求教 甘油细胞的冻存与复苏的大肠杆菌怎么复苏

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-02-22 08:37 标签： 甘油冻存
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【求助/交流】多少浓度的甘油能在-70度保存大肠杆菌？
小弟我做了一个重组质粒转到DH5a中，现在想长时间保存这个菌种！据了解是甘油保存，但是具体浓度不清楚，各位请赐教！
还有灭菌的温度是多少？
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【求助】细菌冻存用甘油和二甲基亚砜那个好？
各位战友，最近接触细菌方面的实验，涉及到细菌冻存的问题，我看精编分子生物学实验指南中说细菌冻存可以用甘油和二甲基亚砜（dmso）但后面他又提到DMSO比甘油的唯一优点就是不粘稠，不知道这句话是不是隐含其他方面还是DMSO不及甘油。不知道有没有战友比较过？另外甘油的配方是什么？交流一下谢谢两种都可以。真核细胞冻存常用DMSO原核细胞就常用甘油。一般细菌保存都有保存为甘油菌。一般配成，50或者40%的浓度的甘油溶液。然后再加等量的体积的菌液，保存在ep管，放置-20度或者-70度冰箱中。呵呵,我经常将DMSO和甘油混起来用,混合体积比为1:2.灭菌后,防冻液与菌液体积1:3混合,摇匀-70度冰箱保存.我们这里采用了小牛血清+20％的甘油冻存了多种细菌于液氮中，包括淋球菌、沙门菌、志贺菌和真菌，经多次复苏培养验证，效果非常好。另外，用鸡蛋黄保存细菌效果也不错。两种都可以。细菌保存常保存用　甘油水溶液，一般配成，２０％－８0%的浓度的甘油水溶液。然后　　菌液：２０％甘油水　　为　　１：２／１：１　，保存在ep管，放置-20度或者-８0度冰箱中。 　细菌可用　生理盐水／ＰＢＳ／小牛血清／细菌液体培养基　冲洗为菌液　２０％－８0%的浓度的甘油水溶液，经我观察７０％的效果最好！　保存在ep管，保存效果还好，最好放在全玻璃的安瓿管里，喷灯将口封闭，－８０度冻存，可放一两年！
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几种菌种的保存及复苏方法
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你可能喜欢大肠杆菌的保存问题
在-20度用30%甘油至少能保存多长时间？我的菌株保存了2个月就不行了。　　　　如果用50%甘油生理盐水可保存更长时间。如果有条件的话，菌种最好保存在－70，30－50％甘油可以保存半年左右。另外，如果是表达基因重组蛋白那就多提点质粒吧，质粒很容易保存，菌种不行了及时转化，反正也不麻烦。不错，半年左右，不过反复冻融很容易死亡。本人的菌种负７０度保存了N年一点问题都没有。负２０度冰柜也问题不大。最怕的是那种有冷冻冷藏的冰箱，两三个月肯定基本完完。不会吧。我们实验室的都保存了一两年都壮壮的，进甘油管前的菌浓度要浓缩一点。我实验室的保存3年也没有问题，不过3年后继死了。你的冰箱是不是会化霜的？我认为主要是你的冰箱温度不够低，一般用30~50%的甘油在-30℃以下的冰箱可以保存几年。-20℃的冰箱肯定保存不了多久.不要反复冻融！稳定的低温对甘油保存是很重要的。其实，如果果真要长期保存菌种，最好就是冻干保存。如果短期保存，做穿刺管几个月是没有问题的，4度保存就可以，制作和保存都很方便。终浓度15%左右的甘油管-20保存三四个月问题不大，半年就不太好了甘油的浓度在20-50%这个范围就可以，但关键是温度最好是在-70℃以下，其保存时间至少在1年以上。要长期保存的话，冻干保存是最理想的了。我们用的甘油的浓度在20%，保存在－80℃的冰箱里，可以长期保存。注意在保存时菌液和甘油要混溶。用灭菌的滤纸片涂上大肠杆菌，放进灭菌的一次性塑料尖咀离心管（1.5ml）内，置普通冰箱的冷冻室冷冻保存，此种保存方法可将菌种保存至少一年半以上，不妨试一试。最好的办法就是把它进行冻干,可以保存数年不减毒力,我的大肠杆菌冻干保存了七年还好着呢.最好的办法就是把它进行冻干,可以保存数年不减毒力,我的大肠杆菌冻干保存了七年还好着呢.我用20%甘油肉汤，在-80 保存多年，且反复动融，至今长的很好20%-50%的浓度是不是高了点啊？实验室的某些质粒感觉用25%的甘油保存，放几个月就OVER了啊？用甘油保存于－70度，取出接种时，不要等它完全冻融，部分冻融后立即接种，剩下部分立即再置回冰箱中，这可避免反复冻融带来的对细菌的破坏。这是新基因网站的一篇有关菌种保存的文章，自己看吧。
细菌.pdf (107.84k)你培养的浓度太低，这可能影响了你的保存，你可以提高浓度！！据说同济医科大学的冯作化教授的质粒转化菌可在－70度保存五年到10年。
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