您现在的位置：&>&&>&
站内搜索：
小麦质量快速鉴定的7个方法
　　1.小麦品种的鉴定
　　用肉眼辨别小麦的品种和外观，分清白皮麦、红皮麦、硬质麦、软质麦以及麦质的优劣。颗粒粗圆、饱满均匀的质优;皱缩狭细、腹沟深而参差不齐，有虫蚀痕迹的质劣。麦粒横断面鲜明，呈玻璃质，组织结构坚实、紧密，一般为硬质小麦;麦粒横断面呈粉状质，组织松软，且粉色较白，一般为软质小麦。
　　2.小麦水分的鉴定
　　(1)手抓法。用手插进麦堆内，感觉阻力较小，有滑感，满抓一把小麦，紧握有咔咔咔的声音，拳头两端小麦溢出较快，这样的小麦水分在 13%以内;如手插进麦堆内，感觉有一定阻力，满抓一把小麦紧握声音较小，拳头两端外溢较少、较慢，这样的小麦水分在 14%左右;如手插进麦堆内，阻力较大，有潮湿感觉，满抓一把小麦紧握无声，掌心感觉让劲，拳头两端小麦不易溢出，这样的小麦水分在 15%以上。
　　(2)齿咬法。用牙齿咬麦粒，声音清脆，横断面整齐，无毛边，为硬质的小麦，水分均在 12%左右; 如咬了 10 粒小麦，有 8 粒稍露牙，能发响声，断面齐，稍有毛边，但另外两粒较软，水分约在 13%左右;咬时响而不脆，牙咬压力大，稍带软性，横断面起毛边，水分约在 14%左右 咬时声小且横断面不齐，甚至成锯齿形，不起粉状，水分约在15%左右。
　　3.小麦杂质的鉴定
　　用手插进麦堆内，手背朝上，抓起一把麦粒，左右徐徐摇动，泥沙杂质留在手心，再辨别其含杂程度。用手抓满满一把小麦，约重 25g, 看不出明显杂质，将小麦在手掌上颠落后，除留于掌握上有少量的砂泥或并肩泥外，约留 2 粒左右的荞籽，其含杂量在 2%左右。
　　4.小麦容重的鉴定
　　(1) 水分相同、质量相同、品种不同( 硬质、软质麦)的小麦。硬质麦容重比软质麦容重大 15~20g/L, 水分在 13%以内， 麦色鲜明， 无虫蛀，籽粒饱满均匀，腹沟很浅。这样的小麦容重：硬质麦约为 780~790g/L, 水分在 13.5%左右，籽粒满，麦色光亮正常，腹沟深，不完善粒 2%左右，硬质小麦容重为 770~780g/L 升。
　　(2)同质量、同品种的不同水分的小麦，水分每高低1%, 容重上升或下降约 11~13g/L.如同品质的早红(白)皮小麦，水分13.5%、容重为 800g/L、水分下降到 12.5%时，容重为 810g/L 以上。
　　(3)同一品种，不同时间脱粒的小麦，雨前雨后容重高低相差20~25g/L.未成熟粒的含量高低也有一定影响。
　　5.不完善粒的鉴定
　　抓一把小麦平摊在桌子上，视线集中于 10cm2面积， 视其所含不完善粒 4 粒， 约占 2.50%; 含背部尾端有瘪凹及有皱纹或腹沟过深的不完善粒 3 粒的约占不完善粒包括虫蚀、破损、霉变、病斑、生芽等尚有食用价值的颗粒。
　　6.小麦赤霉病粒的鉴别
　　(1)灰白粒。子粒干瘪、皱缩、色泽白无光、组织疏松、捻压易碎、粉质少、粉质灰白、比重轻， 通过风筛水漂可分离出来。这是因为在扬花期受病菌侵染后因温度高，湿度大，病菌只长菌丝，没有产生孢子而造成灰白粒。
　　(2)霉红粒。从胚部起逐渐蔓延到其他部位出现粉红、玫瑰红或橙红色， 子粒瘪瘦。程度不同表现出皮层皱缩、组织较松、粉质和健壮麦粒也有区别。这是因为扬花期受病菌侵染后，温度、湿度条件都较适合，分生孢子大量繁殖，分泌出色素后造成霉红粒。
　　(3)灰青粒。胚部开始，局部或全部皮层灰青、无光泽、子粒皱缩、组织疏松、粉质变劣。这是因为在乳熟期感染病菌后，养分被吸收而引起的病麦粒。
　　7.霉粒的鉴别
　　毒病粒呈二棱形，有芒，子粒约占正常麦粒的 1/2.重量轻，偏小，皮色跟大麦皮相似。腥黑穗病粒比正常麦粒略小，皮色发黑，重量轻， 一压即破， 破后似黑粒，腥味大。
　　如果需要更精准更专业的鉴定小麦质量，就需要使用精准测水仪等农业专业仪器来进行检测了。
（作者：）　文章来源：粮商
【发表评论】【】
与“小麦质量,小麦”相关的文章：
推荐专题：
中国饲料行业信息网原创文章，转载请注明出处。我们转载的文章，如果涉嫌侵犯您的著作权，或者转载出处出现错误，请及时联系文章编辑进行修正，谢谢您的支持和理解！
玉米热门：
??????????
评论排行：
??????????
玉米论坛：
饲料通系列软件： |
内容咨询：010- 广告销售：010-85323 短信客服： 电子邮件：
(C)版权所有： 中国饲料行业信息网您的位置： &
小麦赤霉病的鉴别与防治麦类作物学报２００６；两种检测小麦ＤＯＮ含量方法的比较与应用；裴自友１’２，韩航如１，李亚浩１，亓增军１，庄丽；（１．南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验；摘要：为选育赤霉病毒素含量低的小麦品种，减轻赤霉；ｎｇ?；Ｉ￡Ｌ～，在添加ｏ．１～５．ｏｍｇ?ｋｇ＿１Ｄｏ；ＤｏＮ；ｔｅｓｔ．ＨＰＬＣ简便、安全．比较适宜于ＤｏＮ含；ＤＯＮ及其衍生物含量的检测；关键
麦类作物学报２００６。２６（５）：１５３～１５８ＪｏｕｒｍｌｏｆＴｒｉｔｉｃｅａｅＣｒｏｐｓ
两种检测小麦ＤＯＮ含量方法的比较与应用
裴自友１’２，韩航如１，李亚浩１，亓增军１，庄丽芳１，王秀娥１，陈佩度１，刘大钧１
（１．南京农业大学作物遗传与种质创新国家重点实验室，江苏南京２１００９５；２．山西省农业科学院作物遗传研究所，山西太原０３００３１）
摘要：为选育赤霉病毒素含量低的小麦品种，减轻赤霉病危害，在比较了免疫亲和拄液相色谱法（ＤｏＮｔｅｓｔ－ＨＰＬＣ）和气质联用法（ＧＣ－ＭＳ）测定小麦中毒素含量的特点的基础上，利用两种方法对自然发病和赤霉病茵人工接种的小麦籽粒ＤＯＮ含量进行测定。结果表明，Ｄ（）Ｎｔｅｓｔ．ＨＰＬＣ方法线性检测下限为０．１
Ｉ￡Ｌ～，在添加ｏ．１～５．ｏｍｇ?ｋｇ＿１ＤｏＮ标准品时，其平均回收率为８５．８０％；ＧＣ－ＭＳ方法提高了检测的可靠性，灵敏度更高，其线性检测下限为Ｏ．０２５ｎｇ?扯Ｌ～，在添加ｏ．１～１０．０ｍｇ?ｋｇ＿１ＤｏＮ标准品时，其平均回收率为９４．６８％，而且能够同时检测多种毒素。相关性分析表明，两种方法检测结果相关显著（Ｒ２＝Ｏ．９９２８）。
ｔｅｓｔ．ＨＰＬＣ简便、安全．比较适宜于ＤｏＮ含量较低品种或品系大样品的检测。ＧＣ－ＭＳ更适宜小样品
ＤＯＮ及其衍生物含量的检测。
关键词：小麦｝赤霉病；脱氧雪腐镶刀茵烯醇；液相色谱；气质联用中图分类号：Ｓ５１２．１；Ｓ３３２．２
文献标识码：Ａ
文章编号：１００９―１０４１（２００６）０５一０１５３－０６
ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎａｎｄＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＴｗｏＤｅｏｘｙｎｉＶａｌｅｎｏｌ（ＤＯＮ）
Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ
Ｍｅｔｈｏｄｓ
Ｗｈｅａｔ
Ｇｒａｉｎｓ
Ｌｉ－ｆａｎ９１，
ＰＥＩＺｉ―ｙｏｕｌ”，ＨＡＮＨａｎ乎ｒｕｌ，ＬＩＹａ．ｈａ０１，ＱＩＺ明ｇ－ｊｕｎｌ，ＺＨＵＡＮＧ
Ｄａ－ｊｕｎｌ
Ｘｉｌ卜ｅ１，ＣＨＥＮＰｅｉ－ｄｕｌ，ＬＩＵ
（１－ＮａｔｉｏｎａＩＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃｓａｎｄＧｅｒｍｐｌａｓｍＥｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ，ＮａｎｊｉｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｎａｎｊｉｎｇ，
０３００３
Ｊｉａｎｇｓｕ２１００９５，Ｃｈｉｎａ；２．ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃｓ，ＳｈａｎｘｉＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｉｅｎｃｅｓ，Ｔａｉｙｕａｎ，Ｓｈａｎｘｉ
１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂｒｅｅｄｉｎｇｗｈｅａｔｃｕｌｔｉｖａｒｓｗｉｔｈｌｏｗｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎ０１（ＤＯＮ）ｃｏｎｔｅｎｔｉｓｃｏｎｔｒｏｌｔｈｅｔｏｘｉｎｃｏｎｔａｍｉｎａｔｉｏｎｉｎｗｈｅａｔｇｒａｉｎｓｃａｕｓｅｄｂｙｗｈｅａｔｓｃａｂ．ｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ
ＤＯＮｃｏｎｔｅｎｔｉｎｗｈｅａｔ
ｇｒａｉｎｓ，ＤｏＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ
ｅｆｆｅｃｔｉｖｅａｐｐｒｏａｃｈ
Ｉｎｔｈｉｓｐａｐｅｒ，ｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｆｏｒ
ａｎｄＧ（、．ＭＳ，ｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄ．
ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔｂｏｔｈｍｅｔｈＤｄｓｗｅｒｅｆａｓｔａｎｄａｃｃｕｒａｔｅ，ｗｉｔｈｔｈｅｌａｔｔｅｒｍｏｒｅｃｒｅｄｉｂｌｅａｎｄｓｉｔｉｖｅ．
ＴｈｅｌｉｎｅａｒｌｏｗｅｓｔｌｉｍｉｔｏｆＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣｗａｓ０．１
ｎｇ／肛Ｌ，ｉｔｓ
ａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｒａｔｅｗａｓ
８５．８０％ｗｈｅｎ０．１～５．Ｏｍｇ?ｋｇ一１ＤＯＮ
ｗａｓａｄｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅｗｈｅａｔ
ｒｅｃｏｖｅｒｙ
ｇｒａｉｎｓ．ＧＣ＿ＭＳｍｅｔｈｏｄｃｏｕｌｄｄｅ―
ｆｏｒｍｓｏｆ
０．０２５
ｎｇ／肚ＬＤＯＮ，ｗｉｔｈ
ｏｆ９４．６８％ｗｈｅｎＯ．１～１０．Ｏｍｇ?ｋｇ－１ＤＯＮ
ｃｏｕｌｄｄｅｔｅｃｔｖａｒｉｏｕｓ
ｔｏｘｉｎ
ｗａｓａｄｄｅｄｉｎｔｏｔｈｅｗｈｅａｔ
ｇｒａｉｎｓ．】Ⅵｏｒｅｏｖｅｒ，
ＧＣＩＭＳｍｅｔｈｏｄ
ＤＯＮ，ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ３一ＡＤＯＮ，１５一ＡＤＯＮｅｔｃ．ｉｎｔｈｅｓａｍｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ，ｗｈｉｌｅＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣｃｏｕｌｄｄｉｓｔｉｎｇｕｉｓｈｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｏｘｉｎｆｏｒｍｓ．
Ｂａｓｅｄ
Ｔｈｅｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｓｈｏｗｅｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ（Ｒ２一Ｏ．９９２８）．
ｔｈｅｐｒｅｓｅｎｔｒｅｓｕｌｔｓ，ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣｗａｓｓｕｇｇｅｓｔｅｄｔｏｂｅｕｓｅｄｉｎｌａｒｇｅｓａｍｐｌｅｓｆｏｒＤＯＮ
ｎａｌｙｓｉｓ，ａｎｄＧ（’－ＭＳｓｈｏｕＩｄｂｅｍｏｒｅｈｅｌｐｆｕｌｉｎｓｍａｌｌｓａｍｐｌｅｓｆｏｒｂｏｔｈａｎａｌｙｓｉｓ
ｔｉｖｅｓ．
Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｔｒｉ￡ｉｃ“，扎口Ｐｓ￡ｉ勘“，，ｚ；Ｆ乱ｓ口ｒｉ“，，ｚｈｅａｄｂｌｉｇｈｔ
ＤＯＮａｎｄｉｔｓｄｅｒｉＶａ―
ｓｃａｂ；Ｄｅｏｘｙｎｉｖａｌｅｎｏｌ；ＨＰＬＣ；ＧＣ―ＭＳ
小麦赤霉病是世界温暖潮湿和半潮湿地区日渐流行的一种重要病害，在我国主要流行于长江
中下游和东北麦区，近年来随着气候变暖和耕作制度的变更，在北部麦区亦时有发生。小麦赤霉
收稿日期；２００６一０４―１１修回日期ｚ２００６一０６一０７
基金项目：国家自然科学基金项目（３０１７０５７８，３０３３０３８０）｝美国ＭｃＫｎｉｇｈｔ基金ＣＣＲＰ项目Ｉ长江学者和创新团队发展计划项目。作者简介：裴自友（１９６５一），男，在读博士，副研究员，主要从事小麦遗传育种研究。
通讯作者：陈佩度（１９４４一），男，教授，主要从事作物遗传育种研究Ｉ刘大钧（１９２６一），男，教授，院士，主要从事作物遗传育种研
麦类作物学报２６卷
菌侵入寄主后，不仅造成产量损失和品质下降，同时还会引起严重的毒素污染［１’２］。发生赤霉病的
麦粒含有脱氧雪腐镰刀菌烯醇（ＤＯＮ）、Ｔ一２毒素、
３一乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（３一ＡＤＯＮ）、１５一乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（１５一ＡＤＯＮ）、雪腐镰刀菌烯
醇（ＮＩＶ）等多种对人、畜有毒的单端孢霉烯族类
真菌毒素及其它类型的真菌毒素，其中最具代表性的单端孢霉烯族毒素是ＤＯＮ，又称呕吐毒素。谷物中ＤＯＮ中毒的发病率最高，它能导致人畜呕吐和腹泻，破坏免疫系统［３］，而且毒性稳定，耐热、耐酸、耐贮藏。为保障人畜安全，许多国家都．
制定了谷物中ＤＯＮ的限量标准，我国规定商品小麦赤霉病病粒率最大允许含量为４．ｏ％（ＧＢ１３５１一１９９９），小麦、面粉、玉米及玉米粉中ＤＯＮ限量标准为１ｍｇ?ｋ－１（ＧＢｌ６３２９―１９９６）［４］。因此
选育抗赤霉病且籽粒毒素含量低的小麦品种对减
轻赤霉病危害、提高小麦籽粒的商品品质、保证食品安全具有重要意义。
镰刀菌毒素的检测方法主要有薄层色谱法（ＴＬＣ）［ｓ］、气相色谱（ＧＣ－／ＥＣＤ）［６］、液相色谱（ＨＰＬＣ）［７］、气一质联检（Ｇｃ＿ＭＳ）［８］、液一质联检（ＬＣ＿ＭＳ）［９］，以及酶联免疫（ＥＬＩＳＡ）法［１０］和近红外（ＮＩＲ）法［１１１，我国谷物及其制品中ＤＯＮ测定标准方法为薄层色谱测定法及免疫测定法（ＥＬＩＳＡ）（ＧＢ／Ｔ１４９２．５―１９９４）［１引。以ＤＯＮ特异
性抗体制成的免疫亲和柱为前处理技禾而建立的
液相色谱法（ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ）是一种ＤＯＮ测定新方法［１引，目前已成为我国进出口粮谷中ＤＯＮ检测的行业标准方法。
本文比较了ＤＯＮｔｅｓｔ－ＨＰＬＣ和ＧＣ―ＭＳ检
测方法的特点，旨在探讨如何利用色谱方法筛选
抗毒素小麦种质资源并开展ＤＯＮ积累机制方面的研究，为培育低毒素含量的小麦品种提供技术支持。１
材料与方法
１．１材料、试剂与仪器
实验所用苏麦３号、望水白、翻山小麦、火烧
头、无芒自壳、红头麦、绵阳８５４５等５０个小麦品
种引自国家和江苏省种质资源中心，原产地为江苏、浙江、上海、福建、湖南、江西、湖北等省市。小
麦品种晋太６５（产地太原，经ＤＯＮｔｅｓｔ＿ＨＰＬＣ法检测ＤＯＮ含量为Ｏ．０００ｍｇ?ｋｇ－１）由山西省农
科院作物遗传研究所温辉芹副研究员提供。赤霉
病高产毒菌株Ｂ４―１由美国农业部农业应用研究中心惠赠，为高产ＤＯＮ菌株。
试剂：聚乙二醇（ＰＥＧ）：ＭＷ＝８０００；甲醇：液相色谱纯（Ｍｅｒｃｋ）；乙腈：液相色谱纯（Ｍｅｒｃｋ），ＧＣ－ＭＳ方法所用乙腈为分析纯；呕吐毒素标准
品：ＤＯＮ、３一ＡＤＯＮ、１５一ＡＤＯＮ（Ｓｉｇｍａ）；其他试剂
均为分析纯，水为超纯水。衍生化试剂：三甲硅烷基咪唑（ＴＭＳＩ）；三甲基氯硅烷（ＴＭＣＳ）（美国
ＳＵＰＥＬＣＯ公司）；全氯五环癸烷（又称灭蚁灵，
Ｍｉｒｅｘ，德国Ｒｄｈ）；三甲基戊烷（Ｉｓｏｏｃｔａｎｅ，德国
Ｒｄｈ）。
液相色谱仪为ｗａｔｅｒｓ６００；高速均质器为
ＵＩ。ＴＲＡ―ＴＵＡＲＡＸＴ２５，由德国Ｊ＆Ｗ公司生产；免疫亲和柱（ＤＯＮｔｅｓｔ（ｔｍ）ｃｏｌｕｍｎ），由美国ＶＩＣＡＭ公司生产；在ＳＵＰＥＬＣＯ（ｔｍ）固相萃取装置上进行ＤＯＮ的制备，氮吹仪采用Ｎ―ＥＶＡＰＴＭ１１１。ＧＣ―ＭＳ仪器型号为Ｔｈｅｒｍｏ
Ｆｉｎｎｉｇａｎ
ＧＣ―ＭＳ；质谱：ＴＲＡＣＥＤＳＱ，气谱：
ＴＲＡＣＥＧＣ２０００；色谱柱ＤＢ．５ＭＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ公
司）３０ｍ×Ｏ．２５ｍｍ×Ｏ．２５ｐｍ。１．２方法
１－２．１
赤霉病人工接种２００３、２００４、２００５年在
南京农业大学江浦实验站进行赤霉病抗性鉴定，于小麦开花期，以单花滴注法接种高产毒菌株Ｂ４―１的分生孢子悬浮液，成熟后收获接种穗，人工脱粒（确保全部籽粒不丢失）。自然发病鉴定在福建省建阳市南平地区农科所进行。
１．２．２
ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法
（１）标准工作液的制备用流动相配置浓度
为Ｏ．１、Ｏ．２５、Ｏ．５、１．Ｏ、２．５、５．Ｏ及１０．Ｏ
弘Ｌ＿１的ＤＯＮ系列标准工作液，为保证不同测试
时间测定结果的可靠性，每次重新开机时，都要制作新的工作曲线。
（２）色谱条件
色谱柱：瑞典产ＫｒｏｍａｓｉｌＣ。８
色谱柱，规格为２５０×４．６ｍｍ，粒径５肛ｍ；进样量：２０ＩｌＬ；柱温：２９℃；流动相：乙腈一水（１５：８５体积比）；流速：Ｏ．８ｍＬ?ｍｉｎ～；检测波长２１８ｎｍ；
最大保留时间为８ｍｉｎ左右。
（３）样品的提取及色谱分析
用磨粉机粉碎
样品，在均质杯中加入５０ｇ面粉、１０
ｍＬ去离子水，高速均质１ｍｉｎ后，用定性滤
纸过滤，然后再用微纤维滤纸（９３４ＡＨ，９１１ｃｍ，１．５肛ｍ，Ｗｈａｔｍａｎ）过滤。将１ｍＬ上述滤液以１滴／ｓ的流速通过ＤＯＮ―ｔｅｓｔ免疫亲和柱，直至空
５期斐自友等：两种检测小麦ＤＯＮ含量方法的比较与应用
气进入柱子。用５ｍＬ超纯水以２滴／ｓ的流速冲洗柱子，直至空气进入柱子。加１．ＯｍＬ甲醇以１滴／ｓ的流速淋洗柱子，将甲醇洗脱液收集于玻璃试管中。洗脱液在氮吹仪上吹干，最后用３００弘Ｌ的流动相定容。注入２０肛Ｌ样品或ＤＯＮ标准液进行ＨＰＬＣ测定。
接种穗籽粒中毒素含量过高，为不超过免疫
亲和柱的检测上限，提取时略加修改。一般是以接种穗籽粒的病粒重所占比例来确定稀释的倍数，使测定值在２ｍｇ?ｋｇ－１以内。具体是赤霉病病粒重率为１％～２％时提取液稀释３倍；２％＜病粒重率≤４％，稀释５倍；４％＜病粒重率≤６％，稀释７倍；６％＜病粒重率≤１２％，稀释９倍；１２％＜病粒重率＜１９％，稀释１９倍。根据面粉重量按比例加入相应的ＰＥＧ和水，装入三角瓶内用封口
膜封口，摇床上高速（２８０ｒｐｍ）摇１５ｍｉｎ后用于
ＤＯＮ提取，其它步骤相同。
１．２．３
ＧＧＭＳ方法
利用美国Ｍｉｎｎｅｓｏｔａ州立
大学董艳红博士提供的方法进行检测，具体如下：
（１）混合标准工作液的制备配ｏ．０２５ｎｇ／
肛Ｌ～１０．Ｏｎｇ／弘ＬＤＯＮ、３～ＡＤＯＮ、１５～ＡＤＯＮ
的衍生化标准品。
（２）色谱条件升温程序为初始温度１５０℃１ｍｉｎ，然后以３０℃／ｍｉｎ的速度升温至２８０℃，保持５ｍｉｎ。
（３）质谱条件进样口温度３００℃，氦气流速
ｍＬ／ｍｉｎ，离子源１１４８Ｖ，ＥＩ源；正离子５０～
４５０扫描；进样量：１弘Ｌ；选择离子监测（ＳＩＭ）模式，内标法定量检测。
（４）样品的提取与分析
取粉碎好的小麦样
品面粉４ｇ，放入５０ｍＬ离心管中，加入１６ｍＬ的提取液（乙晴：水＝８４：１６），摇床上水平震荡提取
ｈ。取４ｍＬ过层析柱（Ｃ。８：中性氧化铝按１：３
混合，将１ｇ混合填料填入５ｍＬ的注射器中，上、下均放上滤纸片），将ｌｍＬ滤液转至２ｍＬ小瓶中，用氮气吹干。加入１００肛ＬＴＭＳ试剂（ＴＭＳＩ：ＴＭＣＳ＝１００：１），并转动小管，反应１０ｍｉｎ后，小瓶中加入１ｍＬ的ＭｉｒｅＸ－ｉｓｏｏｃｔａｎｅ（４ｍｇ／Ｌ），上下摇动几次，再加入１ｍＬ超纯水，用旋涡
仪震荡后，吸取上清液放人ＧＣ－ＭＳ进样瓶中，供气质联检分析。单籽粒的提取程序基本相同，只
是加提取液后需保持２４ｈ，ＴＭＳ试剂和Ｍｉｒｅｘ－ｐＬ。
根据ＤＯＮ质谱特征，选择质／荷比（ｍ／Ｚ）分
别为２３５、２５９和４２２的碎片离子进行测定，３一ＡＤＯＮ、１５一ＡＤＯＮ则分别选择质／荷比是３７７、３９２和１９３、３９２的碎片离子进行测定。２
结果与分析
２．１两种测定方法线性范围、添加回收率
２．１．１
ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ法的线性范围、添加回
收率在小麦品种晋太６５面粉中添加ＤＯＮ标
准品（或ＶＩＣＡＭ公司含２ｍｇ?ｋｇ＿１ＤＯＮ的面粉样品）制备成浓度分别为ｏ．１、ｏ．２５、ｏ．５、１．ｏ、２．５、５．Ｏ、１０．Ｏ、２０．Ｏ和３０．Ｏｍｇ?ｋｇ－１的样品，静置２４ｈ后，用于回收率测定。每个水平重复４次（浓度为２．５、５．ｏｍｇ?ｋｇ＿１的样品重复３次，浓度为１０．Ｏ、２０．Ｏ和３０．Ｏｍｇ?ｋ９１的样品由于ＤＯＮ用量大，未设重复）。分析结果表明，当晋太５６中加入ＤＯＮ量为ｏ．１～３０．ｏｍｇ?ｋｇ＿１时，回收率变化在８．１７％～１１１．２１％，当检测范围在
Ｏ．１～５．Ｏｍｇ?ｋｇ－１时，回收率平均为８５．８０％。
而当ＤＯＮ含量＞５ｍｇ?ｋｇ．１时，即添加量分别为１０、２０、３０ｍｇ?ｋｇ－１时，免疫亲和柱的回收量不再增加，说明已超过亲和柱的吸附极限（表１）。
霎；一∞呦一蝴潍一锄一
相关分析表明，该方法的线性范围在ｏ．１～
一～一一一一一～∞～５．ｏ
ｍｇ?ｋｇ一，测定值与添加浓度间呈显著正相
关，回归方程为ｙ―Ｏ．６９５３Ｘ＋Ｏ．０７４６，Ｒ２一
Ｏ．９９９４，因而ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ的有效检测范围应为０．１～５．ｏｍｇ?ｋｇ一。本方法的线性检测下限是０．１ｎｇ／弘Ｌ，而在５．Ｏ～３０．０ｍｇ?ｋｇ＿１范围
内，测定值与添加浓度间呈非线性相关，表明当添
加浓度超过５ｍｇ?ｋｇ叫时，亲和柱已达到吸收极
限，严重影响测量的准确性。由添加回收试验结
果（表１）可见，在ｏ．１～５．ｏｍｇ?ｋｇ－１６个不同浓度水平下的平行样品的相对标准偏差范围为５．２１％～１１．２６％，小于１５％，符合分析要求。
、ｉｓｏｏｃｔａｎｅ的用量分别为２５和１５０
麦类作物学报
２．１．２
ＧＣ－ＭＳ方法的线性范围、添加回收率由表２可以看出，ＧＣ＿ＭＳ方法线性范围宽、检测限低、回收率高。ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法仅能检测ＤＯＮ，而ＧＣ＿ＭＳ方法一次进样就能同时测定多种毒素（ＤＯＮ及其衍生物）的含量（图１）。２．２两种检测方法测定结果的比较
考虑到成本因素，仅以２００５年人工接种后籽粒ＤＯＮ含量不同的６个材料为样品（未设重复），利用上述两种方法同时进行测定（表３、图２、图３）。初步比较了ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ和ＧＣ―ＭＳ在ＤｏＮ检测中的相关性。ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方
图１是２．５ｎｇ?弘Ｌ－１混合标样在ＳＩＭ模式下的色谱图。从图１可以看出，在给定的实验条件下，ＤＯＮ、３一ＡＤＯＮ、１５一ＡＤＯＮ和内标物Ｍｉｒｅｘ得到很好的分离，其中ＤＯＮ的出峰时间为６．Ｏ
３一ＡＤＯＮ、１５一ＡＤＯＮ和内标物Ｍｉｒｅｘ的保留时间
分别为６．４８、６．５５、７．９６
取配制好的Ｏ．０２５、Ｏ．０５０、Ｏ．１００、Ｏ．２５０、
Ｏ．５００、１．ｏＯＯ、２．５００、５．０００、１０．ｏｏＯ
ｎｇ?肛Ｌ１系
列混合标准溶液，分别进样１弘Ｌ，ＤＯＮ的浓度在
Ｏ．０２５～１０．Ｏｎｇ?肛Ｌ＿１时，其峰面积与质量浓度
法检测时，绵阳８５４５、无芒白壳、红头麦参照其ＧＣ－ＭＳ结果，提取液分别稀释２倍、１倍、４倍，苏
麦３号、火烧头、翻山小麦提取时未做调整。相关性分析表明，两种检测方法的测定结果呈极显著相关，Ｒ２＝ｏ．９９２８，与回收率实验结果基本一致，所检测样品的ＤＯＮ含量除了翻山小麦外（可能
呈良好的线性关系，线性回归方程为ｙ＝Ｏ．３２４５Ｘ―Ｏ．０２３４，Ｒ２＝Ｏ．９９９７，因此该方法线性检测下限是０．０２５ｎｇ?弘Ｌ一。
１５．ＡＤＯＮ
是实验误差引起的），Ｇｃ－ＭＳ方法结果均略高于
ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法。
表３两种方法Ｄ（）Ｎ含量的测定结果比较
Ｃ锄ｐａｍｔｉｖｅａ肋ｌ”ｉｓ伽ｔｈｅｄｅｔ∞ｔｉｏｎＯｆ
Ｃｕｌｔｉｖａｒｓ
Ｔａｂｌｅ３
３．ＡＤ０’
塑！塑垒垫！坠￡坠塑坐Ｐ！盟望窭磐！坠垃殳咝塾唑
亲和柱液相色谱
ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ（ｍｇ?ｋｇ一１）
ＧＣ－ＭＳ（ｍｇ?ｋｇ一１）
保留时间Ｔｉｍｅ（ｍｉｎ）、
ＤｏＮ、３一ＡＤＯＮ、１５一Ａ】∞ｌＮ混合标准溶液
的ＳＩＭ色谱图
ｓＩＭｃｈｒ彻ｍａｔｏｇｒａｍｏｆｔｈｅｍｉｘｏｆｔｈｅｓｔ锄ｄａｒｄ
ｓｏｌｕｔｉｏｎｓｏｆＤＯＮ、３一ＡＤｏＮ、１５－ＡＤｏＮ
Ｏ５Ｏ５Ｏ
在小麦品种晋太６５面粉中分别添加ＤＯＮ标准品后制备成浓度分别为ｏ．１、１．ｏ、２．ｏ、５．ｏ、
ｍｇ?ｋｇ＿１的样品，静置２４ｈ后，用于回收率
Ａｖ趔皋醛
测定。每个水平重复４次，分析结果表明，ＤＯＮ的平均回收率范围在８６．２４％～１０９．ｏ％。其相
对标准偏差分别为１２．８４％、７．６０％、８．８０％、７．９６％和３．８９％（表２）。
表２气质联用的添加回收率
仉仉仉ｍ田
∞窨ｊ眈毗叭∞∞舢ｍＯ巧ｍ
２．ＯＯ４．ＯＯ
６．ＯＯ８．ＯＯ
ｌＯ．００
１２．ＯＯ
１４．００
坠坐兰曼！塑！！盟垡鲤堕ｇ壁丛墨磐宝！塾鲤
（ｍｇ?ｋｇ一１）ＤＯＮＡｄｄｅｄ
保留时间Ｔｉｍｅ（ｍｉｎ）
苏麦３号籽粒中ＤＯＮ的ＨＰＬＣ色谱图
ＤＯＮｃ吼ｔ蛐ｔＦ喀２ＨＰＬＣ
ｉｌＩＳ哪ａｉ３Ｆａｉ璐
ｃｈｒ佃诅ｔ哩咖ｏｆ
平均检测值
（ｍｇ?ｋｇ一１）ＤＯＮＤｅｔｅｃｔｅｄ
平均回收率
Ｒｅｃｏｖｅｒｙ
相对标准偏差
２．３ＤｏＮ
ｔｅｓｔ－ＨＰＬＣ和ｏＣ－ＭＳ方法在小麦
ＤＯＮ含量检测中的应用
２．３．１
自然发病条件下小麦籽粒ＤＯＮ含量的
尽管２００４年福建省建阳
ＤＯＮｔｅｓｔ－ＨＰＬＣ检测
市赤霉病发生较轻，但不同品种问在赤霉病病粒率、普遍率等指标上仍有较大差别，为了进一步分
斐自友等：两种检测小麦ＤＯＮ含量方法的比较与应用
析籽粒ＤＯＮ含量的差别，对４４份材料ＤＯＮ含量进行了检测。取材时每个品种随机取籽粒２５０ｇ制粉，称５０ｇ用于ＤＯＮ提取。经ＤＯＮ
ｔｅｓｔ―
病品种绵阳８５４５的平均ＤＯＮ含量分别为Ｏ．０１６８和Ｏ．１１６９ｍｇ?妇～，有１１个品种ＤＯＮ
含量未能检测出，说明这些品种的ＤＯＮ含量低
于亲和柱的最低检测极限。
ＨＰＬＣ检测，３３个品种的ＤｏＮ含量介于Ｏ．００６８
～Ｏ．１９８８ｍｇ?ｋｇ＿１之间，抗病品种望水白和感
毯￡！耀ｋ：！！！：！！！：ｉ！！：三｛６９８７霉７．８３．
８．１１曼，１人８．曩５８．８３
９．４３９．５７９．７７ｌｏ３ｌ
保留时间Ｔｉｍｅ（ｍｉｎ）
图３苏麦３号籽粒中ＤＯＮ的ｓＩＭ色谱图ＳＩＭＤ（）Ｎｃ帆ｔｅｎｔｉｎＳ哪ａｉ
Ｆｉｇ．３
２．３．２
ｃｈｒｏｍａｔｏｇ舢ｏｆ
人工接种后小麦籽粒中ＤＯＮ含量的
为了进一步检测单花滴
ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ检测
ＤＯＮＤＯＮ
ｔｅｓ卜ＨＰＬＣ与Ｇｃ－ＭＳ检测方法的比较ｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法一般需样品５０ｇ，提取
注接种后不同品种籽粒中ＤＯＮ含量的差别，对２００３年人工接种后的４７个小麦品种籽粒中的毒素含量进行检测。由于每个材料仅接种１０～１５穗，面粉量很少，因而样品前处理方法也相应调整。ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ法测定结果表明，供试的小麦地方品种间ＤＯＮ含量存在显著差异，变化在
Ｏ．６２～８６．８６
过程不需要衍生化，提取时必须控制好滤液通过亲和柱的流速，整个过程要连续进行，中途不能停止，最后的样品也不能长时间保存。从提取到进样所需时间大约为２～２．５ｈ。在安全性上，ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法利用水和ＰＥＧ做提取液，所以安全性好。但从经济角度看，ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法每个样品前处理的成本约１５０元，相对较高。
ｍｇ?ｋｇ～。由于是利用了高产毒
菌株Ｂ４―１，品种间的抗ＤＯＮ积累特性可以明显的区分开来，鉴定效果明显好于福建自然发病的结果。这表明ＤＯＮｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法经过适当调整，也可以成功用于小样本ＤＯＮ含量的测定。
２．３．３
ｔｅｓｔ―ＨＰＬＣ方法仅能检测ＤＯＮ，不能检测
３一ＡＤＯＮ、１５一ＡＤＯＮ。因此该方法简便、安全、比较适宜于ＤＯＮ含量较低的大样本的检测，如用于商检和区域试验品种的评价。
ＧＣ―ＭＳ方法仅需样品４ｇ，还可进行单籽粒
人工接种后小麦籽粒中ＤＯＮ含量的
２００５年对人工接种Ｂ４―１分生孢
Ｇｃ－ＭＳ检测
子悬浮液的５０个小麦品种的籽粒毒素含量进行了ＧＣ＿ＭＳ检测。结果表明，品种平均ＤＯＮ含量变化在。ｏ．４４４―２０．７３７ｍｇ?ｋｇ－１之间，抗病品种苏麦３号和感病对照品种绵阳８５４５籽粒中平均
等小样品的ＤＯＮ提取，该方法需要衍生化，制样
在衍生化前可放冰箱保存，并且衍生后的样品可在一２０℃下存放，稳定性好。提取所需时间与
ＤＯＮｔｅｓｔ＿ＨＰＬＣ方法相当。由于提取时使用的
ＤＯＮ含量分别为１．１９３和７．００２ｍｇ?ｋｇ～。在
部分品种中检测到１５一ＡＤＯＮ，仅少量品种检出３一ＡＤＯＮ。在单籽粒（赤霉病粒）和６个小麦品种直接接种ＤＯＮ后的穗组织中也检测到了ＤＯＮ或衍生化形成的３一ＡＤＯＮ与１５一ＡＤＯＮ。因此，ＧＣ―ＭＳ方法不仅同时适于高、低毒素含量样品的
是离心管，可同时提取几十个样品，因此提取、制样效率高。ＧＣ―ＭＳ方法使用有毒的乙腈进行提取，安全性差些。在前处理上ＧＣ―ＭＳ方法成本低，每个样品仅需２０元，在有色谱仪的前提下，ＧＣ―ＭＳ操作成本就低多了。ＧＣ－ＭＳ方法灵敏度高，选择性高，其最低检出限可低达５０ｎｇ／一１０］，且检测上限高，增强了鉴定的可靠性，优点是用于
、检测，也可用来分析测定单端孢霉烯族毒素化合
包含各类专业文献、幼儿教育、小学教育、中学教育、高等教育、行业资料、各类资格考试、专业论文、两种检测小麦DON含量方法的比较与应用[1]_图文45等内容。　
　核移植的方法可获得克隆动物 (多选)20.右图表示叶肉细胞内发生的两种重要代谢...(1)小麦种子含量最多的有机物是由相同单体构成的生物大分子,构成该大分子的... 　田间试验与统计方法 复习题1_农学_高等教育_教育专区...(每小题 15 分,共 45 分) 1 研究小麦丛矮病...(1) (1) (1) 2 土壤中 NaCl 含量对植物的... 　)灭火。 )强制两种形式, 17.在过滤时,液面高度不...1/2以上的判为角质粒 (C)角质率超过70%的小麦为...蛋白质含量测定的常用方法是以( 法, (A)染料结合... 　(农质发〔2009〕 3 号) 原料乳及乳制品中三聚氰胺检测方法 GB/T 22388-...1:监测项目 铅镉砷汞铬 谷物监测项目及检测依据样品种类 稻谷、小麦、玉米、... 　神经系统的调控 4.米象是一种以小麦种子为食、活动...大肠杆菌 (2)为探究 DON 的致畸性是否与细胞的...1-5:DBACC 29.(1) 调节 激素的浓度 (2)根和... 　1、 检验食品、粮食、油料中粗脂肪含量的方法很多,最常用 的是( ) B/酸水解...小麦蒸煮品质测定 1、测定某批混合小麦的品尝评分值,小麦水分含量为 12.5%。 ... 　北京市西城区 2014 年高三一模生物 试题 1.下列...神经系统的调控 4.米象是一种以小麦种子为食、活动...一 定浓度的 进行处理;一段时间后,检测___含量。... 　2015年寒假汇智起航模拟试卷1_学科竞赛_高中教育_...用下列方法测定蛋白质含量,哪一种方法需要完整的肽键...冬小麦播种时,早播种比晚播种用种量要少一些,其... 　温度的小麦米象的种群增长率 含水量 11% 1 5....利用比色法测定泡菜中亚硝酸盐含量需要先配制标准样...(3)① 葡萄糖 DON ② 琼脂 稀释涂布平板法 ③ ...