质粒dna提取试剂盒分子上有一个至多个限制酶切位点的作用？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-04-10 11:48 标签： 质粒dna

设想用Hind III切开再把突出的粘性末端削掉，质粒回连就消除掉了这个位点
查了S1核酸酶的说明书，不理解下面的步骤使用例：

DNA单链部分的特异性分解

4. 加入40 μl（等量）的苯酚/氯仿/异戊醇（25 ：24 ：1）充分混匀。


5. 离心取上层（水层）移至另一微量离心管中。
6. 加入40 μl（等量）的氯仿/异戊醇（24 ：1）充分混匀。
7. 离心取上层（水层）移至另一微量离心管中。
9. 加入100 μl（2.5倍量）的冷无水乙醇-20℃放置30～60分钟。
10. 离心回收沉淀用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空幹燥

第二部分中的步骤是不是可以用酒精沉淀的方法代替？

既然S1核酸酶可以消除掉单链为什么后面还要用T4DNA聚合酶修复？

有没有更好的酶或者方法

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（1）由图可知质粒是环状的，切割前没有游离的磷酸基团质粒中有一个SmaⅠ酶切割位点，所以切割后有两个游离的磷酸基团．

（2）DNA分子中C与G之间有三个氢键A与T之间有兩个氢键，所以C与G含量越多热稳定性越高，由图可知SmaⅠ酶切位点的配对方式是C与G配对．

（3）由图可知，目的基因和标记基因中都有SmaⅠ酶切割序列如用SmaⅠ酶会破坏目的基因和标记基因．

（4）如只使用EcoRⅠ酶切割，会形成相同的黏性末端可能出现质粒和含目的基因的外源DNA爿段自身环化．

（5）DNA连接酶可将目的基因与质粒连接起来形成重组DNA．

（6）重组质粒中抗生素抗性基因是标记基因，作用是为了鉴别和筛选含有目的基因的细胞．

（7）大肠杆菌丧失吸收蔗糖能力导入蔗糖转运蛋白基因后可恢复吸收蔗糖能力，所以在以蔗糖为唯一含碳营养物質的培养基中培养可筛选出需要的表达成功的大肠杆菌．

（8）制备cDNA探针时，需提取、分离mRNA作用为模板在逆转录酶的催化下合成cDNA探针．

（9）基因工程中，切割含有目的基因的DNA片段和载体时用同种限制酶．并用显微注射法导入受精卵中再利用SRY探针 （Y染色体上的性别决定基洇）进行检测，将检测反应呈阴性的胚胎进行移植培养．

（3）SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因、外源DNA中的目的基因

（4）质粒和含目的基因的外源DNA爿段自身环化

（6）鉴别和筛选含有目的基因的细胞

（7）蔗糖为唯一含碳营养物质

（9）同种限制酶 显微注射 受精卵 阴性

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