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入攀骥瑟宠矮平细瞧分离培莠鉴怒及抑铡异基因淋巴细胞增戆的实验研究 中文攮要 人羊膜间充质于细胞分离培养鉴定及抑制异基因淋巴细 胞增殖的实验研究 中文摘要 研究曩的： l、体外分离培养、纯化并鉴定人羊膜闻充质干细胞(hAMSCs) 2、研究kAMSCs对异基因混合淋巴纲胞反应(M媛)体系中淋巴缨胞增赡及相 关细胞因子的影響。 磅究方法： l、采用酶消化法放羊膜分离漱hAMSCs进行传代培养、逐步纯纯，流式细胞 仪检测维胞表面标志并通过条件培养基定向诱导，朂后根据形态学、生物学特征、 细胞表面标志以及分化潜能鉴定hAMSCs纯度 2、建立双淘MLR体系，加入丝裂霉素处理过的不嗣比例的hAMSCs用礓掺 入法測定淋巴细胞增殖率并用ELISA法测定混合培养上清液中自细胞介素．2(102) 研究结果： l、觚羊膜中分离的细胞接种24小时焉使有少量的细胞然壁，经l周後逐渐形成 扁平单层细胞璺漩涡状生长或成簇生长，随着细脆密度的增加胞体变得细长，形 态类似成纤维细胞培养的细胞可以稳定苼长传代，丽且体磐培养10代以蜃细胞 的增殖速度无明显减慢。 2、hAMSCs的原代缁脆在接种蜃2～8天后进入对数生长期相差显微镜下观察 细胞突起向周围伸展，出现两个核细胞分裂相的hAMSCs多见细胞密度增大，彼 此相连；11-14天进入平台期hAMSCs铺满瓶底，细胞扩增趋缓原代培养结束。 增速度基本稳定传代詹以12小时，相差显微镜下即可观察到细胞贴壁；2q天后 进入到对数生长期扩增速度明显快于原代培养；6~7天即可铺满培養板底。 人羊膜问充质干细胞分离培养鉴定及抑制异基因淋巴细胞增殖的实验研究 中文摘要 4、hAMSCs向神经细胞诱导24h后细胞形态明显改变，胞體回缩胞核部分 折光性增强，出现类似于树突及轴突样结构染色可见兔抗人神经元特异性烯醇化酶 细胞形态由纺锤形转变为多角形，染色可见I型胶原阳性；3"-'4周后可见钙结节形成 均明显强于1：500组(尸均<0．05)。 于单纯MLR体系(PBMCl+PBMC2组)中的量(尸<O．05) 研究结论： 以及多向分化潜能。 2、hAMSCs可以抑制MLR体系中淋巴细胞的增殖呈剂量依赖性；并可下调 MLR体系中IL．2和IFNq水平，对同种异体免疫反应具有负调节作用为日后临床 联合应用MSCs和造血干细胞移植以预防和治疗移植物抗宿主病(GVHD)提供理论 基础。 关键词： 羊膜：间充质干细胞；体外扩增；免疫抑制；异基因；淋巴细胞；白細胞介素．2； 干扰素吖 作 者孙鸿丽 指导老师吴德沛

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