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紫外杀菌结合微孔膜过滤在纯化水微生物控制中的应用
作者：张安山&&&&作者单位：730046 甘肃兰州，兰州生物制品研究所
探讨紫外线照射法杀菌结合0.2μm微孔除菌过滤在纯化水微生物控制中的应用。方法
运用紫外线杀菌和0.2μm微孔过滤除菌，对饮用水经过预处理一级反渗透和混合床时（阴、阳离子交换树脂）系统制备的纯化水进行紫外线照射杀菌和0.2μm微孔除菌过滤循环使用，再次进行紫外线照射杀菌，比较经混合床制备的纯化水在不同取样点微生物含量，以证明紫外杀菌器和0.2μm微孔除菌过滤对纯化水微生物控制的效果。 结果
经过混合床制备的纯化水，含有较高的微生物，平均为4.07CFU/ml；经紫外线一次照射杀菌后纯化水样平均为2.25CFU/ml；经0.2μm除菌过滤器后纯化水样平均为1.17CFU/ml；纯化水贮罐出水口纯化水样平均为1.15CFU/ml；纯化水循环使用前经紫外线二次照射杀菌后纯化水样平均为0.83CFU/ml，回水口纯化水样平均为0.96CFU/ml；纯化水细菌内毒素含量检测<0.25EU/ml。 经统计学分析，混合床出水样与回水样检测结果比较，具有显著统计学意义（P<0.01）。结论
运用紫外杀菌结合0.2μm微孔除菌过滤器对纯化水微生物能够进行有效的控制；纯化水细菌内毒素检测结果可以达到注射用水标准。
【关键词】& 纯化水 紫外线杀菌 0.2μm微孔除菌 微生物限度 细菌内毒素
&&& 水在药品生产中起着非常重要的作用，是药品制备过程中重要的原辅材料，随着药品质量不断提高，对其生产工艺用水质量也越来越高［1］。药品生产工艺过程中所使用的水一般分为三大类：饮用水、纯化水和注射用水。其中，饮用水通常用作纯化水和注射用水的原料，并不直接与药品相接触，不作为工艺用水参与药品，其制造过程只在药品生产过程中起辅助作用。纯化水和注射用水是用来制造药物产品的工艺用水，所以纯化水和注射用水的质量指标必须符合《中国药典》二部2005版的要求。笔者所在公司在2004年安装使用的工艺用水系统，为了充分考虑纯化水的微生物控制（当时《中国药典》2000版还没有这方面的要求），本系统采用了一级反渗透后，经过混合床制备的纯化水，首先进行紫外线照射杀菌，然后经过0.2&m微孔除菌过滤，在纯化水使用时再经过一次紫外线照射杀菌。在各个纯化水制备和使用点，取样进行微生物限度检查，现将年检查结果报告如下。
&&& 1& 材料与方法
&&& 1．1& 材料与仪器& 纯化水制水系统：甘肃省膜科学技术研究所。紫外灭菌器（广东威德轻工机电制品有限公司）；紫外灭菌灯，UVP-120W（美国制造）；0.2&m除菌滤芯（杭州西斗门膜工业有限公司）；HTY反复使用集菌培养器（杭州高得医疗器械有限公司、杭州泰林生物技术设备有限公司）；0.45&m ф5mm滤膜（杭州高得医疗器械有限公司、杭州泰林生物技术设备有限公司）。
&&& 营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、酵母浸出粉胨葡萄糖琼脂培养基（本单位提供）。
&&& 鲎试剂：0.25EU/ml（福州新北生化工业有限公司）。
&&& 1．2& 纯化水制水系统构成及各取样点分布& 饮用水& && 多介质过滤器& && 活性炭过滤器& && 一级精密过滤器（5&m）& & 二级精密过滤器（3&m） & 反渗透系统 & 反渗透水 & 混合床& & 紫外线一次杀菌器& 0.2&m微孔过滤器 & 纯化水罐&&&&& &&&& 紫外线二次杀菌器
&&& 1．3& 纯化水的检测方法& 依据《中国药典》二部2005版，对纯化水微生物限度检查方法的要求［2］，纯化水各取样点（共计6个取样点）进行检测，对纯化水罐样和循环使用回水样的微生物限度检查2004年、2005年、2006年结果做趋势图分析；依据《中国药典》二部2005版注射用水细菌内毒素检测的标准对纯化水进行检测［3］。
&&& 2& 结果
&&& 2．1& 纯化水紫外线灭菌效果测定结果& 对纯化水各取样点（共计6个）连续10次取样进行检测，经紫外线灭菌结合0.2&m微孔除菌过滤后制备的纯化水的微生物含量为1.17CFU/ml，完全符合《中国药典》二部2005版纯化水微生物限度要求每1ml不超过100个，结果见表1。
&&& 2．2& 对纯化水罐样和循环使用回水样的微生物限度检查& 根据本单位对纯化水微生物标准制定的目标线（<10CFU/ml），警戒线（<50CFU/ml）和行动线（<100CFU/ml），微生物趋热图分析，均小于目标线，结果见图1～4。 表1& 纯化水紫外线灭菌效果测度结果注：A：混合床出水样；B：紫外灯灭菌后样；C：0.2&m除菌后样；D：贮水罐样；E：二次紫外灯灭菌样；F：回水样；A与D比，t=18.83，P<0.01；A与E比，t=20.33，P<0.01
&&& 3& 讨论
&&& 在制药工业中，无论是纯化水系统还是注射用水系统，都存在着微生物污染的问题，由于多数微生物细菌不能在高于60℃的温度条件下增殖，注射用水多采用80℃以上保温、65℃以上保温循环使用［4］，这就大大地提高了注射用水的安全性。而纯化水一般在室温（10℃～30℃）条件下循环使用，微生物的繁殖和生产就是必然的，如何最大限度地降低和控制微生物在纯化水中的生长和繁殖，是每个药品生产厂家所必须面临的问题。尽管各个国家的制药工艺水平不一，要求也不尽相同，但中外所有关于水系统的规范和文献，都无一例外的或多或少地要求对工艺用水系统中的微生物进行检测和控制，而对于水系统中微生物控制，大都围绕着对水系统制备贮存单元和配水管道进行消毒灭菌，将微生物的数量控制在药品生产工艺所要求的标准范围。笔者所在单位采用的紫外线消毒结合0.2&m微孔除菌膜这样的方法，对于纯化水的微生物控制达到比较满意效果。众所周知，紫外线在200～300nm之间，有较强的杀菌能力，而且不附加任何化学药剂，不会对水产生二次污染，在260nm附近已被证实是杀菌率最高的紫外线。由于紫外线杀菌对水的色度、浊度、总铁含量和细菌量有一定的要求，因此它特别适用纯化水系统。再者，大多数细菌和许多霉菌都能够产生热原，其中致热能力最强的是革兰阴性杆菌的产物，在水的存贮和配送过程中即使很快被破坏的细菌，也会释放内毒素［3］，所以在紫外杀菌之后再除菌过滤是非常必要的。加之，在循环使用过程中，由于纯化水系统所处的一般环境，必定还有微生物存在，所以在使用前进行一次紫外线杀菌消毒更显得必要。从这套装置生产的纯化水质微生物含量检测结果来看，本系统有很好的控制微生物的产生和繁殖，特别值得一提的是，虽然《中国药典》2005版对纯化水的细菌内毒素含量没有要求，但是我们依照《欧洲药典》标准进行细菌内毒素的控制，完全能够达到<0.25EU/ml的标准，这不仅由于反渗透具有较高的除热原能力，另外混合床的酸碱化剂都具有杀菌效果，而同时也是控制离子交换系统中微生物的措施，再加上紫外线的杀菌和0.2&m膜滤芯的除菌过滤，使本系统生产的纯化水微生物含量远远低于《中国药典》要求的限度（<100CFU/ml），也小于本单位对纯化水微生物含量标准制定的内控指标（<10CFU/ml），而且细菌内毒素也符合《欧洲药典》，达到注射用水的标准。纯化水作为注射用水的原料，控制纯化水的微生物含量和细菌内毒素，为保证注射用水的质量也有着重要的意义。
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微信扫一扫收获行业前沿信息产氢细菌培养及模拟发酵产氢的研究--《云南师范大学》2003年硕士论文
产氢细菌培养及模拟发酵产氢的研究
【摘要】：
本文较为详细地分析了发酵产氢原理，全面综述了发酵产氢的研究现状，针对发酵产氢研究中存在和亟待解决的关键问题：发酵产氢细菌的培养和驯化、产氢过程的有机酸和pH变化对发酵的影响等，利用自行设计的连续半连续发酵产氢工艺装置，在恒温25℃条件下，以厌氧活性污泥为接种物，进行了相关实验研究。
1、进行了柠檬酸、苹果酸、乳酸、丙酮酸、甲酸、草酸、琥珀酸、富马酸、丁酸、丙酸和乙酸等11种有机酸发酵产氢研究，结果表明，在批量发酵中，柠檬酸、苹果酸、乳酸、甲酸、丙酮酸、草酸和富马酸可以实现发酵产氢，其产氢潜力分别为171.3、117.4、93.5、79.6、75.6、24.6和23.7ml／g，而琥珀酸、丁酸、丙酸和乙酸不能发酵产氢；连续发酵实验结果显示，除甲酸外，均不能持续产氢。
2、相关实验研究证实，可以利用甲酸连续培养和驯化产氢菌种以及调节发酵体系的pH值，在连续发酵中，甲酸的产氢能力在标准状态下高达273ml／g，能源转化率为63.80％。
3、在甲酸体系下进行了蔗糖发酵产氢的实验研究，实验结果表明，蔗糖发酵产氢的产气速率平均28.52L／L·d，最高达30.68L／L·d，氢含量43.4％，蔗糖产氢率174ml／g，能源转化率8.29％，适宜的糖浓5～15g／L；实验结果还表明，在有机酸和蔗糖产氢过程中，pH值和有机酸的积累是影响发酵产氢的关键因素，产氢的pH值最适在4.5～5.5间，pH低于4.3时发酵产氢无法启动，高于5.5后，产甲烷菌的产甲烷作用有所增强，有较多甲烷形成。有机酸积累主要表现为乙酸、丙酸、丁酸。较高浓度的丙酸、丁酸抑制产氢菌的产氢作用，是导致产氢不能持续进行的主要原因之一。较低浓度的乙酸积累虽然对产氢菌的产氢没有明显的抑制作用，但大量的乙酸积累将会使产氢转化率降低。
蔗糖发酵的产氢速率与国内文献的最大值11.28 L／L．d相比高出了18.04％；与日本的5.33 L／L．d相比高出了150％；产气率341．2ml／g，与国内文献值340ml／g相当。
【关键词】：
【学位授予单位】：云南师范大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2003【分类号】：TQ920【目录】：
1 绪言10-13
1.1 能源与环境的问题10
1.2 氢能的意义10-12
1.3 氢能的生产方法12-13
2 发酵产氢的研究现状及存在的问题13-24
2.1 发酵产氢的原理13-19
2.1.1 厌氧消化三阶段理论13-14
2.1.2 种间氢转移作用14-15
2.1.3 碳水化合物的厌氧发酵途径及氢气的来源15-19
2.1.4 与发酵产氢有关的酶19
2.2 发酵产氢的发展简史与研究状况19-24
2.2.1 发酵产氢的发展简史19-20
2.2.2 发酵产氢的研究现状20-24
2.3 存在的问题24
3 研究方案及主要内容24-25
3.1 研究方案24
3.2 研究的主要内容24-25
3.2.1 pH调控对发酵产氢的影响24
3.2.2 有机酸发酵产氢的研究24-25
3.2.3 甲酸培养产菌种的研究25
3.2.4 蔗糖发酵产氢的模拟研究25
4 材料与方法25-29
4.1 材料25-26
4.1.1 厌氧活性污泥25
4.1.2 有机酸25
4.1.3 蔗糖25
4.1.4 仪器25
4.1.5 实验装置25-26
4.2 方法26-29
4.2.1 分析测定项目26-27
4.2.2 实验工艺27-29
5 结果及分析29-44
5.1 pH值调控对发酵产氢的影响29-32
5.1.1 启动pH对发酵产氢的影响30
5.1.2 产氢过程中pH变化与产气量和气体含量的关系30-32
5.1.3 结果与分析32
5.2 各种有机酸发酵产氢实验32-36
5.2.1 有机酸发酵产氢能力32-34
5.2.2 产氢有机酸持续产氢能力34
5.2.3 产氢过程挥发性有机酸及乙醇的变化34-35
5.2.4 挥发性有机酸对产氢的影响35-36
5.2.5 结果与分析36
5.3 甲酸培养产氢菌种发酵产氢的研究36-38
5.3.1 启动时氮气和空气保护下甲酸产氢能力的比较36-37
5.3.2 甲酸产氢过程中产气量与pH变化37-38
5.3.3 结果分析38
5.4 有机酸调控下生物质(蔗糖)发酵产氢的研究38-44
5.4.1 甲酸和乙酸调节时有机酸积累对蔗糖产氢的影响38-40
5.4.2 甲酸和乙酸调控下蔗糖发酵产氢能力比较40-41
5.4.3 甲酸培养产氢菌种蔗糖发酵产氢的研究41-44
5.4.4 结论44
6 总结与展望44-47
6.1 总结44-45
6.2 展望45-47
参考文献47-51
附录: 发表论文、参与科研及获奖情况52
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刘艳;[D];山东大学;2008年
戚峰;[D];浙江大学;2007年
宗文明;[D];安徽农业大学;2009年
郭亮;[D];湖南大学;2009年
李东伟;[D];重庆大学;2004年
卢永;[D];南京理工大学;2010年
李金娟;[D];天津大学;2012年
邢德峰;[D];哈尔滨工业大学;2006年
陈玮;[D];哈尔滨工业大学;2010年
中国硕士学位论文全文数据库
李建昌;[D];云南师范大学;2003年
郝小龙;[D];合肥工业大学;2003年
卢怡;[D];云南师范大学;2004年
曾召刚;[D];郑州大学;2010年
包美丹;[D];北京化工大学;2012年
张明辉;[D];浙江大学;2011年
肖本益;[D];天津科技大学;2002年
郭红霞;[D];西安建筑科技大学;2004年
孟飞琴;[D];华东师范大学;2010年
方明;[D];西北大学;2010年
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