时间分辨荧光免疫分析免疫荧光法中曲线对结果的影响

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时间分辨免疫荧光法和电化学发光法检测HBsAg的对比分析
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时间分辨免疫荧光法和电化学发光法检测HBsAg的对比分析
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3秒自动关闭窗口乙型肝炎病毒标志物时间分辨荧光免疫分析法的研究--《华南师范大学》2004年硕士论文
乙型肝炎病毒标志物时间分辨荧光免疫分析法的研究
【摘要】:
标记免疫分析技术是一大类高灵敏度、高特异性检测技术的总称,因具有许多独特的优点,广泛应用于基础医学和临床各领域。时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)是当前标记免疫分析研究应用领域的热点之一,具有高灵敏性和高特异性,用于生物分子的超微量检测。乙型病毒性肝炎(简称乙型肝炎)是由乙型肝炎病毒(简称乙肝病毒)引起的肝脏炎性损害,是我国当前流行最广泛、危害最严重的一种传染病。定量检测乙型肝炎病毒血清学标志物的免疫诊断方法是预防和治疗乙型肝炎的前提,同时也能动态观测和监视病情。我们应用TRFIA建立了乙型肝炎病毒五项血清学标志物的时间分辨荧光免疫分析法,经初步的临床应用,得到较为满意的结果。
通过实验研究,以Eu-DTTA为示踪物,得到如下结论:
1.以夹心法建立了乙型肝炎病毒表面抗原时间分辨免疫荧光分析法(HBsAg-TRFIA)、乙型肝炎病毒表面抗体时间分辨免疫荧光分析法(HBsAb-TRFIA)、乙型肝炎病毒e抗原时间分辨免疫荧光分析法(HBeAg-TRFIA),所建立的标准曲线分析范围分别为0-300ng/ml、0-1280mIU/ml、0-16NCU/ml,分析灵敏度为0.05ng/ml、0.44mIU/ml、0.03NCU/ml。检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与IRMA同时定量检测多份血清样本,相关系数高达95%。
2.以中和抑制法建立了乙型肝炎病毒e抗体时间分辨荧光免疫分析法(HBeAb-TRFIA)和乙型肝炎病毒核心抗体时间分辨荧光免疫分析法(HBcAb-TRFIA),标准曲线分析范围分别为0-16NCU/ml和0-8NCU/ml。检测参考标准品的批内变异系数均小于10%,与IRMA同时定量检测多份血清样品,灵敏度分别为92.8%和93.3%。
总之,我们利用Eu-DTTA为标记物建立的乙型肝炎病毒五项血清学标志物时间分辨荧光免疫分析法分析范围宽,灵敏度高,操作简便,具有优越的定量检测能力,十分适合临床推广应用。
【关键词】:
【学位授予单位】:华南师范大学【学位级别】:硕士【学位授予年份】:2004【分类号】:R392【目录】:
中文摘要7-8
英文摘要8-9
第一章 绪论9-23
1.1 课题研究背景9-11
1.2 时间分辨荧光法和时间分辨荧光免疫分析技术11-18
1.3 时间分辨荧光免疫分析法的应用18-19
1.4 诊断乙型病毒性肝炎的重要意义19-22
1.5 本论文的研究内容22
1.6 小结22-23
第二章 乙型肝炎病毒表面抗原时间分辨免疫荧光分析法的建立(双抗体夹心法)23-48
2.1 材料与方法23-28
2.1.1 主要仪器设备23
2.1.2 主要材料23-24
2.1.3 溶液配置24
2.1.4 实验方法:24-28
2.2 结果与分析28-45
2.2.1 包被原料的鉴定28-30
2.2.2 豚抗-HBs-IgG的鉴定30-31
2.2.3 分析条件的优化31-39
2.2.4 反应温度、时间的确定39-40
2.2.5 临床参考值的确定40-42
2.2.6 抗干扰检测试验结果42
2.2.7 方法学评价42-44
2.2.8 稳定性试验44
2.2.9 TRFIA和IRMA的相关性比较44-45
2.3 讨论45-48
第三章 乙型肝炎病毒表面抗体时间分辨免疫荧光分析法的建立(双抗原夹心法)48-52
3.1 材料和方法48-49
3.2 结果与分析49-52
3.2.1 方法学评价49-50
3.2.2 热稳定性实验50-51
3.2.3 相关性比较51-52
第四章 乙型肝炎病毒e抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立(中和抑制法)52-61
4.1 材料与方法52-53
4.2 结果与分析53-61
4.2.1 包被、标记用的抗-HBe-IgG的鉴定53-56
4.2.2 分析方法优化实验56-58
4.2.3 方法学评价58-59
4.2.4 热稳定性实验59-60
4.2.5 两种方法结果比较60-61
第五章 结论61-62
参考文献63-69
攻读学位期间发表论文69-70
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时间分辨免疫荧光光谱法time-resal}}ed immunoflua-re}ence specttornetry时间分辨技术与荧光免疫技术相结合的一种分析方法。利用标记抗原或扰体的荧光探针的荧光寿命长丁样品背累荣光寿命,采用快速脉冲光源激发样品,用门控检测系统检测背景消失后的荧光信号。由此可显著降低背景荧光的一扰,大大提高测量灵敏度。参见荧光免疫分析i}-和时间分辨赘光光谱法。
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