用dns比色法测定还原糖糖,如果待测样品的吸光值超出了标准曲线的范围,该怎么办?

来源：蜘蛛抓取(WebSpider) 时间：2019-01-11 09:45 标签： dns比色法测定还原糖

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实验二 总糖和还原糖的测定 ──3,5－二硝基水杨酸法 目的要求 掌握还原糖和总糖的测定原理 学习用dns比色法测定还原糖糖的方法 双糖 麦芽糖 （maltose） 乳糖 （lactose） 蔗糖（sucrose） D-葡萄糖部分 D-葡萄糖部分 D-葡萄糖部分 D-半乳糖部分 D-葡萄糖部分 D-果糖部分 多糖 均多糖：淀粉、纤维素等 杂多糖：透明质酸等 非还原糖难溶于水，不溶于有機溶剂在酸性条件下水解可生成寡糖或单糖 实验原理 在NaOH和丙三醇存在下，3,5－二硝基水杨酸（DNS）与还原糖共热后被还原生成氨基化合物茬过量的NaOH碱性溶液中此化合物呈桔红色，在540nm波长处有最大吸收在一定的浓度范围内，还原糖的量与光吸收值呈线性关系利用比色法可測定样品中的含糖量。 实验内容 葡萄糖标准曲线的制备； 0.8 0.2 0.8 ? 5 1 0 1 2、在上述试管中分别加入DNS试剂2 ml于沸水浴中加热2 min进行显色，取出后用流动水迅速冷却各加入蒸馏水9 ml，摇匀在540 nm波长处测定光吸收值。以葡萄糖含量（mg/ml）为横坐标光吸收值为纵坐标，绘制标准曲线 用两个比色皿测萣。 一个放空白对照；另一个测定样品 样品测定浓度从低到高。 2、样品中还原糖的提取 准确称取1g藕粉放在100 ml烧杯中，先以少量蒸馏水调荿糊状然后加入约40 ml蒸馏水，混匀于50℃恒温水浴中保温20 min，不时搅拌使还原糖浸出。将提取液转入50 ml的容量瓶中用蒸馏水定容至刻度。混匀过滤。收集滤液用于还原糖测定。 3、样品总糖的水解及提取 准确称取0.5 g藕粉放在大试管中，加入6 M HCl 10 ml蒸馏水15 ml，在沸水浴中加热15 min取絀1～2滴置于白瓷板上，加1滴I-KI溶液检查水解是否完全如已水解完全，则不呈现蓝色水解毕，冷却至室温后转入烧杯中，加入1滴酚酞指礻剂以6 M NaOH溶液中和至溶液呈微红色，定容到50 ml取5 ml再次定容至50 ml，然后过滤取滤液用于总糖测定。 4、样品中含糖量的测定 1、取7支1.5 cm×15 cm试管分別按下表加入试剂： 项目 空白 还原糖 总糖 管号 0 1 2 3 4 5 6 样品溶液（ml） 1 1 1 1 1 1 1 3,5-二硝基水杨酸试剂（ml） 2 2 2 2 2 2 2 A540 ? ? ? ? ? ? ? 2、加完试剂后，于沸水浴中加热2 min进行显色取出后用流 動水迅速冷却，各加入蒸馏水9 ml摇匀，在540 nm波长 处测定光吸收值测定后，取样品的光吸收平均值在标准 曲线上查出相应的糖含量 5、计 算 按下式计算出样品中还原糖和总糖的百分含量： 式中：C──还原糖或总糖提取液的浓度，mg/mL； V──还原糖或总糖提取液的总体积mL； m──样品重量，g； 1000──mg换算成g的系数 思 考 题 1. 比色时为什么要设计空白管？ 2.总糖和还原糖的提取有何不同 3. 若以葡萄糖标准曲线，测定1mg/ml麦芽糖（按还原糖测定）所测的浓度会有何不同？ 4. 如何测定可乐溶液中还原糖的浓度 * 麦芽糖：由一分子α-D-葡萄糖的半缩醛羟基与另一分子α-D-葡萄糖C4上的醇性羟基缩去一分子水而通过α-1，4糖苷键结合而成的 乳糖：由一分子β-D-半乳糖的半缩醛羟基与另一分子葡萄糖C4上的醇性羟基缩去┅分子水通过β-14糖苷键结合而成 蔗糖： 由一分子α-D-葡萄糖和一分子α-D-果糖通过两个半缩醛羟基缩去一分子水而成 由于麦芽糖和乳糖都保留了半缩醛羟基结构，因此都具有还原性是还原二糖； 而蔗糖在缩合过程中丧失了半缩醛羟基，不具有还原性是非还原糖 * 麦芽糖：由┅分子α-D-葡萄糖的半缩醛羟基与另一分子α-D-葡萄糖C4上的醇性羟基缩去一分子水而通过α-1，4糖苷键结合而成的 乳糖：由一分子β-D-半乳糖的半縮醛羟基与另一分子葡萄糖C4上的醇性羟基缩去一分子水通过β-14糖苷键结合而成 蔗糖： 由一分子α-D-葡萄糖和一分子α-D-果糖通过两个半缩醛羥基缩去一分子水而成 由于麦芽糖和乳糖都保留了半缩醛羟基结构，因此都具有还原性是还原二

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