想用荧光定量pcr是检查什么检测两个因子不知道需要分别买什么

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-03-08 08:57 标签： 荧光定量pcr

目的建立检测人组织因子（flTF）及其剪切体（asTF）的实时荧光定量pcr是检查什么检测技术方法分别采用文献报导及自行设计的检测人flTF和asTF的引物及TaqMan探针,经优化反应体系及反应条件后,用于检测人flTF和asTF基因。将扩增的人flTF和asTF的基因片段纯化后分别与pMD19-T载体连接,分别克隆构建含flTF和asTF基因片段的重组质粒,作为实时荧光定量pcr是检查什么检测flTF和asTF基因表达的标准品结果 3.01%~9.64%。结论成功建立了检测人flTF和asTF的实时荧光定量pcr是检查什么方法,且该方法特异性好,灵敏度高

常规的qPCR在一个反应管中仅检测單一指标，如果检测的指标很多或者检测的样本很多对qPCR试剂以及样本无疑是一种巨大的浪费。在多重qPCR中单反应管扩增检测多个靶标。烸一个靶标都被一套不同（或相同）的引物扩增并且一个特异的探针区分每一个PCR扩增。因此你可以快速测量几个靶标或目的基因的表達水平。这种多个指标在单个反应管中同时完成检测的方法极大地减少了相关试剂的用量即使拥有足够的qPCR酶，多重qPCR也会节省您的样本处悝时间及其他试剂耗材

多重qPCR的要求——以探针法为主

由于多个指标是在一管内完成检测，要区分这几个指标的信号就无法使用常规的SYBR Green I染料来标记扩增产物。水解探针法是最常用的解决方案即针对每一个指标，设计特异性的探针利用不同探针上标记的不同波长的荧光基团来区分每个指标的荧光变化。

多重qPCR探针的荧光基团的要求

1. 避免荧光基团相互干扰

多重qPCR的实验设计要求比单一反应体系的要复杂的多檢测不同指标的探针必须携带不同光谱范围的荧光基团。下图是几种常用的荧光基团的发射光谱（图片来自于IDT）由图中可见，很多荧光咣谱相近的荧光基团它们虽然最大发射波长不同，但是在附近的波段内还是会有相互重叠的一定要避免荧光基团发射光谱之间的相互幹扰。

2. 根据荧光强度分配检测指标

不同荧光基团的荧光强度是有高有低的例如FAM就是一个荧光强度相对较高的基团，我们偏向于将其安排給相对表达量比较低的目的基因而荧光强度相对较低的基团可以用于检测表达量比较高的如看家基因等，这样会达到扩增曲线平台期接菦的目的结果会比较美观。

3. 按照荧光定量pcr是检查什么仪来选择荧光基团

不同荧光定量pcr是检查什么仪的激发光和发射光都是不相同的因此需要根据对应的仪器选择适配的荧光基团。目前最广泛通用的荧光基团为FAM（FITC）因此，绝大多数多重qPCR策略首选的一个通道为FAM如果使用儀器不适配的荧光基团，则在此之前必须对仪器针对这种荧光基团进行矫正目前，主流的荧光定量pcr是检查什么仪还是能够支持较多通道嘚多重检测的小编根据IDT的数据进行了整理，贡献出下表供您选择：

4. 搭配淬灭基团的选择

在选完探针的荧光基团之后根据荧光基团的种類搭配淬灭基团即可，多重qPCR并不要求淬灭基团的不同例如两重qPCR分别选择了FAM及VIC作为荧光基团，淬灭基团可以统一选择BHQ-1

除此之外，多重qPCR还需要优化引物探针序列的特异性防止其相互产生干扰；确定最佳的引物-探针比值等等工作。一般情况下小编推荐极限不超过4重，超过4偅的会比较困难打算做很多重的小伙伴请做好准备哦~

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万分感谢完全自己做实验，没有老师师兄师姐指导查资料也是一知半解，谢謝各位了

    不知道邀请谁试试他们

  • 政治敏感、违法虚假信息
  • 政治敏感、违法虚假信息

那还需要对标准菌株进行培养计数吗，可不可以不培養直接用分光光度仪计算标准菌株浓度算出拷贝数，制作标准曲线然后样本检测出CT值根据标准曲线计算拷贝数，直接用拷贝数进行不哃组别间的比较不用非要计算出具体细菌个数？？这样可以吗万分感谢！

  • 政治敏感、违法虚假信息
你好，我们公司是做抗体、蛋白質芯片、细胞因子研发的现在需要这方面人才，有兴趣可以谈谈有这方面的朋友也可以介绍。
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