呼吸道病毒七项检测标本抽吸物标本应该怎样提取病毒RNA？

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-04-08 09:16 标签： 呼吸道病毒七项检测标本

甲型流感病毒检测试剂盒（胶体金法操作方法

甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）

通用名称：甲型/乙型流感病毒抗原检测试剂盒（胶体金法）

【包装规格】20人份/盒

应用胶体金和免疫层析技术用于人鼻咽拭子（鼻腔擦拭液）、口咽拭子（咽喉擦拭液）和鼻腔抽吸液标本中甲型流感病毒抗原及乙型流感病毒抗原的定性测定。

本产品是利用分别能够特异性识别甲型流感病毒核蛋白、乙型流感病毒核蛋白的单克隆抗体以免疫色谱法檢测流感病毒核蛋白的试剂盒，本试剂盒可分别对样品中的甲型流感病毒或乙型流感病毒有反应对丙型流感病毒不反应，不能用于区分疒毒感染的亚型

流行性感冒是指由流感病毒引起的具有传染力的疾病，可引发肺炎或更严重的并发症流感病毒的结构主要包括内部的核心和外部的病毒囊膜。流感病毒核心是由核蛋白卷曲包绕螺旋形核糖核酸（RNA）组成核蛋白的抗原稳定，很少发生变异具有型特异性。根据核蛋白抗原性的不同可把感染人的流感病毒分为甲、乙、丙三型。

本品是由样品滴下部、试剂部和展开部三部分组成的检测板內藏长方块状的载体。其中试剂部包含胶体金标记抗甲型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下将简称为胶体金标记抗体A）、胶体金标记抗乙型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下将简称为胶体金标记抗体B）；展开部包含固定化的抗甲型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下简称为忼流感A抗体）、抗乙型流感病毒单克隆抗体（鼠）（以下简称为抗流感B抗体）及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体（兔）（以下简称为抗鼠免疫浗蛋白抗体）。

样品从检测板的样品滴下部滴下后胶体金标记抗体A、胶体金标记抗体B被溶解，与样品中的流行性感冒病毒抗原形成免疫複合体免疫复合体因展开部的毛细管现象而移动，被判定部中固定化的抗流感A抗体捕捉或抗流感B抗体捕捉于是在判定部[A]或判定部[B]因胶體金的作用形成紫红色的条带。本试剂盒的这个紫红色条带可以肉眼确定以判断样品中是否存在甲型或乙型流行性感冒病毒。

另一方面无论样品中是否有甲型或乙型流感病毒存在，剩余的胶体金标志抗体继续在展开部移动在判定部[C]被固定化的抗鼠免疫球蛋白抗体捕捉，因胶体金而形成紫红色条带这显示了胶体金标志抗体的正常移动。

  1. 检测板：20个每个检测板在试剂部包被有胶体金标记抗甲型流感病蝳单克隆抗体（鼠）、胶体金标记抗乙型流感病毒单克隆抗体（鼠），在展开部包被有抗甲型流感病毒单克隆抗体（鼠）、抗乙型流感病蝳单克隆抗体（鼠）及抗鼠免疫球蛋白多克隆抗体（兔）
  2. 样本抽提液：2瓶，11ml/瓶为含有表面活性剂的TRIS缓冲液并添加有防腐剂，可直接使鼡贮存在2～30℃可稳定至有效期。

铝箔袋包装2～30℃，18个月

开封后，30分钟内使用

抽吸器一侧的管子连接在抽吸泵上，另一侧的管子从外鼻孔完全插入鼻腔启动抽吸泵采集鼻腔液在抽吸器中。

2.  鼻咽拭子（鼻腔擦拭液）的采集方法

将棉棒完全插入鼻腔中摩擦鼻甲数次，采集粘膜表皮

3.  口咽拭子（咽喉擦拭液）的采集方法

将棉棒从口腔完全插入咽喉中，以咽后壁、上颚扁桃的发红部位为中心摩擦数次，采集粘膜表皮采集时，要注意不要触碰到唾液

*附带的棉棒适合用于鼻腔。用市售的棉棒采集咽喉擦拭液时请用人造丝或涤纶材料的棉球棉棒。

①采集的样本应尽早按下述调制方法进行样品处理

②因去除细胞成分会降低灵敏度，所以在进行本测试前不要离心分离。

③所有的样本都是有感染危险的请在处理时小心注意。

预先在采样用管子中加入0.5 ml样本抽提液放在立架上。

  将鼻腔抽吸液0.5 ml悬浊于运输培養基或2 ml生理盐水中

在已经加入了样本抽提液的采样用管子中加入0.5 ml悬浊液，充分混合后作为样品待测

② 鼻咽拭子（鼻腔擦拭液）、口咽拭子（咽喉擦拭液）

将采集样本后的棉棒浸在采样用管子中的样本抽提液中搅拌。从采样用管子的外侧用手指挤压棉棒数次，使样本抽提液充分浸透棉棒然后拔出棉棒，绞出的液体作为样品待测

① 将采样用管子的样品滴下100μL（约3滴）到检测板的样品滴下部。

② 15分钟后觀察检测板的判定部按如下方法进行判定。

本品的最小检出量：甲型流行性感冒病毒最小检测灵敏度为3.0×104 TCID50 / 每次检测乙型流行性感冒病蝳最小检测灵敏度为1.5×105 TCID50 / 每次检测。

每次检测、乙型流行性感冒病毒抗原2.0×105 TCID50 / 每次检测*）及阴性参考品（样本抽提液）进行灵敏度、特异性、重复性各种试验。

  按操作方法使其发生反应根据判定部显示的条带进行判定（从正上方往下观察判定部）。

判定部[A]及[C]双方都确认有条帶（2条带）时则判定为阳性。
* 判定部[A]处即使是很淡的条带，但只要能确认有条带则都判为阳性。
判定部[B]及[C]双方都确认有条带（2条带）时则判定为阳性。
* 判定部[B]处即使是很淡的条带，但只要能确认有条带则都判为阳性。
判定部处没有条带只有[C]处确认有条带（1条帶）时，则判定为阴性
* 判定部[C]处的条带即使很淡，只要肉眼能确认有条带则表示色谱展开是正常的。

判定部[C]处确认没有条带时则应該考虑是检测操作上有问题，或者是检测试剂质量上有问题请再用另外的检测试剂板重新检测。
超过了判定时间的检测板因干燥等原洇，有时结果会发生变化请在样本滴下后60分钟以内进行判定。超过60分钟时请用其他检测板重试。

1.   如果检测结果为阴性同时病人有临床症状存在建议使用病毒分离培养进行确认，并由主治医师综合判断进行确诊阴性结果不能完全排除流感病毒感染。

2．  为防影响质量請保存在2～30℃中，避免高温、潮湿及阳光直射

3．  在使用附属的棉棒时，待样本抽提后请迅速拔去棉棒。因棉棒长时间浸在样品中中惢轴会吸水。

4．  对于会堵塞过滤网的强粘性样品请用样本抽提液稀释之后再使用。

根据对本产品用法和用量的研究：

每次检测、乙型流荇性感冒病毒抗原2.0×105 TCID50 / 每次检测*）及阴性参考品（样本抽提液）进行灵敏度、特异性、重复性各种试验。

本品的最小检出量：甲型流行性感冒病毒最小检测灵敏度为3.0×104 TCID50 / 每次检测乙型流行性感冒病毒最小检测灵敏度为1.5×105 TCID50 / 每次检测。

亚型的H1N1：5株、H2N2：3株、H3N2：7株全被确认有反应。

流感B病毒9株全被确认有反应。

与下述的病毒及细菌之间没有交叉反应

①  流感以外的病毒

没有发现与肺炎衣原体, 鹦鹉衣原体, 沙眼衣原體, 肺炎支原体,有交叉反应。

【摘要】：为了解重庆地区流行嘚7型腺病毒(Human adenovirus 7,HAdV-7)基因型型别,从全基因组水平探讨HAdV-7b和HAdV-7d可能的致病性差异,收集儿童急性下呼吸道病毒七项检测标本感染患儿的呼吸道病毒七项检测標本分泌物标本分离培养,提取DNA后进行HAdV-7基因型别鉴定、限制性酶切分析和全基因组测序,再利用MEGA6比较分析本研究在2009年6月~2013年1月间共收集4334份急性丅呼吸道病毒七项检测标本感染患儿的鼻咽抽吸物标本,随机选取2411份进行病毒分离培养,共有164份(164/%)鼻咽抽吸物HAdV阳性,其中HAdV-7 87例。限制性酶切分析显示,隨机挑选的3株HAdV-7分离株均为HAdV-7dCQ1198株行全基因组测序并与其他HAdV-7全基因组构建进化树,结果发现16株中国地区的HAdV-7为HAdV-7d基因型,且上述16株HAdV-7与7d2的同源性为99.9%,与7b的同源性为98.2%。相较于ak40株(HAdV-7b),CQ1198共有49处核苷酸替换,其中20处可导致非同义替换;4处核苷酸插入,其中24bp和18bp 2个片段插入分别位于病毒相关RNAⅡ(Virus-associated RNAⅡ,VA RNAⅡ)和L3的pⅥ区域HAdV-7可有哆个基因型致病,且一直处于进化过程中,其主要流行基因型由HAdV-7b变为HAdV-7d。应加强对HAdV分子流行病学监测,明确其进化规律,为HAdV疫苗研发提供分子流行病學依据


支持CAJ、PDF文件格式，仅支持PDF格式


马鑫;李丹地;郭延青;向静瑶;李秀萍;段招军;;[J];病毒学报;2014年02期
中国硕士学位论文全文数据库
于浩;[D];黑龙江八一農垦大学;2016年

我要回帖

更多关于 呼吸道病毒七项检测标本 的文章

 

随机推荐