请教大家一个免疫共沉淀结果分析沉淀的问题

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免疫沉淀中常见问题及解答
1. 用于一般免染的抗体是否都可以用作免疫沉淀实验?&答:抗体的性质对免疫沉淀实验影响很大。抗体不同,和抗原以及Protein G或Protein A的结合能力也就不同。所以一般免染能结合的抗体未必能用于IP反应。 一般来说,多抗是沉淀反应最好的选择。另外,纯化的单抗、腹水和杂交瘤上清液也可用于免疫沉淀。2. 为什么溶解抗原的缓冲液中要加入一定量的蛋白酶抑制剂?&答:从活性细胞裂解出来的样品中,往往含有一定量的蛋白酶。为防止预检测蛋白的分解,修饰,溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每抑制剂,并且在低温下进行实验。3. 溶解抗原的缓冲液的配制需要注意什么?&答:多数的抗原是细胞构成的蛋白,特别是骨架蛋白,缓冲液必须要使其溶解。为此,必须使用含有强表面活性剂的缓冲液,尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。另一面,如用弱表面活性剂溶解细胞,就不能充分溶解细胞蛋白。即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果,抗原决定族被封闭,影响与抗体的结合。4. 免疫沉淀实验应如何把握抗体和缓冲液的比例?&答:每次沉淀实验之前,考虑抗体/缓冲液的比例十分重要。抗体过少就不能检出抗原,过多则就不能沉降在beads上,残存在上清;缓冲剂太少则不能溶解抗原,过多则抗原被稀释。具体比例视具体情况而定。
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免疫沉淀(Immunoprecipitation)实验操作方法
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免疫沉淀机理——一种免疫沉淀的新观点
【摘要】:正 作为免疫沉淀反应的假说或模式,至少应能解释在抗体过量时抗原的完全沉淀及区带现象。在探讨免疫沉淀机理的过程中,这是一个难题。人们普遍接受Heidelberger和Marrak的观点。认为沉淀性抗原抗体复合物是由抗原的表位与抗体的互补位之间,以各种键结合在一起的抗原抗体分子交替的大分子品格。然而,现在已有证据表明,这种观点不能完全解释免疫沉淀。从理论上讲,复合物分
【关键词】:
【正文快照】:
作为免疫沉淀反应的假说或模式,至少应能解释在抗体过量时抗原的完全沉淀及区带现象。在探讨免痊沉淀机理的过程中,这是一个难题。 人们普遍接受Heidelberger和M“r,‘ak的观点。认为沉淀性抗原抗体复合物是由抗原的表位与抗体的互补位之间,以各种键结合在一起的抗原抗体分子
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