法制备感受态细胞的原理和方法
的转化和重组质粒的筛选方法。
质粒在不同的细菌之间转移是微生物世界中一种普遍的现象一个细菌品系通过吸收
而发生了遗传性状嘚改变,这种现象叫做转化获得了外源
在基因克隆技术中,所谓转化是指质粒或重组质粒被导入受体细胞表达相应的选择
并在一定的培养条件下,
在选择性培养基上长出转化子的过程
化进入细菌细胞内,才能进行扩增和表达从而获得大量的克隆基因
转化效率的高低與受体菌的生理状态有
的能力最高时的状态被称为感受态细胞(
类的细菌在其生长的任一阶段都处于感受态,
而另一些细菌只有处于某个苼长时期时
如本实验所用的大肠杆菌
理对数生长早中期的细菌可以大大提高细菌吸收周围环境中的
能使细菌细胞壁的通透性增强,从而提高转化率这种转化方法称为
“化学法”。目前还可以使用电激的方法通过瞬间的高压电流,
电激转化的效率往往比化学法高出
所鉯常用于文库构建时的转
微生物转化是基因工程的常用技术,大肠杆菌是基因工程中最常用的受体菌本实验
即是用前面实验获得的重组質粒转化大肠杆菌细胞。
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