垂体前叶直接神经支配的免疫组织化学研究--《第四军医大学学报》1988年05期
垂体前叶直接神经支配的免疫组织化学研究
【摘要】：正 经典的慨念认为下丘脑的神经内分泌细胞轴实终止于正中隆起,并释放生物活性物质进入正中隆起毛细血管,通过垂体门脉系统运输到垂体前叶,调节前叶分泌腺细胞的功能。虽有报告说少量儿茶酚胺神经纤维支配前叶的血管,但垂体前叶腺细胞没有神经支配。
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经典的慨念认为下丘脑的神经内分泌细胞轴实终止于正中隆起,并释放生物活性物质进入正中隆起毛细血管,通过垂体门脉系统运输到垂体前叶,调节前叶分泌腺细胞的功能。虽有报告说少量儿茶酚胺神经纤维支配前叶的血管,但垂体前叶腺细胞没有神经支配。 我们用抗P物质(5 ubstanee.P.
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京公网安备75号致病性大肠杆菌对动物机体免疫机能及肠道形态结构的影响--《内蒙古农业大学》2013年硕士论文
致病性大肠杆菌对动物机体免疫机能及肠道形态结构的影响
【摘要】：本论文通过对110头奶牛的粪样进行了大肠杆菌分离培养、生化特征鉴定、血清型分型、动物致病性试验，采用O抗原定型血清鉴定出该奶牛养殖场不同血清型致病性大肠杆菌的分布，其中优势优势血清型为O1、O2、O8、O78和O86菌株，在此基础上采用动物试验及实验室分析的方法研究致病性大肠杆菌对奶牛的内分泌状态及免疫功能的影响。同时通过小鼠感染血清型致病性大肠杆菌的试验探讨致病性大肠杆菌对肠道黏膜形态结构的影响。揭示致病性大肠杆菌在当代奶牛养殖中对奶牛的危害，为建立奶牛健康生产体系提供理论依据。论文主要包括3个试验：
试验一：在内蒙古大漠林深牧场选取110头荷斯坦奶牛，直肠采粪法采集粪样。通过大肠杆菌培养纯化、生化特征鉴定、血清型分型、动物致病性试验分析奶牛肠道内大肠杆菌的寄生情况。结果表明： O1、O2、O8、O78和O86致病性大肠杆菌分别占定型致病性菌株的23.08%、10.26%、20.51%、10.26%和7.69%。同时有其他血清型致病性大肠杆菌，但检出率较低。
试验二：经试验一分离鉴定后，选择携带不同血清型致病性大肠杆菌的奶牛，体重、胎次接近，每个血清型选择3头，尾静脉采血。采用放免法测定血清中与免疫相关激素、细胞因子的含量，比色法测定血清免疫球蛋白A（IgA）与免疫球蛋白G（IgG）的含量，使用流式细胞仪测定外周血CD3+、CD14+和CD21+细胞所占的百分比，探讨致病性大肠杆菌对奶牛免疫机能的影响。结果表明：（1）肠道内寄生O2、O8和O78血清型大肠杆菌对促肾上腺皮质激素（ACTH）的影响显著（P0.05）；O1、O8、O78、O2和O86血清型致病性大肠杆菌对生长激素（GH）、促生长因子IGF-1含量的影响显著（P0.05）；O2、O78、O8和O86血清型大肠杆菌对皮质醇（COR）含量的影响显著（P0.05）；O1、O78血清型致病性大肠杆菌对促甲状腺激素（TSH）影响显著（P0.05）；O8血清型致病性大肠杆菌对三碘甲腺原氨酸（T3）含量的影响显著（P0.05）；O78血清型致病性大肠杆菌对甲状激素（T4）与瘦素（LEP）含量的影响显著（P0.05）。（2） O1、O2、O78、O8和O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清白介素-2（IL-2）含量的影响显著（P0.05）；O1、O78、O2和O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清白介素-6（IL-6）含量的影响显著（P0.05）；O78、O2和O8血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清白介素-8（IL-8）、干扰素-γ（IFN-γ）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）含量的影响显著（P0.05）。（3）O1、 O78、 O8和O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛血清IgA、IgG含量影响显著（P0.05）；O2、O8和O86血清型致病性大肠杆菌对奶牛外周血中CD3+水平影响显著（P0.05），均高于对照组；携带O1与O2血清型致病性大肠杆菌奶牛外周血中CD14+水平显著高于对照组（P0.05）；携带O1、O2、O78和O8血清型致病性大肠杆菌奶牛外周血中CD21+水平显著低于对照组（P0.05）。提示肠道寄生致病性大肠杆菌导致奶牛的内分泌发生变化，免疫功能下降。
试验三：将60只健康小白鼠，随机分为6组，每组小鼠10只，进行灌胃血清型致病性大肠杆菌O1、O2、O78、O8和O86菌液。灌胃前禁食12h，第一组为对照组，对照组不攻毒致病菌，其余5组分别灌胃已制备好的O1、O2、O78、O8和O86菌液。7d后断颈致死，迅速剖腹，取十二指肠、回肠、空肠各段大约1cm用10%中性福尔马林固定，做成石蜡切片，HE染色后显微镜观察。结果显示：致病性大肠杆菌对小鼠肠道黏膜的破坏严重，从破坏程度来看，O78组小鼠的十二指肠几乎失去吸收营养物质功能。
【关键词】：
【学位授予单位】：内蒙古农业大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2013【分类号】：S858.23【目录】：
Abstract6-12
1 引言12-16
1.1 畜禽养殖业中的粪便污染及其微生物的危害12
1.2 大肠杆菌病原学特点12-13
1.3 大肠杆菌的致病性13
1.4 大肠杆菌的血清型及病理特征13-14
1.5 研究目的及内容14-16
1.5.1 研究目的14-15
1.5.2 研究内容15-16
2 试验研究16-40
2.1 试验一奶牛肠道内致病性大肠杆菌的分离与鉴定16-18
2.1.1 材料与方法16-17
2.1.2 结果17-18
2.1.3 讨论18
2.2 试验二致病性大肠杆菌对奶牛免疫机能的影响18-36
2.2.1 材料与方法18-19
2.2.2 试验数据处理19-20
2.2.3 结果20-32
2.2.4 讨论32-36
2.3 试验三致病性大肠杆菌对小鼠肠道黏膜形态结构的影响36-40
2.3.1 材料与方法36-37
2.3.2 结果37-40
2.3.3 讨论40
3 总体讨论40-41
3.1 奶牛肠道内血清型致病性大肠杆菌的分布40
3.2 致病性大肠杆菌对奶牛免疫机能的影响40-41
3.3 致病性大肠杆菌对小鼠肠道黏膜形态的影响41
4 总体结论41-42
4.1 奶牛肠道致病性大肠杆菌的分布41
4.2 致病性大肠杆菌对奶牛免疫功能的影响41
4.3 牛源致病性大肠杆菌对奶牛内分泌功能的影响41-42
4.4 牛源致病性大肠杆菌对小鼠肠道形态结构的影响42
5 研究创新之处42
6 展望42-43
参考文献44-50
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京公网安备75号山羊弓形虫病免疫胶体金快速检测试纸条的研制--《延边大学》2010年硕士论文
山羊弓形虫病免疫胶体金快速检测试纸条的研制
【摘要】：
弓形虫病(Toxoplasmosis)是由刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)引起的一种重要人畜共患寄生虫病。该病呈世界性分布,感染范围广,对人畜安全构成极大威胁。目前弓形虫疫苗的研究尚处于动物试验阶段,其安全性和有效性有待验证,所以推进弓形虫诊断技术的研究显得尤为重要。目前弓形虫病的诊断方法主要分为病原学诊断、免疫学诊断和分子生物学诊断,免疫胶体金检测技术作为免疫学诊断方法,以其操作简单、敏感特异、稳定性强、不需要特殊设备和结果判断直观等优点,被广泛应用于病原微生物、毒素、药物残留等方面的检测。
本试验采用重组弓形虫速殖子膜表面蛋白SAG2(P22)作为诊断抗原,利用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,与葡萄球菌A蛋白(SPA)结合形成探针,采用超速离心法纯化探针,对试纸条制备条件进行筛选,组装山羊免疫胶体金快速检测试纸条,并对试纸条的灵敏性、特异性和可靠性进行分析。
本试验扩增了弓形虫SAG2基因,构建pGEX-4T-1-SAG2重组质粒,通过大肠杆菌表达和切胶纯化,得到高纯度的重组SAG2蛋白。筛选得出试纸条制备的最佳条件：20nm粒径的胶体金在pH6.4的条件下标记25ug·L-1SPA形成的探针结合最牢固,以四硼酸钠稀释探针,以BSA+NaN3+聚乙二醇10000混合液作为探针稳定剂,以Sartorius CN140型硝酸纤维膜作为载体,以1.0mg mg·L-1的重组SAG2蛋白包被检测线,以0.9mg mg·L-1马抗山羊IgG包被质控线,组装的免疫胶体金检测试纸条检测效果最好。试纸条检测弓形虫阳性血清的稀释倍数可达到1：5120,与山羊球虫阳性血清、山羊布氏杆菌、日本血吸虫阳性血清均无交叉反应。
【关键词】：
【学位授予单位】：延边大学【学位级别】：硕士【学位授予年份】：2010【分类号】：S858.27【目录】：
ABSTRACT7-10
1 弓形虫病诊断的研究进展10-14
1.1 临床诊断10
1.2 实验室诊断10-12
1.3 分子生物学诊断方法12-14
2 弓形虫SAG2基因的研究进展14-15
2.1 SAG2蛋白的免疫原性14-15
2.2 SAG2蛋白的临床应用潜在价值15
3 胶体金检测技术的研究进展15-17
3.1 胶体金检测技术的原理15
3.2 免疫胶体金的制备15-16
3.3 胶体金探针的制备16
3.4 免疫胶体金检测技术的分类及其应用16-17
3.5 免疫胶体金检测技术的优缺点17
4 本研究的目的及意义17-18
材料与方法18-26
1 材料18-20
1.1 细菌菌株、虫种和质粒载体18
1.2 实验动物18
1.3 主要试剂18
1.4 主要仪器18
1.5 主要试剂的配制18-20
2 方法20-26
2.1 弓形虫SAG2基因的克隆与原核表达20-21
2.2 胶体金免疫层析鉴别诊断试纸的研制21-26
1 弓形虫SAG2基因的PCR扩增产物鉴定26
2 重组质粒PMD18-T-SAG2的PCR及酶切鉴定26-27
3 原核表达载体的构建27
4 SAG2基因的原核表达及鉴定27-29
5 胶体金质量的鉴定29-30
5.1 目测鉴定结果29
5.2 电镜鉴定结果29-30
5.3 胶体金烧制方法的筛选结果30
6 胶体金的标记30-33
6.1 SPA与胶体金结合的最佳pH确定30-32
6.2 SPA与胶体金结合的最佳浓度的确定32
6.3 胶体金探针的鉴定32-33
6.4 胶体金探针稳定性试验33
7 试纸的制备33-34
7.1 金标垫的制备33
7.2 不同NC膜的优化结果33
7.3 T线及C线包被液的优化结果33-34
7.4 试纸的组装及检测结果的判定34
8 敏感性试验34
9 特异性试验34-35
10 可靠性试验35
11 样本检测35-36
参考文献41-47
作者简介48
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