免疫共沉淀试剂盒生产许可absin有生产吗

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2020-06-13 14:04 标签： 试剂盒生产许可

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免疫共沉淀Co-IP是研究蛋白间相互作用的经典方法，其以抗體和抗原间的专一性作用为基础通过偶联beads的Protein A/G与A蛋白及抗体复合物结合，进而将潜在的与A蛋白互作的B蛋白也沉淀下来一般后续再对拿到嘚免疫复合物进行WB分析验证。
免疫共沉淀Co-IP本身的操作流程并不复杂麻烦的是相关的操作步骤需要根据实验实际情况进行优化。辛辛苦苦忙活了好一阵子你拿到的Co-IP结果很可能是这样的。
免疫共沉淀Co-IP的高背景和抗体污染（IgG交叉反应）问题相当令人头疼以下是小爱整理给到您的优化建议：

1）针对非特异性作用的高背景

细胞裂解物中存在大量蛋白质，可能会在操作过程中发生与目标复合物的非特异性结合这些非特异性相互作用一般通过彻底清洗beads结合的免疫复合物来清除，但也可以应用其他策略来优化非特异性结合例如：

▲ 通过将盐浓度从120mM滴定至1000mM来改变缓冲液的离子强度；

▲ 减少一抗的使用量，直到信号干扰比最大化；

▲ 参考我们推荐的操作步骤进行细胞裂解物预清除。

2）针对抗体污染（IgG交叉反应）

免疫共沉淀Co-IP抗体污染问题是在WB分析中来自IP抗体IgG条带的干扰（IP抗体与WB抗体同源时发生）IgG的轻重链在25kD和50kD左右，並且在SDS-PAGE中可能会有

▲ IP和WB采用不同来源抗体IP为鼠源则WB可以选用兔抗；

▲ 采用特异性识别IgG轻链或者重链的二抗，如目的蛋白与IgG轻链接近、则鈳采用重链二抗；

▲ 运用交联剂将IP抗体和Protein A/G -Beads交联通过添加不含巯基乙醇的加样缓冲液处理目的蛋白-抗体- Protein A/G-beads复合物，最后离心去除复合物上清中只留下目的蛋白；

▲ WB分析前，可以考虑采用低pH洗脱来代替煮沸低pH值（2-3）可以降低抗原/抗体相互作用、从而将抗原和抗体分离（如1M甘氨酸缓冲液，pH 2-3）注意电泳前需平衡pH；

▲ 将常用的融合标签（如GFP）掺入用于Co-IP主要靶蛋白中，选用优质特异性的抗融合标签抗体有需要时還可将该抗体预固定以用于蛋白复合物纯化。
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