提，可以得到哺乳动物基因组DNA。
实验仪器和材料
1．DNA提取试剂盒（BBI）：内含TE水，细胞裂解液，沉淀液，1.2M的NaCl，蛋白酶K，RNaseA
2．预冷的无水乙醇，70%乙醇，氯仿
3．超声波细胞粉碎仪、高速冷冻离心机、恒温水浴锅
1．取100mg小鼠脾脏组织，加入200μl的TE，用匀浆器充分匀浆。
2．加入400μl的细胞裂解液，充分混匀，再加入6μl的蛋白酶K，55℃孵育10分钟，中间偶尔混匀。
3．加入600μl的氯仿，轻柔混匀，高速离心（10000rpm）2分钟，此时样品应该分为三相，而基因组DNA在最上面一相中。如果未能分成以上各相，那就是样品与氯仿之间未能混合均匀。
4．将500μl上清移入一新的1.5ml离心管中，加入500μl的沉淀液，混合均匀，室温放置2分钟，高速离心2分钟。
5．弃上清，将沉淀重溶于100μl1.2mol/l的NaCl中，轻弹，直至沉淀完全溶解，再加入3μl的RNaseA，37℃孵育10分钟。
6．加入300μl预冷的无水乙醇，混匀，并在-20℃放置10分钟。高速离心5分钟，弃上清，用70%的乙醇洗涤沉淀，离心弃上清，空气中干燥10分钟。
7．将沉淀溶于100μl的TE中，37℃孵育2小时，-20℃保存。
1．所有用品均需要高温高压，以灭活残余的DNA酶。
2．所有试剂均用高压灭菌双蒸水配置。
3．用大口滴管或吸头操作，以尽量减少打断DNA的可能性。
4．用上述方法提取的DNA纯度可以满足一般实验（如Southern杂交、PCR等）目的。如要求更高，可参考有关资料进行DNA纯化。
作业与思考
1．如何防止DNA的降解？
2．蛋白酶K和RNaseA的作用是什么？
3．如果DNA降解成小片段，电泳时会出现什么样的电泳图象？
实验二琼脂糖凝胶电泳检测DNA
通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。
DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极方向移动。在一定的电场强度下，DNA分子的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不一样，可进行分离。DNA分子的迁移速度于相对分子质量的对数值成反比关系。凝胶电泳不仅可分离相对分子质量的DNA，也可以分离相对分子质量相同，但构型不同的DNA分子。
实验仪器和材料
0.8%琼脂糖凝胶（含EB），1×TBE电泳缓冲液，凝胶成像仪，DNA标准带（DL-2000），水平电泳槽，电泳仪，小鼠基因组DNA
一、制备琼脂糖凝胶
按照被分离的DNA的大小，决定凝胶中琼脂糖的百分含量。
1.称取1g琼脂糖，放入锥形瓶中，加入100ml1×TBE缓冲液，置微波炉中加热至完全溶化，取出摇匀，则为1%琼脂糖凝胶液。
2.取出制胶板,洗净晾干,将制胶板放于水平位置,并放好样品梳子。
3.待胶冷至60℃左右时加入EB5ul，摇匀，缓缓将凝胶倒入制胶板内。
4.待胶凝固后，取出梳子。
二、电泳加样
用移液器吸取10ul已加入上样缓冲液的DNA样品加入加样孔。
接通电泳槽和电泳仪的电源，最高电源不超过5V/。
当溴酚蓝染料移动至加样孔3cm处时，停止电泳，将凝胶放在紫外灯下观察。DNA存在处应显示出亮荧光条带。
1.EB为致畸、致癌变物质，注意防护。
2.制胶时注意不要形成气泡。
3.电泳时注意正负极，DNA片段从负极向正极移动。
作业与思考
如果电泳过度会出现什么情况？
实验三PCR基因扩增
学习PCR反应的基本原理和实验技术
PCR反应的基本成分包括：模板DNA(待扩增DNA)、引物、4种脱氧核苷酸(dNTPs)、DNA聚合酶和适宜的缓冲液。类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的高温变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的低温退火(复性)：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的适温延伸：DNA模板--引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性-退火-延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
实验仪器和材料
相关引物合成，PCR反应试剂（包括Mg、10×PCRBuffer、2mMdNTP、Taq酶），外周血DNA，1%琼脂糖凝胶（含EB），1×TBE电泳缓冲液，凝胶成像仪，DNA标准带（DL-2000），水平电泳槽，电泳仪，PCR仪2＋
1、PCR反应体系：DNA：2μl(1μg/μl)
10ХPCRBuffer：2.5μl
2mMdNTP：2μl
引物：2μl
2＋Mg：1.5μl
TaqDNA聚合酶：0.2μl
水：14.8μl
总反应体积为25μl。
2、循环条件：预变性94度3分钟;
94度x30s，
50度x30s，
72度x30s，
32个循环，
总延伸：72度x5min。
3、电泳检测：1%琼脂糖(含EB)在TBE中电泳，电压5―7v/cm，溴酚蓝泳至3cm处停止电泳，紫外观察。
反应体系中各成分加样量需准确，且需混合均匀。
作业与思考
PCR时如果漏加任一成分会出现什么情况？
实验四动物总RNA的提取
学习从动物组织中提取RNA的原理和方法。
RNA是一类极易降解的分子，要得到完整的RNA必须最大限度地抑制提取过程中内源性及外源性核糖核酸酶对RNA的降解。高浓度变性剂TRIzol，可溶解蛋白质，破坏细胞结构，使核蛋白与核酸分离，失活RNA酶，所以RNA从细胞中释放出来时不被降解。细胞裂解后，除了RNA，还有DNA、蛋白质和细胞碎片，通过氯仿、异丙醇等有机溶剂处理得到纯化、均一的总RNA。
实验仪器和材料
低温冷冻离心机、烤箱、制冰机、移液器、冰箱，水平电泳槽、电泳仪、匀浆器、TRIzol、氯仿、异丙醇、75％乙醇（DEPCH2O）配制、DEPCH2O
1.取50－100mg（新鲜或－70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml匀浆器中，加入1mlTRIzol
充分匀浆，室温静置5min。
2.加入0.2ml氯仿，振荡15s，静置2min。
3.4℃离心，12000g×15min，取上清置另一1.5ml离心管中。
4.加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。
5.4℃离心，12000g×10min，弃上清。
6.加入1ml75％乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃离心，7500g×5min，弃上清。
7.晾干，加入适量的DEPCH2O溶解（65℃促溶10～15min）。
8.快速电泳检测RNA完整性。
1.样品量和TRIzol的加入量一定要按照步骤1的比例，不能随意增加样品量或减少TRIzol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。
2.实验过程中必须严格防止RNase的污染。
3.所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6h或更长时间。
4.塑料器皿可用0.1％DEPC水浸泡或用氯仿冲洗。
5.配制的溶液应尽可能的用0.1％DEPC在37℃处理12h以上，然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22um滤膜过滤除菌。作业与思考
如果RNA降解了，在快速电泳时会出现什么样的电泳图像？
包含各类专业文献、应用写作文书、高等教育、幼儿教育、小学教育、中学教育、文学作品欣赏、专业论文、生活休闲娱乐、72哺乳动物基因组DNA的提取_百替生物等内容。　
　杭州百替生物 百替生物联合赛诺菲共同举办医学科研精英汇第九期会议来源:百替生物 时间: 2015 年 7 月 11 日,在杭州万豪酒店的会议厅,迎来一批风雨无... 　《真核生物基因组转录诱导融合基因的研究进展》是根据我们对哺乳动物基因组中转录诱导融合基因 进行大规模生物信息分析和实验验证结果及近几年来国外知名期刊所发表的... 　急诊值班九大注意---百替生物_临床医学_医药卫生_专业资料。急诊值班九大注意---百替生物急诊值班九大注意!值得收藏微评:急诊的时候总会遇到一些突发情况和危重病人,... 　中国各类基金会资助项目英文翻译---百替生物_生物学_自然科学_专业资料。中国各类基金会资助项目英文翻译---百替生物中国各类基金会资助项目英文翻译(中英文对照)微评... 　核酸的分离与纯化_百替生物... 16页 免费 第六章...DNA 释放 16.甲酰胺解聚法 哺乳动物基因组 DNA ...4. 小量一步提取法
直接将酚/氯仿与细菌培养... 　基因工程抗体_百替生物 15页 免费如要投诉违规内容,...提取矮牵牛蓝色花的 mRNA,经逆转录获得互补的 DNA,...? 高考浙江卷)下列关于高等哺乳动物受精与胚胎发育... 　Real-time PCR overview.doc_百替生物_理学_高等教育_教育专区。PCR,经验Real...The more PCR product that is produced, the more DNA binding dye will ... 　文档贡献者 百替生物 贡献于 1/2 相关文档推荐 DNA.doc_百替生物...猪抗病育种候选基因研究... 3页 免费 猪的抗病性及抗病育种 2页 免费 动物抗病... 　生物科技快报_百替生物 53页 免费 生物科技快报178期...这种遗传物质会随着进化在哺乳动物的基因组中不断...将这种经改造后的酶镶嵌到长春花的 DNA 中,这种用...