扩PCR时加pcr mgcl22，量的多少影响会怎样

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2017-01-23 15:58 标签： pcr mgcl2
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&&&&&&&&&&&&MgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL使用说明书
MgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL使用说明书
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原产地：进口、国产
品牌：上海抚生
产品数量：29
产品关键字：PCR成分及添加剂
经营性质：私营企业
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地址：上海市闵行区碧泉路36弄银宵大厦
MgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL使用说明书
仅用于科研
MgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL使用说明书使用方法：1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自备，10uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 补水到 30 uL2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的 PCR 条件： PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次（见注） 72℃ 1 分钟注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。详细介绍：MgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL使用说明书使用方法：1. 以 30 uL 的标准 PCR 反应体系为例，如果反应体系不是 30 uL，各成分需要等按比例增加或减少。在一干净的 PCR 管中，加入下列成分：易错 PCR Mix, 10× 3 uL 易错 PCR 专用 dNTP, 10× 3uL MnCl2, 5 mM 3 uL 自备 DNA 模板（10ng/uL） 1 uL PCR 引物(自备，10uM each) 10 pmol each Taq DNA 聚合酶（5U/uL） 1 -5 U 补水到 30 uL2. 按已经优化的 PCR 条件进行一定循环数的 PCR（循环数与突变率的关系见下表），然后取 5 uL 电泳检查。如果没有优化的 PCR 条件，一般可以先尝试下面的 PCR 条件： PCR 前变性 94℃ 3 分钟易错 PCR 94℃ 1 分钟 45℃ 1 分钟 循环 30 次（见注） 72℃ 1 分钟注：易错 PCR 一般不需要热启动，也不需要在 PCR 结束后做延伸处理。3. 电泳检测是否得到预计长度的 PCR 产物。MgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL使用说明书变性温度与时间：模板变性温度是决定 PCR 反应中双链 DNA 解链的温度，达不到变性温度就不会产生单链 DNA 模板，PCR 也就不会启动。变性温度低则变性不完全， DNA 双链会很快复性，因而减少产量。变性温度太高，又会影响酶的活性。一般情况 下可设为 94℃ 20~30 秒，高温时间应尽量缩短，以保持耐热 DNA 聚合酶的活力， 最高变性温度不宜超过 95℃。 退火温度与时间：退火温度决定 PCR 特异性与产量。温度高特异性强，但过高则引物 不能与模板牢固结合.DNA 扩增效率下降；温度低产量高，但过低可造成引物与模板 错配，非特异性产物增加。合适的退火温度一般在 45~68℃之间。设置特定反应的最适退火温度，可根据引物的（G+C）%含量进行推测，一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度 Tm 低 5℃，退火时间一般为 30~60 秒，足以使引物与模板之间完全结 合，长时间退火没有必要。产品名称延伸温度与时间：PCR 反应的延伸温度一般选择在 70~75℃之间，延伸时间根据所用 聚合酶扩增速度和扩增片段大小设定，如同样扩增 2 Kb 片段，若使用 Taq 酶只需 1 分钟，使用 Pfu 酶则应设定 2 分钟以上。延伸时间过长会导致非特异性扩增带的出现，时间太短则可能得不到扩增产物或得到一些短的非特异性片段。循环次数：可根据模板 DNA 的量、扩增片段的大小和扩增产物的下步应用等因素，设 定 20-40 个循环。循环次数太少，扩增量不足，如果循环次数太多，错配几率会增加， 非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。酶量：50 μL 反应体系可用 0.5-5 U 酶，酶量的选择与模板 DNA 的量，扩增片段大 小等有关，酶量过多易发生非特异性反应，而且可能增加突变的机率，尤其在进行高 保真扩增时，应尽量减少酶量，但酶量过少时反应性能下降。CD11c&&&& 整合素αX抗体CCR5/CD195&&&& 细胞表面趋化因子受体5抗体CD2&&&&CD2抗体C Peptide&&&&C-肽抗体Calretinin&&&& 钙结合蛋白抗体CRP&&&& C-反应蛋白抗体CRP&&&& C-反应蛋白单克隆抗体CREB-1&&&& 环腺苷酸应答元件结合蛋白抗体CRF&&&& 促肾上腺皮质激素释放因子抗体CRF&&&& 促肾上腺皮质激素释放因子抗体C5orf54&&&&5号染色体开放阅读框54抗体CD93&&&& CD93抗体CCL6&&&& 嗜酸粒细胞趋化蛋白CCL6抗体pSUPERIOR.puro (pSUPERIORpuro )（）pT7Blue-3(pT7Blue3)pT7T3D-PacⅠ(pT7T3DPacⅠ)pT7TS（）pT81lucpTA-Luc(pTALuc)（）ptac11ptac12ptac12HMgCl2溶液，25mM，PCR 级5mL使用说明书 pTacNeo1.2pTacNeo1.3pTacNeo2.1pSIREN-RetroQ-DsRed-Express(PSIRENRetroQDsRedExpress)()y&
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