现代食品科技ＭｏｄｅｒｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａ；２０１０，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．９；产蛋白酶毛霉的分离筛选及发酵豆粕产大豆肽的初；步研究；庞宗文，李敏，李树波，梁静娟；（广西大学生命科学与技术学院，广西南宁５３０００；摘要：采用脱脂乳平板透明圈法和麸皮培养基发酵测定；发酵培养９６ｈ时总蛋白酶活力最高；游离氨基含量随；关键词：毛霉；豆粕发酵；大豆肽文章篇号：１
现代食品科技ＭｏｄｅｒｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
２０１０，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．９
产蛋白酶毛霉的分离筛选及发酵豆粕产大豆肽的初
庞宗文，李敏，李树波，梁静娟
（广西大学生命科学与技术学院，广西南宁５３０００５）
摘要：采用脱脂乳平板透明圈法和麸皮培养基发酵测定法筛选到―株产蛋白酶活力较强的毛霉菌株ＨＮ２０１。以蛋白酶活力．游离氨基含量，活性肽活性为指标，对筛选得到的ＨＮ２０１菌株固态发酵豆粕产蛋白酶及大豆肽的最优条件进行研究。研究表明，２８℃
发酵培养９６ｈ时总蛋白酶活力最高；游离氨基含量随着培养时间的增加而增加，培养１２０ｈ时达到７７ｍｍｏｌ／Ｌ，是发酵前的１７倍；培养９６ｈ时产生的大豆肽具有最高还原能力，是相同浓度Ｖｃ还原能力的８５％左右，是发酵前的１．８倍；培养４８ｈ时产生的大豆肽清除ＤＰＰＨ的能力最高，约是相同浓度Ｖｃ清除能力的６０％，是发酵前的３．５倍；清除超氧阴离子自由基的能力随培养时间和温度的变化很小，发酵后无明显提高。ＳＤＳ．ＰＡＧＥ电泳分析可知，豆粕发酵所产大豆肽分子量主要集中在１０ｋＤ以下．
关键词：毛霉；豆粕发酵；大豆肽文章篇号：１６７３―９０７８（２０１０）９．９５６－９６１
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆ
Ｐｒｏｔｅａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ
ＭｕｃｏｒＳｔｒａｉｎｆｏｒ
ＳｏｙｂｅａｎＰｅｐｔｉｄｅｓ
ＰｒｏｄｕｃｔｉｏｎｗｉｔｈＦｅｒｍｅｎｔｅｄＳｏｙｂｅａｎ
ＰＡＮＧＺｏｎｇ－ｗｅｎ，ＬＩｎｌｉＩＩ，ＬＩ
５３０００５，Ｃｈｉｎａ）
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Ｓｈｕ－ｂｏ，ＵＡＮＧ抽ｇ＿ｊｎａｎ
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ＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙｏｆＧｕａｎｇｘｉＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｎｉｎｇ
Ｍｕｃｏｒ，ＨＮ２０１，ｗａｓｓｃｒｅｅｎｅｄ
ｕｓｉｎｇｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｃｌｅａｒｚｏｎｅｒｃｓｌｌｌｄｎｇｆｒｏｍ
ｆｃｒｍｅｍａｆｉｏｎｉｎｗｈｅａｔｂｒａｎｍｅｄｉｕｍ，ｗｈｉｃｈｐｒｏｄｕｃｅｄｈｉｇｈａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｒｏｔｅａｓｅ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｓｏｌｉｄ－ｓｔａｔｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｏｆｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ
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ａｃｔｉｖｉｔｙｗａｓａｃｈｉｅｖｅｄｗｈｅｎｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅａｎｄｔｉｍｅｗｅ化２８℃ａｎｄ９６ｌＬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄ
ｏｆｔｈｅ
ｆｅｒｍｅｎｔｅｄｍｉｘｔｕｒｅｉｎｃｒｅａｓｅｄｔｏ７７ｍｍｏｉ／Ｌｂｙｐｒｏｌｏｎｇｉｎｇｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｉｍｅｕｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｓｏｙｂｅａｌ＿ＬＴｈｅ
ｈ，ｗｈｉｃｈｗａｓ１７ｔｉｍｅｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅ
ｈｉｇｌｌ脚ｒｅｄｕｃｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙａｎｄ２－ｄｉｐｈｅｎｙｌ－１－ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌｒａｄｉｃａｌ（ＤＰＰＨ．）－ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆｓｏｙｂｅａｎ
ｔｉｍｅｓｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈｏｓｅｏｆｔｈｅｕｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄ
ｓｏｙｂｅａｎ
ｓａｌｎｃ
ｐｅｐｔｉｄｅｓｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄａｔ９６ｈａｎｄ４８ｌＬｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ，ｗｈｉｃｈｗｅｒｅ３．５ａｎｄ１．８
ｍｅａｌ．ＣｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｉｔｓｒｅｄｕｃｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙａｎｄＤＰＰＨ?一ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇｃａｐａｂｉｌｉｔｙｗｅｒｅ８５％ａｎｄ６０％ｏｆＶｃｗｉｔｈ
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ．Ａｎｄ
ｌｉｔｔｌｅｃｈａｎｇｅｓｉｎｉｔｓ
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ｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｏｌｅｃｕｌａｒｗｃｉｇｈｔｏｆｓｏｙｂｅａｎ
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ａｈｔｃｏｒｓｔｒａｉｎｓ；ｓｏｙｂｅａｎ
ｆｅｍａｅｎｔａｔｉｏｎ；∞蜘ｐｅｐａｄｅｓ
ｐｅｐｔｉｄｅＷｇＴｅｌｏｗｅｒｔｈａｎ１０ｋＤ．
蛋白酶广泛存在于微生物中。微生物产生的蛋白酶一般均为胞外酶…，与动植物来源的蛋白酶相比，其下游技术处理相对简单，成本较低。也由于微生物易于培养，生长周期短，因此微生物来源的蛋白酶易于大规模工业化生产。在我国，毛霉长期应用于豆腐乳等发酵豆制品中，合成及分泌多种胞外蛋白酶的能力强，而且毛霉的胞外蛋白酶系对于大豆蛋白具有很
收稿Ｅｔ期：２０１０－０５－０５
作者简介：庞宗文（１９６４－）．舅，副教授。研究方向：微生物酶学、生物化工
高的水解效率【２】。与黑曲霉和米曲霉蛋白酶相比，毛霉蛋白酶水解蛋白的产物没有苦味，适口性好，因此在大豆蛋白肽的生产中有很大的潜力。
豆粕是大豆榨油后的副产物，其蛋白质含量高达４０％以上，一般作为饲料来处理。对豆粕的微生物发酵处理，主要是提高豆粕蛋白的溶解度，有效地降解其中的抗营养因子和大分子蛋白质，使豆粕更容易消化吸收。而且发酵豆粕具有一定的芳香气味和鲜味，适口性好。
大豆肽具有抗氧化、抗疲劳、降血压和降血脂等
现代食品科技ＭｏｄｅｒｎＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
２０１０，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．９
多种生理功能，是一种非常有前途的功能性食品原料和肽类药物原料【３１。目前大豆肽大多采用条件温和、
安全性高的酶水解法进行生产。但酶法生产大豆肽存在着酶价格昂贵，产物得率不高的缺陷，而且由于大豆蛋白经酶水解后其疏水性氨基酸残基会暴露出来，得到的大豆肽往往带有较明显的苦味【４￣５】，限制了其在食品中的应用。而利用微生物发酵法生产大豆肽，不仅解决了苦味问题，而且大大降低了生产成本。
用微生物生产工业用大豆蛋白酶和用豆粕进行固态发酵生产大豆肽鲜见报道，本研究将筛选得到的产蛋白酶活力较强的毛霉菌株应用于豆粕的固态发酵中，对豆粕发酵水提物中的酶活力、游离氨基含量、大豆肽活性的最优条件进行了初步研究，以期为毛霉蛋白酶在固态发酵生产大豆多肽生产中的应用提供理论依据。１材料与方法１．１材料１．１．１样品采集
土样采自广西南宁、钦州、防城港、桂林及海南等地，共５５份。选择植被厚、枯枝落叶多、有机质丰富且阴暗潮湿的土壤采集。１．１．２培养基
（１）ＰＤＡ培养基（％）：土豆２０，葡萄糖２，琼脂１．２，ｐＨ６．０。
（２）查氏培养基（％）：蛋白胨０．５，葡萄糖ｌ，
ＫＨ２Ｐ０４０．１，ＭｇＳ０４
０．０５，琼脂２，ｐＨ
（３）脱脂乳平板培养基（％）：脱脂乳１．５，琼脂２，ｐＨ
（４）麸皮培养基：麸皮９９，豆粕ｌｇ，硫酸铵０．０５ｇ，水１０ｍＬ，ｐＨ６．０。
（５）豆粕培养基：豆粕９９，麸皮１ｇ，水１０ｍＬ，
ｐＨ６．０。
１．２方法
１．２．１产蛋白酶毛霉菌株的分离筛选
（１）分离
取土样５ｇ，加无菌水５０ｍＬ，于搅拌器上搅拌打散１０ｍｉｎ。取ｌｍＬ上清悬浮液于ＥＰ管中，即为１０―１稀释度的样液，依次按十倍级差稀释，即得一系列稀释度的样液。取０．１ｍＬ不同的稀释度样液，涂布ＰＤＡ分离平板，同一稀释度可同时涂多个平板。然后倒置于２８℃培养箱中培养，每隔２４ｈ观察一次。根据毛霉的菌落、孢子颜色及菌落形态分离毛霉，进一步于光学显微镜下观察确定。
（２）初筛
小心取分离得到的毛霉菌株的极少孢子，点种于脱脂乳平板中央。置于２８℃培养箱中培养２ｄ，观察菌落周围是否产生透明圈，并测量透明圈与菌落的直径，挑选透明圈与菌落的直径比大，即产蛋白酶能力较强的毛霉菌株进行复筛。
（３）复筛
将初筛得到的产蛋白酶能力较强的毛霉菌株进行平板活化，接入麸皮培养基中，拍打均匀，于２８℃恒温培养箱中培养７２ｈ，于４８ｈ时翻曲一次。制备粗酶液，测定粗酶液的蛋白酶活力，选择蛋白酶活力较高的毛霉菌株进行下一步研究。１．２．２毛霉蛋白酶粗酶液的制备
将发酵好的麸曲捣碎，取适量，加入十倍体积的
０．３ｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣｌ溶液，４０℃水浴提取１ｈ，过滤离心即
得粗酶液。
１．２．３发酵豆粕水提物的制备
将蛋白酶活力较高的毛霉菌株接入豆粕培养基中，拍打均匀，于适当恒温培养箱中培养一定时间后于豆粕发酵曲中加入１０倍体积的蒸馏水，４０℃水浴浸提１ｈ，过滤离心即得发酵豆粕水提物。１．２．４蛋白酶活力的测定
采用紫外光谱法【６Ｊ稍加改进，于试管中加入ｌｍＬ酶液，于４０℃水浴预热２ｍｉｎ，再加４０℃预热的２％酪蛋白溶液１ｍＬ，精确反应１０ｍｉｎ后，立即加入２ｍＬ
ｍｏｌ／Ｌ的三氯乙酸（ＴＣＡ）以中止反应，１０ｍｉｎ后
沉淀完全，离心。取１ｍＬ上清液，加入对应ｐＨ值的Ｎａ２ＨＰ０４一柠檬酸缓冲液５ｍＬ（同一样品分别测定其在ｐＨ６．０、７．０、８．０下的蛋白酶活力）。混匀后于２７５ｎＩｉｌ
下测吸光值。同时以先加２ｍＬＴＣＡ灭酶１０ｍｉｎ后再
加１ｍＬ２％酪蛋白的沉淀离心为空白对照。
蛋白酶活力单位定义：ｌｍＬ液体酶在一定温度和ｐＨ条件下，ｌｍｉｎ水解酪蛋白产生ｌ嵋酪氨酸为１个酶活力单位，以Ｕ／ｍＬ表示。
酶活力（Ｉ『／ｍＩ，）＝（ＡｘＫｘＶｘｎ）／（ｔｘｍ）
式中Ａ为样品的吸光值；Ｋ为吸光常数，标准曲线中ＯＤ值为１时相当的酪氨酸微克数；Ｖ为反应试剂的总体积（ｍＬ）；ｎ为酶液的稀释倍数；ｔ为反应时间（ｒａｉｎ）；ｍ为酶液体积（ｍＬ）．
１．２．５游离氨基含量测定
采用甲醛滴定法ｐｊ稍加改进，取５ｍＬ样品，加入
ｍＬ蒸馏水，用０．０５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ调节ｐＨ为８．２０，
加入１０ｍＬ已中和的甲醛溶液，混匀，用０．０５ｍｏｌ／ＬＮａＯＨ标准溶液滴定至ｐＨ９．２０。记录消耗ＮａＯＨ的体积Ｖ。用蒸馏水代替样品，操作方法相同，测得空白
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２０１０，Ｖ０１．２６。Ｎｏ．９
体积Ｖ０。
游离氨基的量（ｍｍｏｌ／Ｌ）＝１０００ｘＮｘ（Ｖ二Ｖｏ）／５．０
式中Ｖ为样品消耗的ＮａＯＨ溶液体积，ｖｏ为空白体积，Ｎ为滴定所用的ＮａＯＨ标准溶液浓度。
水解度ＤＨ（％Ｈ样品中游离氨基的量／Ｃ．０．３３）／７．８ｘ１００
式中Ｃ为样品中蛋白浓度（ｇ／Ｌ）；０．３３为大豆蛋白中游离氨基＂，ｇ度（ｍｍｏｌ／ｇ）；７．８为每克大豆蛋白的肽键当量＆（ｍｍｏＶｇ）．
１．２．６大豆肽活性的测定
（１）还原能力的测定
采用文献【８】的方法稍加改进，在１ｍＬ样品（空白
用蒸馏水代替）中加入２．５ｍＬ１％的铁氰化钾溶液和
２．５ｍＬ的０．２ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液（ｐＨ６．６），混匀后
在５０℃保温２０ｍｉｎ，然后加入２．５ｍＬ１０％的ＴＣＡ，混和后１００００ｒ／ｒａｉｎ离心５ｍｉｎ，取上清液２．５ｍＬ，加入２．５ｍＬ蒸馏水和０．５ｍＬ０．１％的ＦｅＣｌ３，混匀后在
ｎｌＴｌ下测定吸光度值。以Ｖｃ作为对照。（２）清除ＤＰＰＨ?自由基能力的测定
采用文献一Ｊ方法稍加改进，将２ｍＬ无水乙醇与２
ｌｍａｒｎｏｉ／Ｌ的ＤＰＰＨ（２，２一ｄｉｐｈｅｎｙｌ一１．
ｐｉｃｒｙｌｈｙｄｒａｚｙｌ）溶液加入同一试管中，摇匀，避光反应３０ｒａｉｎ，用无水乙醇作参比于５１７ｎｎｌ下测定吸光
度值～；测定样品清除能力时，将２ｍＬ样液与２ｍＬ
ｇｍｏｌ／Ｌ的ＤＰＰＨ溶液混匀于同―试管中，静置３０
ｍｉｎ，以同浓度样液为参比测定５１７ｎｎｌ处吸光度值Ａ。
自由基清除率计算：清除率（％）＝【（～－Ａ）／‰］ｘ１００
（３）清除超氧阴离子自由基能力的测定采用邻苯三酚自氧化法，根据文献【１０】的方法，在
４．５ｍＬ０．０５
ｍｏｌ／Ｌ的Ｔｒｉｓ―ＨＣＩ缓冲液（ｐＨ８．２，内含２
ｍｍｏｌ／ＬＥＤＴＡ）中，加入４．２ｍＬ蒸馏水后于２５℃保温２０ｒａｉｎ，然后加入２５℃预热的４５ｍｍｏｌ／Ｌ邻苯三酚０．３ｍＬ（空白管用１０ｍｍｏｌ／ＬＨＥｌ代替）。迅速摇匀，立即在４２０ｎｌｌｌ下测吸光度值，每３０ｓ记录一次，测４
次，计算△‰值。
样液加入４．５ｍＬ
ｍｏｌ／Ｌ的Ｔｒｉｓ．ＨＣＩ缓冲液
中，减少相应蒸馏水的加入量，其余同上。测定４２０ａｍ下吸光度值，每３０ｓ记录一次，测４次，计算△Ａ值。自由基清除率计算：
清除率（％）＝［（ＡＡｏ－ＡＡ）／ＡＡ０１］ｘ１００
式ＣＡＡｏ为邻苯三酚的自氧化速率，△Ａ为加入样液后邻苯三酚的自氧化速率。
１．２．７聚丙烯酰胺凝胶电泳和活性染色方法
将毛霉产生的蛋白酶酶液进行非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳，分离胶浓度为７．５％。电泳结束后将胶条一分为二，一半用考马斯亮蓝染色，另一半平贴于脱脂
乳平板上进行活性显色。具有蛋白酶活性的蛋白质条带会作用于脱脂乳平板中的酪蛋白形成透明带。２结果与讨论
２．Ｉ毛霉蛋白酶产生菌株的分离筛选
从５５份土样中共分离得到６８个毛霉菌株。毛霉菌落质地疏松，呈棉絮状或绒毛状，茵丝体细密，呈雪白色。菌落低部不产色素，呈花瓣状扩展。光学显微镜下观察发现，其菌丝无横隔，无假根，孢子囊呈球形，呈单轴分支，孢子圆形。
将６８个毛霉菌株分别点于脱脂乳平板上，培养２ｄ后可以观察到有一部分菌株周围产生肉眼可见的水解圈：水解圈直径和菌落直径的比值（Ｄ／ｄ）大于２．０的菌株共有１ｌ株，结果见表ｌ。
表１产蛋白酶菌株的初筛
Ｔａｂｌｅ１Ｐｒｉｍａｒｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｔｒａｉｎｓ
将１ｌ株Ｄ／ｄ大于２．０的菌株分别接种到麸皮培养基中，发酵培养后提取粗酶液，离心取上清测定蛋白酶活力，结果见表２。从表２可知，ＨＮ２０１号菌株发酵后产生的酸性蛋白酶、中性蛋白酶及碱性蛋白酶活力均为最高，因此选择该菌作进一步研究。
表２产蛋白酶菌株的复筛
Ｔａｂｌｅ２Ｓｅｃｏｎｄａｒｙｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｔｈｅｐｒｏｔｅａｓｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｓｔｒａｉｎｓ
菌株ＨＮ２０１发酵后产生的蛋白酶经聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＰＡＧＥ）和在脱脂乳平板上活性显色检测，结果见图ｌ。由图ｌ可知，经ＰＡＧＥ出现三条主要蛋白带，经活性显色１ｈ出现一条水解带，对应考马斯
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２０１０，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．９
亮蓝染色电泳迁移最慢的一条主带。从这些结果可知，ＨＮ２０１主要产生一种蛋白酶。
图１ＨＮ２０１菌株发酵粗酶液非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳图及蛋
白酶活性显色图
Ｆｉｇ．１Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅｇｅｌｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓｏｆｔｈｅｆｅｒｍｅｎｔｅｄｓｏｙｂｅａｎ
ｍｅａｌｂｙＨＮ２０１ａｎｄｉｔｓｐｒｏｔｅａｓｅａｃｔｉｖｉｔｙａｎａｌｙｓｂｗｉｔｈ
ｄｅｆａｔｔｅｄ
ｍｉｌｋｐｌａｔｅ
２．２毛霉发酵豆粕产大豆肽的初步研究
２．２．１不同发酵时间对发酵豆粕产大豆肽的影响
２．２．１．１
不同发酵时间对豆粕发酵的蛋白酶活力的影
测定了豆粕发酵中不同发酵时间对豆粕发酵蛋白酶活力的影响，结果见图２。由图２可知，碱性蛋白酶活力在发酵７２ｈ后达到最大值，为８１．４１Ｉ『／ｍＩ，，酸性及中性蛋白酶活力在发酵的９６ｈ达到最大值，分别为
７９．４０
Ｕ／ｎｄ。和８６．７７Ｕ／ｎｄ．。总体来看，发酵培养到９６
的蛋白酶活力最高。
发酵时Ｉ刎／ｈ
图２不同发酵时间对豆粕发酵的蛋白酶活力的影响
Ｆｉｇ．２Ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｉｍｅ
ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｐｒｏｔｅａｓｅ
ｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ
ｆｅｒｍｅｎｔａｆｌｏｎ
２．２．１．２不同发酵时间对豆粕发酵水提物中游离氨基含量的影响
测定了豆粕发酵中不同发酵时间的豆粕发酵水提物的游离氨基含量，结果见图３。由图３可知，发酵水提物中游离氨基含量随着培养时间的增加而增加。水解度与游离氨基含量的变化趋势一致，也随培养时间的增加而增加，在发酵１２０ｈ时，游离氨基含量为７７ｍｍｏｌ／Ｌ，水解度为４７．４％。
捌托瑚麟龌蟾
现代食品科技
Ｍｏｄｅｒｎ
ＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
２０１０，Ｖ０１．２６，Ｎｏ．９
豆粕发酵中不同发酵时间发酵豆粕水提物中的大豆肽清除ＤＰＰＨ?的能力，结果如图５。由图５可知，豆粕发酵
ｈ产生的大豆肽具有最高清除ＤＰＰＨ?的能力，约为Ｖｃ的６０％。
（３）对清除超氧阴离子自由基能力的影响测定了豆粕发酵中不同发酵时间发酵大豆水提物
中的大豆肽清除超氧阴离子自由基的能力，分别以Ａ０、Ａ、Ａ１、Ａ２、Ａ３、Ａ４和Ａ５表示邻苯三酚自氧化速率、加入未发酵豆粕浸提液、培养３６ｈ、４８
ｈ、７２ｈ、９６ｈ、
ｈ发酵豆粕水提物后邻苯三酚自氧化速率，结果见表３。由表３可知，培养４８ｈ和１２０ｈ时发酵豆粕产生的大豆肽具有弱的清除超氧阴离子的能力，且发酵１２０ｈ
的能力大于发酵４８ｈ。总体上看，大豆肽对超氧阴离子
清除能力不高。
表３不同发酵时间对豆粕发酵所得大豆肽清除０１?能力的影响
Ｔａｂｌｅ３Ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｉｍｅ
ｔｈｅｏ＇Ｚ－－ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ａｃｔｉｖｉｔｙｏｆｔｈｅｓｏｙｂｅａｎｐｅｐｆｌｄｅ
２．２．２彳ｉ『一Ｊ发酵温度对驻粕发酵的影响
２．２．２．１
不同发酵温度对豆粕发酵的蛋白酶活力的影
测定了豆粕发酵中不同发酵温度对豆粕发酵蛋白酶活力的影响，结果见图６。由图６可知，发酵９６ｈ，碱
性蛋白酶的活力在３０℃下达到最大值；酸陛及中性蛋
白酶活力在２８℃下达到最人值。总体上看，在２８℃下豆粕发酵的蛋白酶活力可达最大值。
Ｒ！｝ｇ超口嘲
发酵温度／℃
图６不同发酵温度对豆粕发酵的蛋白酶活力的影响
Ｆｉｇ．６Ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｆｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｏｆ
ｐｒｏｔｅａｓｅｉｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ
２．２．２．２不同发酵温度对豆粕发酵水提物中游离氨基含量的影响
测定了不同发酵温度对豆粕发酵水提物中游离氨基含量的影响，结果见图７。由图７可知，在２８℃下豆粕发酵水提物中的氨基含量达最高值７５．６ｍｍｏｌ／Ｌ，此时水解度也达最高值４２．４％。
发孵温Ｊ壁，℃
图７不同发酵温度对豆粕发酵水提物中游离氨基含量的影响Ｆ嘻７
Ｅｆｆｅｃｔｏｆ
ｆｅｒｍｅｎｔａｆｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｏｎｔｈｅｆｒｅｅａｍｉｎｏａｃｉｄ
ｃｏｎｔｅｎｔｓ
ｉｎｆｅｒｍｅｎｔｅｄｓｏｙｂｅａｎｍｅａｌ
２．２．２．３不同发酵温度对豆粕发酵所得大豆肽肽活性的影响
（１）对大豆肽还原力的影响
以Ｖｃ的还原力为１００％作为对照，测定了不同发酵温度发酵豆粕水提物中的大豆肽还原力，吸光度值越大说明样品的还原能力越强，结果如图８。由图８可知，不同发酵温度发酵豆粕产生的大豆肽均具有还原力，且在２８℃下产生的大豆肽具有最高的还原性，约是Ｖｃ的８５％。
■●■■●Ｉ一／ｋ发酵
●Ｉ一■■●■２４一●■Ｉ２６一●■Ｉ２８一●●■■３０一●Ｉ
发酵温度／℃
图８不同发酵温度对豆粕发酵所得大豆肽还原能力的影响
Ｆｉｇ．８Ｅｆｆｅｃｔ
ｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｔｈｅｒｅｄｕｃｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙ
ｏｆｔｈｅ
ｓｏｙｂｅａｎｐｅｐｔｉｄｅ
（２）对清除ＤＰＰＨ?能力的影响
蚰∞更＼静篮蜒
未发酵２４
２６２８３０３２
发酵温度／℃
图９不同温度对豆粕发酵所得大豆肽清除ＤＰ刚?能力的影响
№９Ｅｆｆｅｃｔｏｆｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ
ｏｎｔｈｅ
ＤＰＰＨ－ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ
ｃａｐａｂｉｌｉｔｙｏｆｔｈｅｓｏｙｂｅａｎｐｅｐｔｉｄｅ
以Ｖｃ清除ＤＰＰＨ?的能力为１００％作为对照，测定了
包含各类专业文献、外语学习资料、中学教育、行业资料、各类资格考试、31产蛋白酶毛霉的分离筛选及发酵豆粕产大豆肽的初步研究_图文等内容。　
　1.以豆粕为原料制备大豆肽 1.1微生物发酵法 微生物发酵法是通过微生物生命活动中产酶将大豆蛋白降解为大豆肽, 其相对分子质量 大多分布在3000 U以上,产品中的... 　用现代生物发酵法生产大豆肽蛋白饲料_畜牧兽医_农林牧...且不易筛选到高效表达的菌株以及菌株的产量较低;...就是对豆粕进行直接酶解,主要用于大豆肽的液态生产... 　目前 研究者正探索豆粕发酵生产大豆肽,其中菌种用于产蛋白酶的黑曲霉。活性微生 物菌体直接参与生化代谢,作用于大分子大豆蛋白,修饰某些功能基团;活性微 生物菌体... 　胰蛋白酶抑 制因子、凝血素、大豆球蛋白、β-伴球蛋白、植酸等抗营养因子被...(三)发酵豆粕配方 3(含 80-100%生物活性小肽,粗蛋白 55-60%) 因为生产... 　利用牛奶水解圈筛选模型从中分离筛选得到产蛋白酶能力较高的菌株 whr1,初步鉴定...研究产蛋白酶菌株发酵产酶条 件,对培养基成分和发酵条件进行优化,确定最佳培养... 　一、豆粕和发酵豆粕的特性 豆粕是大豆提取豆油后得到...一浸豆粕的生产工艺较为先进,蛋白质含 量高,是...分离和纯化工艺做 了大量的研究工作,主要有下面几个... 　发酵豆粕的研究与应用_畜牧兽医_农林牧渔_专业资料...还能够将豆粕的蛋白质降解成小肽,更利于消化吸收,...在豆粕中 主要有胰蛋白酶抑制剂、植酸、大豆凝血素... 　经过酶解或 发酵处理的蛋白有比传统大豆中蛋白质更易于吸收、低抗原等特点, 被认为是幼龄动物饲料的理想植物蛋白。[1] 酶解豆粕主要用于大豆肽的液态生产。它存在... 　发酵豆粕饲用品质的评定指标及其应用 摘要 植物肽蛋白...3.3 胰蛋白酶抑制因子 3.3.1 植物肽蛋白饲料...料,所以,我们研究的大豆肽蛋白饲料是“低抗原” 。...