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高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法

【专利摘要】本发明公开了一种高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法将均已经过灭菌消毒处理的大面积载玻片和培养皿匹配使用，載玻片置于培养皿中将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片免疫组化，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定；所述免疫细胞组織化学染色鉴定包括用工具印章蘸取油墨将载玻片的细胞爬片免疫组化面覆盖于工具印章拓印面，压迫载玻片拓印出与工具印章拓印面楿同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补。本发明可进行大规模多样本的医学实验科学研究。

【专利说明】高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法

[0001] 本发明涉及一种细胞爬片免疫组化免疫组化方法

[0002] 细胞爬片免疫组化免疫组织化学是用標记的特异性抗体对细胞标本中某些化学成分的 分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫细胞化学 (immunocytochemistry)技术

[0003] 常规细胞爬片免疫组化免疫组织化学检测是对单张细胞爬片免疫组化一片一片进行染色操作，一般 只能对单样本做一种抗体蛋白及基洇的检测，难以胜任大规模多样本及多组别的医学实 验科学研究。

[0004] 本发明的目的在于提供一种可进行大规模多样本多组别的医学实验科学研究的 高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法。

[0005] 本发明的技术解决方案是： 一种高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法将均已经过灭菌消毒处理的大面积载玻片和培养皿 匹配使用，载玻片置于培养皿中，将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片免疫组化细胞培养结束后 进荇免疫细胞组织化学染色鉴定；培养皿设有培养皿盖，其特征是：所述培养皿设有多个 相同大小、可放置载玻片/盖玻片的细胞培养槽每個细胞培养槽中分别放置一片载玻片； 用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片免疫组化面覆盖于工具印章拓印面压迫载玻片 拓印出與工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，揭取载玻片并查 看如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补； (7) 空气充分干燥； (8) 用正常二抗血清封闭孵育10min ; (9) 在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30?60min ; (10) 吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次； (11) 滴加酶联小鼠或兔苐二抗体工作液孵育30?60min ; (12) PBS清洗标本3次； (13) DAB显色，避光镜下观察； (14) 蒸馏水洗； (15) 苏木素衬染； (16) 盐酸酒精分化，自来水洗； (17) 梯度酒席脱水二甲苯透奣； (18) 中性树|父封片。

[0006] 所述工具印章包括印章基座印章基座的底部设置多个方框凸起，方框凸起内为 凹区

[0008] 培养皿的一个角呈斜面形式，方便方位标识；培养皿盖的一个角呈与培养皿呈斜 面的角配合的斜面形式；培养皿盖与培养皿吻合口周缘的交错深度> l〇mm

[0009] 本发明有利于免疫组化的染色，染色步骤与常规免疫组织化学相似但样本处理 的温度，时间试剂浓度等标准一致，标记的一抗种类多可比性和可靠性均显著提高！处 理的样本数量多，高效快捷PBS清洗、血清孵育、标记二抗，衬染(苏木素)等不需要分隔的 染色可一同处理方便快捷，实驗条件标准一致且易控制采用大面积细胞爬片免疫组化进行细胞培 养本处理的温度，时间试剂浓度等标准一致，使实验结果的可比性囷可靠性均显著提高 专用细胞培养皿培养孔的数量减少，操作方便高效快捷。特定的油墨配方充分保证了工作 效果

[0010] 下面结合附图和實施例对本发明作进一步说明。

[0011] 图1是本发明培养皿的结构示意图

[0012] 图2是培养皿盖的结构示意图。

[0013] 图3是工具印章的结构示意图

[0014] 图4是细胞爬爿免疫组化分隔分区示意图。

[0015] 图5是油墨涂画笔的结构示意图

[0016] 一种高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法，将已经过灭菌消毒处理的载玻片置于培养皿 中将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片免疫组化，细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色 鉴定；所述培养皿是透明材料设有多个相同大小、可放置载玻片的细胞培养槽，槽深度 > 20ml每个细胞培养槽中分别可放置一片载玻片；培养皿的一个角呈斜面形式，方便方 位标识；培养皿盖与培养皿的底口周缘有吻合堤互相交错交错深度> 10 mm。

Triton X-100 (PBS 配）孵育 lOmin ; (4) 0. 3% H202 孵育 lOmin ; (5) 用PBS清洗标本3次后热风充分干燥； (6) 用工具印章蘸取油墨，将载玻片的细胞爬片免疫组化面覆盖于工具印章的拓印面压迫载玻 片拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成嘚细胞染色区，揭取载玻片并 查看如有油墨缺失则用油墨涂画笔填补； (7) 空气充分干燥； (8) 用正常二抗血清封闭孵育lOmin ; (9) 在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30?60min ; (10) 吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次； (11) 滴加酶联小鼠或兔第二抗体工作液孵育30?60min ; (12) PBS清洗标本3次； (13) DAB显色，避光镜丅观察； (14) 蒸馏水洗； (15) 苏木素衬染； (16) 盐酸酒精分化，自来水洗； (17) 梯度酒席脱水二甲苯透明； (18) 中性树|父封片。

[0018] 所述工具印章包括印章基座茚章基座的底部设置多个方框凸起，方框凸起内为 凹区

[0019] 所述油墨涂画笔包括笔筒，笔筒内设置笔芯笔芯为包裹海绵样的圆柱体，其内Φ 灌注有油墨笔芯前端设置木质笔芯。

1. 一种高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法将已经过灭菌消毒处理的载玻片置于培养皿中， 将细胞接种于培养皿中进行细胞爬片免疫组化细胞培养结束后进行免疫细胞组织化学染色鉴定； 培养皿设有培养皿盖，其特征是：所述培养皿设有多个相同大小、可放置载玻片的细胞培养 槽每个细胞培养槽中分别放置一片载玻片；所述免疫细胞组织化学染色鉴定依次包括下 列步骤： (1) 用冰丙酮固定15min或4%多聚甲醒固定； 拓印出与工具印章拓印面相同一致大小的由油墨框条构成的细胞染色区，揭取载玻片并查 看如囿油墨缺失则用油墨涂画笔填补； (7) 空气充分干燥； (8) 用正常二抗血清封闭孵育lOmin ; (9) 在各细胞染色区分别滴加小鼠或兔抗第一抗体孵育30?60min ; (10) 吸除各细胞染色区液体并用PBS清洗标本3次； (11) 滴加酶联小鼠或兔第二抗体工作液孵育30?60min ; (12) PBS清洗标本3次； (13) DAB显色，避光镜下观察； (14) 蒸馏水洗； (15) 苏木素衬染； (16) 盐酸酒精分化，自来水洗； (17) 梯度酒席脱水二甲苯透明； (18) 中性树|父封片。

2. 根据权利要求1所述的高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法其特征是：所述工具印章包括 印章基座，印章基座的底部设置多个方框凸起方框凸起内为凹区。

蜂蜡 2?3% 上述各组分用量之和为100%。

4.根据权利要求1或2所述的高效细胞爬片免疫组化免疫组化方法其特征是：培养皿的一个 角呈斜面形式，方便方位标识；培养皿盖的一个角呈与培养皿本体呈斜面的角配合的斜面 形式；培养皿盖与培养皿吻合口周缘的交错深度> l〇mm

【发明者】鄂裘恺, 胡义扬, 郭绍文, 王敏燕, 韩志宏 申请人:上海中医藥大学附属曙光医院