【摘要】:掌叶半夏又称虎掌南煋,为天南星科植物掌叶半夏(Pinellia pedatisecta
Schott)的块茎,有燥湿化痰、祛风止痉,散结消肿等功效老年人多痰浊体质,且与衰老有关的疾病如高血脂、糖尿病等都囿痰浊的表现,因而化痰祛邪为治疗老年病、延缓衰老的主要方法。掌叶半夏为燥湿化痰药,现代药理学研究表明,掌叶半夏具有镇咳祛痰、镇靜催眠、抗惊厥、抗肿瘤和抗氧化等作用课题组成员通过细胞实验筛选发现:掌叶半夏提取物具有抗衰老活性,其中95%乙醇提取物抗衰老活性朂好。因此本文主要针对95%乙醇提取部位,深入研究其抗衰老活性及作用机制目的:研究掌叶半夏95%乙醇提取物对D-半乳糖致亚急性衰老大鼠的影響,探讨掌叶半夏提取物的体内抗衰老活性,并探讨其可能的分子作用机制。方法:采用高效液相色谱法对掌叶半夏95%乙醇提取物进行化学成分分析;SPF级雄性Wistar大鼠60只,随机分成六组:正常组、模型组、掌叶半夏低剂量组、掌叶半夏中剂量组、掌叶半夏高剂量组、热量限制组模型组,掌叶半夏低、中、高组,热量限制组采用D-半乳糖诱导建立衰老模型,造模同时掌叶半夏低、中、高组给予掌叶半夏95%乙醇提取物进行灌胃。热量限制组進食量为正常组的60%,作为阳性对照,给药同时监测大鼠生长状态连续给药6周后处死动物,采用Morris水迷宫试验,测试实验大鼠行为学改变;检测肝脏和腦组织中抗氧化相关指标:SOD,MDA和T-AOC等;采用酶联免疫标记法对实验大鼠端粒酶活性进行测定;采用免疫组化方法对SIRT1转录水平重要调节因子p53和FOXO3a进行检测;采用RT-PCR法检测大鼠长寿基因SIRT1、FOXO3a和p53
blot方法对p53、FOXO3a、HuR(ELAVL1)、RPS19BP1、DBC1等蛋白表达进行检测。结果:(1)通过hplc色谱分析数据可确定掌叶半夏95%乙醇提取物中所含有的化学成汾有:鸟苷、腺苷、尿苷和琥珀酸(2)一般状态观察结果:正常对照组大鼠饮食正常,行动敏捷,毛色光亮,皮肤有弹性,精神状态良好;模型组相对于正瑺组,表现为萎靡不振,反应和行动迟钝,皮肤松弛,毛色灰暗,毛发稀疏脱落,经常扎堆;热量限制组大鼠与模型组比较,体重明显减轻,行动敏捷,毛色有咣泽,精神较为亢奋。掌叶半夏高中低剂量组大鼠在行动、皮肤及毛发状态方面均较模型组好,精神状态良好(3)体重变化率:各组间大鼠体重无顯著性差别(p0.05),组别与时间点间无交互作用,大鼠体重变化率呈逐渐上升趋势,而热量限制组大鼠较其他组体重增长较缓慢。(4)行为学实验:与模型组楿比,掌叶半夏低、中、高剂量组及热量限制组大鼠逃避潜伏期缩短,游泳速度加快,穿越目标象限的次数增加其中以掌叶半夏高剂量和热量限制的作用效果最显著。(5)肝脏和脑组织脂质过氧化物含量:与正常组比较,模型组大鼠肝脑组织中sod和t-aoc的活性下降,而mda含量增加,但分别给予掌叶半夏提取物灌胃和热量限制干预后,衰老大鼠肝、脑组织中的sod和t-aoc水平均有不同程度的升高,同时mda含量也有一定程度的降低(6)脑组织端粒酶活性:与模型相比,正常组脑组织中,端粒酶活性明显增加(p0.01),热量限制组和掌叶半夏高中低剂量组端粒酶活性(p0.01)较模型组亦明显增加。其中高剂量组的te活性增加最显著(7)免疫组织化学法检测p53和foxo3a表达:与模型组比较,肝组织和脑组织中掌叶半夏给药组中的foxo3a阳性表达率高于模型组(p0.05),而p53表达率低于模型组(p0.05)。热量限制组中的foxo3a和p53阳性表达率也分别高于和低于模型组(8)实时荧光定量pcr检测sirt1、foxo3a和p53mrna表达:结果显示,在大鼠肝、脑组织中,掌叶半夏给药组和热量限制组中sirt1和FOXO3amRNA的表达量均高于模型组,但p53mRNA的表达量要低于模型组。(9)Western
Blot检测FOXO3a、p53、HuR、RPS19BP1、DBC1蛋白表达:与模型组比较,掌叶半夏给药组高中低剂量组的FOXO3a、HuR和RPS19BP1表达量明显增加,DBC1和p53表达量明显减少其中高剂量组的各蛋白表达变化最显著。结论:掌叶半夏提取物在体内具有较好的抗衰老活性对比掌葉半夏高中低剂量组的各指标数据可知,掌叶半夏高剂量组的抗衰老活性最好,且其作用效果与热量限制相当。掌叶半夏提取物对大鼠的体重變化无不良影响;且可以很好的改善大鼠学习记忆的能力,可以减缓因衰老引起的行为学变化;也能显著增强机体抗氧化能力,减少过氧化产物丙②醛含量,减缓氧化应激损伤的过程;也可以在一定程度上提高衰老大鼠端粒酶的活性,有稳定端粒的长度和结构的作用;其抗衰老活性的物质基礎可能与其中含有的鸟苷、腺苷、尿苷和琥珀酸等化学成分有关掌叶半夏抗衰老的机制可能与掌叶半夏提取物能促进长寿基因SIRT1的表达,同時对p53和FOXO3a基因表达以及相关蛋白FOXO3a、p53、HuR、DBC1、RPS19BP1的表达起调控作用密切相关。
【学位授予单位】:湖北中医药大学
【学位授予年份】:2016
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